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1、锦州医科大学硕士研究生学位课程考试试卷分子生物学实验技术科目试卷 考试时间：60 分钟 考生须知：1. 客观题答案必须涂在答题卡上，主观题答案必须写在答题纸上，写在本试卷上无效。2. 考试结束后，请将试卷连同答题卡及答题纸一起上交。一、 选择题（单选，每题 2 分，共 25 题，总计 50 分）1、构建真核细胞表达载体时不需要的顺式元件是 ( C )A. 启动子 B. 筛选标记 C. SD 序列 D. 加尾信号 E. 增强子2、人体的 DNA 带什么电荷？ ( C )A. 正电荷 B.不带电荷 C.负电荷 D. 不确定 E.因不同个体而不同3、最早构建的质粒载体是 ( B )A. pUC B.
2、 pBR322 C. pUR278 D. pGPD-2 E. 柯斯质粒4、转基因动物制备时，能使目的基因表达不影响邻近基因表达的元件是 ( C ) A. 启动子 B. 增强子 C. 绝缘子 D. 沉默子 E. Kozak 序列5、 PCR 引物设计时，按经验，引物自身存在的连续互补序列一般不超过 ( A )A. 3bp B. 5bp C. 7bp D. 9bp E. 10bp6、双脱氧合成终止法测 DNA 序列时，加 A 体系中所得到的 DNA 片段都是以哪个核苷酸结尾 ( A )A. A B. C C. G D. T E. U7、原核细胞 mRNA 与核糖体特异结合的序列称为 ( C )A.
3、 Kozak 序列 B. 启动子 C. SD 序列 D. 起始密码 E. 帽子结构8、与分泌表达相关的元件是 ( C )A. 启动子 B.核糖体识别位点 C. 信号肽序列 D. 报告基因 E. 加尾信号9、能检测不同细胞表达区别的 PCR 技术是 ( B )A. 彩色 PCR B. 差异显示 PCR C. 原位 PCR D. 不对称 PCR E. 定量 PCR10、人类基因组计划是哪年完成的 ( E )A. 1985 B .1990 C. 1995 D. 1997 E. 200311、 PCR 引物设计时，与非扩增区的同源性不能超过 ( C )A. 50% B. 60% C. 70% D. 8
4、0% E. 90%12、能检测目的基因片段缺失的 PCR 方式为 ( B )A. 筑巢 PCR B. 多重 PCR C. 原位 PCR D. 不对称 PCR E. 反向 PCR13、在一个遗传位点上具有一个以上的等位基因，在群体中的出现频率高于多少时可称为一个多态性位点 ( A )A .1% B .5% C. 10% D. 15% E. 20%14、基因工程中容量最大的载体是 ( E )A. 质粒 B. 噬菌体 C. 病毒 D. 粘粒 E. 酵母人工染色体15、 PCR 引物设计时，其长度应在多少个碱基对范围内 ( D )A. 515 B. 1020 C. 1520 D. 1530 E. 20
5、3016、分泌表达时，在目的蛋白的 N 端融合一段 ( B )A. 细胞内源蛋白 B. 信号肽 C. 序列标签 D .分子伴侣 E. 内含子17、可以产生大量单链 DNA 的 PCR 技术称作 ( B )A. 共享引物 PCR B. 不对称 PCR C. 彩色 PCR D.定量 PCR E. 差异显示 PCR18、基因工程中使用最广泛的基因载体是 ( A )A. 质粒 B. 噬菌体 C .病毒 D. 穿梭质粒 E. 粘粒19、 PCR 引物设计时，G+C 的含量应在 ( E )A .1020% B. 1525% C. 3050% D. 4050% E. 4060%20、 DNA 的二级结构是:
6、 ( E )A. -螺旋 B.-折叠 C.超螺旋结构 D.-转角 E.双螺旋结构21、 DNA 完全水解后的产物是： ( C )A.脱氧核糖 B.脱氧核糖和碱基C. 脱氧核糖、碱基和磷酸 D.脱氧核糖和磷酸E.碱基和磷酸22、大部分真核细胞 mRNA 的 3末端都具有： ( A )A.多聚 AB.多聚 U C.多聚 TD.多聚 C E.多聚 G23、 DNA 的解链温度指的是： ( B )A.A260 达到最大值时的温度 B.A260 达到最大值的 50%时的温度C.DNA 开始解链时所需要的温度 D.DNA 完全解链时所需要的温度 E.A280 达到最大值的 50%时的温度24、 mRNA
7、分子中与 20 种氨基酸相对应的密码有： ( C )A.64 种 B.63 种C.61 种D.60 种E.20 种25、下列几种 DNA 分子的碱基组成比例不同，哪一种 DNA 的 Tm 最低？ ( D )A.DNA 中 A-T 占 15%B.DNA 中 G-C 占 25%C.DNA 中 G-C 占 40% D.DNA 中 A-T 占80% E.DNA 中 G-C 占 55%二、名词解释（每题 3 分，共 5 题，总计 15 分）1、引物 2、TaqDNA 聚合酶 3、退火 4 启动子 5、DNA 变性1、 引物：是一种与 DNA 模板链互补的线性核苷酸变短，其 3末端为游离的-OH，细胞内复
8、制所需的引物是一小段 RNA。催化游离 dNTP 之间相互聚合。2、 TaqDNA 聚合酶：从一种嗜热菌株中分离得到的耐热的 DNA 聚合酶。3、 退火: 热变性的 DNA 经缓慢冷却后即可复性，这一过程成为退火。4、 启动子：是位于转录起始点附近，且为转录所必需的序列元件。5、 DNA 变性：当 DNA 收到某些理化因素作用时，DNA 双链互补碱基对之间的氢键和相邻碱基之间的堆积力受到破坏，DNA 分子被解开成单链，逐步形成为无规则线团的构象，不涉及核苷酸间共价键的断裂。三、简答题（共 2 题，总计 15 分） 1、总 RNA 提取后，如何鉴定 RNA 的纯度，至少写出两种方法。(1)紫外分
9、光光度法：先通过 A260 与 A280 的比值判断核算的纯度，纯 RNA 的 A260 与 A280的比值等于 2.0，比值升高或降低均表示样品不纯。 (2)琼脂糖凝胶电泳法：基因组 DNA 的分子量远远大于 RNA，两者之间电泳迁移率存在很大差别，用荧光染料 EB 为示踪剂的 AGE 即可观察到 RNA 分子中是否含有 DNA，细胞 RNA 的琼脂糖凝胶电泳一般可见三条条带，条带模糊比例不合适及弥散明显说明 RNA 有严重降解。2、 PCR 的基本原理和基本步骤，你知道有几种 PCR?（至少写出两种）（一） 、基本原理以待扩增的 DNA 分子为模板，以一对人工合成的、分别与模板的 5端和
10、3端互补的单链寡核苷酸作为引物，在耐热 DNA 聚合酶催化下，按照半保留复制的原则合成两个子代DNA；接着以子代 DNA 为模板再次合成，如此反复循环十数次，最终将原始模板放大数百万倍。 （二） 、PCR 的基本步骤 1.反应体系：包括模板 DNA，耐热 DNA 聚合酶，两种引物， 4 种 dNTP 和含有镁离子的缓冲液。 2.反应过程 (1)变性:将反应体系加热加热到 9495 度，持续 30 秒左右，使待扩增 DNA 完全解链成单链。(2) 退火：使温度迅速下降到适宜温度并维持 30 秒，使引物与模板 DNA 两条链的 3端互补配对。退火温度由引物 Tm 决定，一般比引物的 Tm 低 5
11、度，其范围常在 5568 度。(3)延伸：将反应体系温度升高到 72 度，此时 DNA 聚合酶将以单链 DNA 为模板，将单核甘酸逐个添加到引物的 3端，使新链不断延长，直至合成结束。 （三） 、PCR 种类：反转录 PCR，定量 RT-PCR，实时荧光定量 PCR，多重 PCR,巢式 PCR,反向PCR,原位 PCR四、论述题（每题 10 分，共 2 题，总计 20 分）1、逆转录聚合酶链反应体系中需要加入哪些试剂，它们有何作用？（1 ） 、RNA 提取试剂：迅速破碎细胞并抑制细胞内 RNase 的同时，使核蛋白复合物变性，释放 RNA。 （2 ） 、反转录酶：以 mRNA 为模板合成 cD
12、NA。（ 3） 、第一链合成 cDNA。 （4 ） 、RT-PCR 引物：催化游离 dNTP 之间相互聚合。 （5 ） 、dNTP ：为扩增 DNA 的原料。在高热条件下，催化聚合反应。2、人类基因组提取过程中，需要哪些基本试剂，它们作用如何？SDS 蛋白酶法：主要用于提取动物组织细胞的基因组 DNA。 （1 ） 、首先利用含有 SDS、蛋白酶 K 等成分的 DNA 抽提缓冲液作用于组织匀浆液，以充分裂解细胞，破坏染色体结构，并使组蛋白及其他胞内蛋白质变性、降解，释放出游离的DNA；（ 2） 、用酚/氯仿、氯仿/异戊醇等有机溶剂依此抽提，除去水相中的蛋白质、酚等杂质； （3 ） 、最后以乙醇或异丙醇沉淀水相即可得到较纯的基因组 DNA。抽提缓冲液中的 RNA 酶可降解胞内 RNA，乙二胺四乙酸（EDTA ）则能有效抑制 DNA 酶的活性，防止 DNA 的降解。CTAB 法与 SDS 蛋白酶法提取 DNA 的过程相似。
