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1、1脑低氧预适应及其机制关键词 低氧预适应；脑缺氧；脑保护 摘要 预先反复短暂低氧预适应可使脑组织产生低氧适应，可使其在后续的长时间缺氧中得到保护。脑低氧预适应是脑抗缺血或缺氧的一种内源性保护现象。目前对脑低氧预适应的机制尚未最后阐明，文章对脑低氧预适应现象及其可能机制的研究进展进行了综述。低氧预适应(hypoxic preconditioning)是指 1 次或多次短暂、非致死性低氧刺激后，机体获得的对更严重甚至致死性缺血或缺氧的耐受性。预适应是机体抗缺氧或缺血的一种内源性保护现象，它不仅存在于多种动物的心脏，而且也存在于肝、肾和脑等多种组织、器官和细胞中1，2。目前关于脑低氧预适应现象及其机
2、制的报道2较少，深入研究脑低氧预适应机制并探讨其临床应用价值，对治疗脑血管病很有意义。 1 脑低氧预适应现象1986 年 Schurr 等3就发现大鼠海马脑片低氧 5 min 后，其诱发电活动在随后长期低氧作用后仍能恢复，而对照组则不能。Rising 等4事先给小鼠经90、120 和 150 s3 次低氧(4.5%O2)预处理后，在致死量低氧作用下的存活时间由对照的(1084) s 延长到(40342) s。Vannucci 等5 在 37下低氧(8%O2)预处理出生 6 d 的大鼠 2.5 h，24 h 后结扎单侧颈总动脉并且低氧(8%O2)处理 2.5 h，在出生第 30 天经神经病理分析
3、发现，低氧预适应组的 14 只大鼠中仅 6 只出现囊状梗死，而未预适应组的13 只大鼠都出现了梗死。2 脑低氧预适应的可能机制32.1 低氧诱导因子 -1低氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1，HIF-1)是一种随着细胞内氧浓度变化而调节基因表达的转录激活因子，是由氧调节亚单位 HIF-1和结构亚单位 HIF-1 组成的异二聚体，具有 DNA 结合活性。HIF-1 对低氧诱导基因，如促红细胞生成素、糖酵解酶和血管内皮生长因子等的活化起关键作用。Bergeron 等6通过对新生大鼠脑低氧(8%O2)预处理 3 h 发现，低氧预处理可明显提高HIF-1 和 HIF-
4、1的表达水平。大鼠腹腔内注射 HIF-1 诱导剂氯化钴(CoCl2，60 mg/kg)和去铁铵(desferrioxamine，DFX，200 mg/kg)后 13 h， HIF-1 和 HIF-1 蛋白水平都升高。大鼠经 CoCl2 和 DFX 预处理 24 h 后缺血缺氧可分别较对照组发挥 75%和 56%的脑保护作用。原代培养大鼠皮质神经元剥夺糖氧 30、60、90 和 120 min后，HIF-1DNA 结合活性增高，而预先剥夺糖氧 60 min，48 h 后再剥夺糖氧 90 min，HIF-1 的结合活性反4而降低 7。以上这些研究表明，HIF-1 参与了脑低氧预适应的形成。2.2
5、一氧化氮 一氧化氮(NO) 参与血管舒缩的调节、免疫功能的调制和神经信息的传递，是一种重要的信使物质。NO 是由 L-精氨酸经一氧化氮合酶(NOS)催化生成的。NOS 同工酶分为神经元型 NOS(nNOS)、诱导型 NOS(iNOS)和内皮细胞型NOS(eNOS) 3 种，其中 nNOS 和eNOS 的活性受钙离子调节，合称为结构型 NOS(constitutive NOS， cNOS)。Gidday等8低氧(8%O2)预处理新生 6 d 大鼠 3 h 发现，这种处理可完全抵抗 24 h 后的缺血缺氧性损害。如在新生 6 d 大鼠脑低氧预处理前 0.5 h 腹腔注射非选择性 NOS 抑制剂左旋
6、硝基精氨酸(2 mg/kg)，给药后 0.53.5 h 即可使 cNOS 的活性抑制 67%81%，完全阻断了低氧预适应的保护作用。但是，如果低氧预处理(本身可降低 cNOS 活性 58%81%)前腹腔内注射选择性 nNOS 抑制剂 7-硝基吲唑(40 mg/kg)，则不能影响低氧5预适应引起的脑保护作用，这与给予 iNOS 抑制剂氨基胍(400 mg/kg)的结果相一致。以上结果表明，NO 对低氧耐受的诱导起重要作用。但是，有学者对 nNOS 和 iNOS 是否参与了低氧预适应却提出了质疑，认为只有 eNOS 产生的 NO介导了预适应的保护效应。 2.3 腺苷 腺苷是一种在缺血缺氧时高能磷酸
7、盐分解产生的内源性复合物。腺苷 A1 受体激动剂可以缩小梗死体积，减慢缺血早期的能量代谢，并有利于缺氧预适应后突触功能的恢复 9，而腺苷受体拮抗剂则可以阻止预适应的形成。 Zhang 等10分别采用酶学方法和放射性配体结合方法分析了昆明小鼠腺苷含量和腺苷 A1受体，发现经 4 次低氧预处理组海马腺苷含量明显高于正常对照组和只用 1 次低氧预处理组，而腺苷 A1受体密度低于正常对照组，与仅用 1 次低氧预处理组的相同；4次低氧预处理组海马6、脑桥、延髓等脑区腺苷 A1 受体的亲和力高于正常对照组，表明低氧预处理可以阻止一些脑区内的腺苷 A1 受体密度的进一步下降，使腺苷 A1 受体的亲和力升高。
8、上述结果提示，低氧预适应可使海马腺苷浓度升高，并通过 A1 受体发挥神经保护作用。2.4 兴奋性氨基酸 中枢神经系统内含有大量兴奋性氨基酸(EAA)，几乎所有的神经元都含有谷氨酸受体，药理学上把谷氨酸受体分为 NMDA 受体、AMPA 受体、红藻氨酸受体、代谢型谷氨酸受体和 L-AP4 受体等 5 型，前 3 种都是谷氨酸门控的阳离子通道(离子型受体) ，后2 种受体合称非 NMDA 受体。任何引起 EAA 浓度异常增高的病理变化都会引起兴奋毒性。EAA 与低氧预适应是否有关尚待进一步研究证实。Nakata 等11用微透析测定方法表明，低氧预处理并不改变脑内包括 EAA 在内的任何氨基酸含量，
9、从而认为预处7理导致的低氧耐受与 EAA 无关。Xie 等12用小鼠研究外源离子型 NMDA 受体激动剂天门冬氨酸和抑制剂氯氨酮对低氧预适应的效应，并用高效液相色谱法测定低氧预处理时小鼠整个大脑和不同脑区内源性 EAA(天门冬氨酸和谷氨酸)浓度的变化，结果发现，天门冬氨酸和氯氨酮分别显著地缩短和延长了小鼠的标准耐受时间；缺氧 1次后 EAA 的浓度升高，而 4 次缺氧后预适应 EAA 浓度保持不变，甚至下降。这表明离子型 NMDA 受体的激活不利于低氧预适应的形成，而抑制其受体则有利于低氧预适应的形成；EAA 的降解或失活对小鼠低氧耐受的形成可能有益。 2.5 肿瘤坏死因子 - 和神经酰胺神经
10、鞘磷脂的代谢产物神经酰胺(ceramide)是肿瘤坏死因子-(TNF-)介导的众多效应中的第二信使。Liu 等13对培养大鼠皮质神经元的研究发现，低氧预处理有保护作用，这种保护作用可被 TNF- 预处理所替代，TNF-中和抗体可削弱此保8护作用。低氧预适应和 TNF- 预处理可使细胞内神经酰胺水平升高 23 倍，与耐受状态一致。烟曲霉毒素 B1 是一种神经酰胺合酶抑制剂，可减轻神经酰胺的上调。如在缺氧损伤前将 C2-神经酰胺加入培养基中可模拟低氧预适应的效应。上述结果表明，低氧预适应是通过 TNF- 触发而合成神经酰胺所介导的。Chen 等14 在结扎出生 7 d 大鼠右侧颈总动脉的同时低氧(
11、8%)预处理 2 h，30 min 后心室内注射 C2-神经酰胺 (150 mg/kg)，5 d 后测定梗死体积，发现 C2-神经酰胺可使缺血缺氧引起的大脑损伤 (梗死体积)较对照组缩小 45%65%，且 Bcl-2 和 Bcl-xl水平升高，TUNEL 阳性细胞数明显减少，表明神经酰胺对未成熟大鼠大脑有神经保护作用。因此认为，神经酰胺参与了低氧预适应的形成。2.6 自由基及其清除系统自由基是具有未配对电子的原子或原子团。脑缺血缺氧时，活性氧产生过多，自由9基生成，细胞膜磷脂受其攻击导致脂质过氧化，细胞膜流动性降低、通透性增高，线粒体肿胀，溶酶体受损并释放等一系列变化。Duan 等15比较自由
12、基清除系统的变化发现，与未预处理组相比，仅低氧处理 1 次组整个脑区的超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶的活性明显降低，而海马脂质过氧化物的浓度明显升高。但是经低氧处理 4 次后，它们的水平趋向于恢复至正常对照组水平，提示氧自由基和它们的特异清除酶参与了低氧耐受形成。Rauca 等16对成年雄性 Wistar 大鼠作低氧预处理(9%O2，91%N2)1 h 发现，可阻止戊四氮的致痫作用，而用自由基清除剂PBN 能阻止这种低氧预适应的保护作用。Garnier 等17事先用低氧(4%O2)处理沙土鼠后恢复常氧 48 h 或 7 d，发现海马 MnSOD 有渐进而持续的表达。以上研究表明，
13、自由基及其内源性清除酶系统参与了低氧预适应的形成和发展。2.7 其他机制 10预适应可以降低细胞能量代谢。有实验表明，抑制线粒体复合物、可以形成预适应，并可试用于提高机体的缺氧耐受能力18。低氧预适应引起的神经保护作用可以被放线菌酮( 一种蛋白合成抑制剂) 和放线菌素 D(一种 RNA合成抑制剂)所抑制，表明在低氧预适应中有新的基因表达产物形成19。热休克蛋白(HSP)是应激反应蛋白家族中的一员，Wada 等20 用高温(41)预处理 15 min 和低氧(8%)预处理新生大鼠 3 h，24 h 后予缺血处理，发现高温和低氧预处理后都不检测到 HSP72，只是缺氧缺血损害本身可诱导背侧纹状体、
14、丘脑(轻度)和海马 HSP72 的表达，因此认为 HSP72 似与耐受无关。Garnier 等17 也发现，沙土鼠低氧预处理后海马未见 HSP72 表达。星形细胞则参与细胞间液中 K+代谢的调节和利用，维持神经元生存微环境的稳定，分泌神经营养因子，如神经生长因子，从而参与了预适应保护机制。Garnier等17用免疫组化和免疫印迹法检测胶质纤维酸性蛋白，并用免疫组化检测 isole11ctin B4 的表达，结果表明沙土鼠低氧处理与小胶质细胞激活无关，而星形细胞却明显被激活。3 脑低氧预适应的应用前景虽然脑低氧预适应的机制尚不十分清楚，但是预适应的效应提示脑组织具有自身保护机制。如能对脑低氧预适
15、应过程中产生的某些物质进行分离、纯化，试用于卒中和其他缺血缺氧性疾病的治疗中，也许将提高脑神经元等组织对缺血缺氧的耐受性，延长治疗时间窗，减轻后遗症，并为脑损伤等疾病的防治提供新的选择。 参 考 文 献1 Webster KA, Discher DJ, Bishopric NH. Cardioprotection in an in vitromodel of hypoxic preconditioning. J Mol Cell Cardiol, 1995, 27(1): 453-458.122 Heurteaux C, Lauritzen I, Widmann C, et al. Essen
16、tial role of adenosine, adenosine A1 receptors, and ATP-sensitive K+ channels in cerebral ischemic preconditioning. Proc Natl Acad Sci USA, 1995, 92(10): 4666-4670.3 Schurr A, Reid KH, Tseng MT, et al. Adaptation of adult brain tissue to anoxia and hypoxia in vitro. Brain Res, 1986, 374(2): 244-248.4 Rising CL, DAlecy LG. Hypoxia-induced increa
