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1、植物生理学实验目 录实验 01 植物细胞渗透势的测定（质壁分离法）1实验 02 植物组织水势测定（小液流法）4实验 03 植株中硝态氮的测定（比色法）7实验 04 植物光合速率的测定（改良式半叶法）9实验 05 植物呼吸速率的测定（小篮子法）11实验 06 根系活力的测定（TTC 法） 13实验 07 叶绿素的提取、分离及性质15实验 08 叶绿素 a 和 b 的含量的测定 18实验 09 植物溶液培养和缺素培养20实验 10 植物中淀粉含量的测定23实验 11 植物中粗纤维含量测定24实验 12 高温和低温对植物的伤害26实验 13 植物生长调节剂对植物插条不定根发生的影响28实验 14 过
2、氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）30实验 15 温度和激素对果品采后生理的影响32实验 16 N 素营养水平对植物体内代谢的影响 34实验 17 植物组织中丙二醛含量的测定35实验 18 谷物淀粉含量的测定（旋光法）37参考文献39植物生理学实验讲义- 1 -实验 01 植物细胞渗透势的测定（质壁分离法）植物细胞的渗透势主要取决于液泡的溶质浓度，因此又称溶质势。渗透势与植物水分代谢、生长及抗逆性等有密切关系。已知在干旱、盐渍等条件下，一些植物常在细胞内主动积累溶质，以降低其渗透势，增加吸水能力，而在一定程度上维持细胞膨压，保障细胞的生长和气孔的开放，这种现象叫做渗透调节作用。渗透调节能力的大
3、小可以用逆境条件下细胞的渗透势的降低值来表示，在水分生理与抗逆性生理研究中经常需要测定。一、原理：植物细胞的渗透势主要取决于液泡的溶质浓度，因此又称溶质势。渗透势与植物水分代谢、生长及抗逆性等有密切关系。已知在干旱、盐渍等条件下，一些植物常在细胞内主动积累溶质，以降低其渗透势，增加吸水能力，而在一定程度上维持细胞膨压，保障细胞的生长和气孔的开放，这种现象叫做渗透调节作用。渗透调节能力的大小可以用逆境条件下细胞的渗透势的降低值来表示，在水分生理与抗逆性生理研究中经常需要测定。二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：洋葱鳞茎、紫鸭跖草、苔藓、红甘蓝或黑藻、丝状藻等。（二）仪器设备：显微镜，载玻片，盖玻
4、片，温度计，尖头镊子，刀片，小培养皿（直径为 6 cm ），试剂瓶，烧杯，容量瓶，量筒，吸管，吸水纸等。（三）试剂：1、1mol/kg 蔗糖水溶液：称取预先在 60-80下烘干的蔗糖 34.2g 溶于 100g 蒸馏水中，即为 1 质量摩尔浓度的蔗糖溶液。2、0.03中性红溶液。3、蔗糖系列标准液：取干燥洁净的小试剂瓶 9 支编号，用 1 mol/kg 蔗糖水溶液依据 C1V1 =C2V2 公式配制 0.30mol/kg、0.35mol/kg、0.40mol/kg、0.45mol/kg、0.50mol/kg、0.55mol/kg 、0.60mol/kg、0.65mol/kg、0.70mol/k
5、g 等一系列不同浓度的蔗糖水溶液（具体范围可根据材料不同而加以调整） ，贮于试剂瓶中，瓶口加塞以防蒸发浓缩。三、实验步骤1、取干燥、洁净的培养皿 9 套编号，将配制好的不同浓度的蔗糖溶液按顺植物生理学实验讲义- 2 -序加入各培养皿，使之成一薄层，盖好皿盖备用。 2、用镊子撕取（或用刀片刮取）供试材料的表皮，大小以 0.5cm2 为宜，迅速分别投入各种浓度的蔗糖溶液中，使其完全浸入，每一浓度 4-5 片。同时记录室温。为了便于观察，可先将切片于 0.03%中性红内染色 5min 左右，吸去水分，再浸入蔗糖溶液中，但如不染色即能区别质壁分离时，仍以不染色为宜。3、5-10 min 后，取出表皮薄
6、片放在滴有同样溶液的载玻片上，盖上盖玻片，于低倍显微镜下观察，如果所有细胞都产生质壁分离的现象，则取低浓度溶液中的制片作同样观察，并记录质壁分离的相对程度。如果在两个相邻浓度的切片中，一个切片没有发生质壁分离，另一个切片发生质壁分离的细胞数超过50，则这两个浓度的平均值为其等渗浓度。每一制片观察的细胞不应少于100 个。检查时可先从中间浓度开始。 在找到上述浓度极限时，用新的溶液和新鲜的叶片重复进行几次，直至有把握确定为止。在此条件下，细胞的渗透势与两个极限溶液浓度之平均值的渗透势相等。 将结果记录于表下表中。 表 5-1 植物细胞渗透势测定记载表实验人 日期 材料名称 实验室温度蔗糖浓度（
7、mol/kg ） 渗透势（ Mpa ） 质壁分离的相对程度（作图表示） 0.30 0.35 0.40 0.45 0.50 0.55 0.60 0.65 0.70 植物生理学实验讲义- 3 -五、结果计算 由所得到的等渗浓度和测定的室温，用下式计算供试溶液的渗透势（s0），即为细胞的渗透势（s）。s（MPa）= s0= -iCRT式中，s0 供试溶液的渗透势，MPa。 i解离系数，蔗糖=1。 C供试溶液的浓度，mol/kg （以水作溶剂）。 R气体常数，0.008314L MPa（molK） 。 T绝对温度，（273+t），K。 思考题某种植物叶片吸水饱和时的渗透势经测定为0.8MPa ，有用质
8、壁分离法测出其渗透势为0.9MPa，请计算质壁分离状态的细胞液体积相当于饱和时的百分数。实验 02 植物组织水势的测定（小液流法）一、原理 当植物组织与外液接触时，如果植物组织的水势低于外液的渗透势（溶质势），组织吸水、重量增大而使外液浓度变大；反之，则组织失水、重量减小而外液浓度变小；若两者相等，则水分交换保持动态平衡，组织重量及外液浓度保持不变。根据组织重量或外液浓度的变化情况即可确定与植物组织相同水势的溶液浓度，然后根据公式计算出溶液的渗透势，即为植物组织的水势。溶液渗透势的计算： s = - iCRT式中： s 溶液的渗透势，以 MPa 为单位。 R 气体常数，为 0.008314MP
9、aL/（molK）。 T 绝对温度，即 273+ t。 C 溶液的质量摩尔浓度，以 mol/kg 为单位。 i 为解离系数，CaCl 2 为 2.6。 二、实验目的植物生理学实验讲义- 4 -了解植物组织中水分状况的另一种表示方法及用于测定的方法和优缺点。三、实验材料、试剂与仪器设备 （一）实验材料 植物叶片或洋葱鳞茎。 （二）试剂 1、甲烯蓝粉末。 2、CaCl 2 溶液：包括 0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45 mol/kg 8 种不同质量摩尔浓度的溶液。 （三）仪器设备 大试管 8 支，小试管 8 支，青霉素小瓶 8 支，移液管（5ml），毛细
10、吸管 8支，培养皿，打孔器，剪刀 l 把，镊子 1 把，解剖针 1 支。 四、实验步骤 1、 编号贴标签 取干燥洁净的大试管 8 支，小试管 8 支，青霉素小瓶 8 支，毛细吸管 8 支，编号贴标签，按序号排好。 2、打取、浸泡叶片 取待测样品的功能叶数片，用打孔器打取小圆片约 60片，放在培养皿中，混合均匀。用镊子分别把 5-8 个小圆片放到盛有 4 ml 不同质量摩尔浓度 CaCl 2 溶液的青霉素小瓶中，浸没叶片，盖紧瓶塞，放置 30 min，并不断轻摇小瓶，以加速水分平衡（如温度低时可延长放置时间）。 3、染色 到预定时间后，用解剖针尖蘸取微量甲烯蓝粉末，加入各青霉素小瓶中，并摇动，使
11、溶液染色均匀。 4、测定 把试管中的不同浓度的系列标准液分别倒入相同编号的小试管中，用毛细吸管吸取相同编号青霉素小瓶内的有色溶液少许，插入相同编号的小试管溶液中部，轻轻挤出有色溶液一小滴，小心取出毛细管（勿搅动有色液滴），观察有色液滴的升降情况，并记录于表中。若有色溶滴上升，表示浸过叶片的溶液浓度变小（即植物叶片组织中有水排出），说明叶片组织的水势大于该浓度溶液的溶质势；若有色液滴下降，则说明叶片组织的水势小于该浓度的溶质势；若有色小液滴静止不动，说明叶片组织的水势等于该浓度溶液的溶质势。若在前一浓度溶液中下降，而在后一浓度中上升，则植物组织的水势可取二种浓度溶液的溶质势的平均值。 植物生理学实验讲义- 5 -分别测定不同浓度中有色液滴的升降，找出与组织水势相当的浓度。记录实验时的温度，根据原理中公式计算出组织的水势。 小液流法现象观察记载表 CaCl2 浓度（ mol/kg ）0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45小有色液滴移动方
