溶血率实验方案

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1、溶血率测定实验方案1. 实验目的考察 XXXX 是否具有溶血反应。2. 实验原理当稀释血液中加入溶血剂后,红细胞溶解并释放出血红蛋白(Hb ) ,血红蛋白与溶血剂中的某些成分结合形成一种血红蛋白衍生物,在特定波长(530550nm)下比色,吸光度变化与稀释液中 Hb 含量成正比,最终显示 Hb浓度。溶血剂配方不同,所形成血红蛋白衍生物不同,吸收光谱不同,一般最大吸收峰接近 540nm。3. 实验材料3.1 受试品受试品 XXXXX 由本公司自制,受试品储备液浓度为 XXX mg/mL。3.2 实验动物SD 大鼠,体重 20020 g,雌雄各半,上海斯莱克实验动物有限责任公司提供,许可证: XX

2、X3.3 实验仪器及试剂试剂:磷酸盐缓冲液(PBS) ,XXX 公司提供;Triton X-100(2%,w/v) ,XXX 公司提供。仪器:离心机: 北京医用离心机厂,型号 :XXX,恒温水浴锅 : 上海跃进医疗器械厂,型号:XXXX。4. 实验方法1. 2%红细胞悬液的制备 取新鲜大鼠血10 mL,10001500r/min 离心10 min,除去上清液,沉淀的红细胞再用 PBS 按上述方法洗涤 3 次,至上清液不显红色为止。将所得红细胞用 PBS 配成 2%的混悬液 (红细胞 2mL,加生理盐水至 100mL),供试验用。2. 实验分为 4 组,每组取 5 个离心管,每组各管分别加入材料

3、 A 0.9 mL (实验组 A) 、材料 B 0.9 mL (实验组 B) 、同批号 PBS 0.9 mL(阴性对照组)和 Triton X-100(2%,w/v ) 0.9 mL(阳性对照组) 。每管加稀释兔血 0.1 mL,轻轻混匀后置 37水浴孵育 1 h,1000r/min 离心 5 min,吸取上清移至 96 孔板,用酶标仪在波长 545 nm 处测吸光度(A)值,取平均值计算溶血率。溶血率: 溶血率 (%)=(实验组 A 值阴性对照组 A 值)/(阳性对照组 A值阴性对照组 A 值)100%。预实验:正式实验之前用紫外分光光度计测定溶血后形成的血红蛋白衍生的最大吸收波长。5 数据处理6 实验结果7 结论

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