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1、几种抗氧化剂含量的测定一、 实验目的1.掌握抗坏血酸（AsA ）含量的测定。二、实验原理抗坏血酸（AsA）测定的原理：（1）AsA 生理生化作用抗坏血酸是植物细胞重要的抗氧化剂，通过清除体内的自由基和活性氧（H 2O2）等，使机体免受氧化损伤。（2）AsA 含量的测定方法a、2, 6- 二氯靛酚滴定法b、2, 4-二硝基苯肼分光光度法c、荧光分光光度法d、近红外分光光度法e、电位滴定法f、钼蓝比色法g、2,2-联吡啶分光光度法（3）二联吡啶法测定 AsA 含量的原理三、实验材料和主要试剂实验材料：菠菜叶片实验试剂：5%TCA 溶液、150mmol/L NaH2PO4(PH7.4)溶液、10%T
2、CA 溶液、44% H3PO4、 4% 2, 2-二联吡啶；3% FeCl 3。四、 实验步骤（一）AsA 含量的测定1、标准曲线的制作配制浓度为 1mmol/L 的 AsA 标准母液，分别配制成 0、0.1、0.2 、0.3、 0.4、 0.5、0.6、 0.7mmol/L 的 AsA 标准液。分别取 0.2ml AsA 标准液，分别加入 0.2ml NaH2PO4（PH7.4）溶液、0.2ml H2O，混匀，30s 后，分别加入 0.4ml 10% TCA 溶液、0.4ml H3PO4 溶液、0.4ml 2, 2-二联吡啶溶液，0.2ml 3%FeCl3 溶液，37，60min ，测A52
3、5nm。以 AsA 浓度为横坐标，以 OD 值为纵坐标，制作标准曲线。2、提取称 2.5g 菠菜叶片 1 份，将样品剪碎加入 10ml 5% TCA, 研磨，15000xg 离心 10min，上清液定容至 25ml。3、测定分别取 0.2ml 上述制备的上清液和去离子水，分别加入 0.2ml NaH2PO4（PH7.4）溶液、0.2ml H2O，混匀，30s 后，分别加入 0.4ml 10% TCA 溶液、0.4ml H3PO4 溶液、0.4ml 2, 2-二联吡啶溶液，0.2ml 3%FeCl 3 溶液，37 ，60min，在 525nm 下测定 OD 值。根据标准曲线计算样品中 AsA 的
4、含量。五、实验结果AsA 标准浓度对应 OD 值表AsA 标准浓度0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7OD 值 0 0.102 0.239 0.366 0.501 0.655 0.782 0.9AsA含 量 标 准 曲 线 y = 1.3095x +0.0012R2 = 0.980800.20.40.60.810 0.5 1AsA浓 度 (mmol/L)OD值系 列 1线 性 (系 列1)抗氧化剂含量（ug/gFW）抗氧化剂浓度（ ug/ml）*提取液体积（ml）/ 样品的重量（g）抗氧化剂浓度（ug/ml）= （3.214*17.613+0.0012 ）/1.3095=
5、43.23ug/ml抗氧化剂含量（ug/gFW）43.23*25ml/2.500g=432.3（ug/gFW）六、分析和讨论1. 抗氧化剂由植物体合成，待植物被破坏易被氧化，在实验中需迅速操作，防止抗氧化剂被氧化。2. 还原型谷胱甘肽是植物细胞内另一种重要的抗氧化剂。它含有活性的巯基，极易被氧化。GSH 可以预知不饱和脂肪酸生物膜组分及其他敏感部位的氧化分解，防止膜脂过氧化，从而保持细胞膜系统的完整性，延缓细胞的衰老和增强植物抗逆性。3. 活性氧对许多生物功能分子有破坏作用，包括引起膜的过氧化作用。其中，植物体中也有防御系统，降低或消除活性氧对膜脂的攻击能力，即为抗氧化剂。这些抗氧化剂是天然的非酶自由基清除剂。
