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1、1肿瘤坏死因子受体 1 的信号传导与肿瘤的关系【摘要】 目的：研究 1-(5-溴阿魏酰基)-4-苄基哌嗪盐酸盐类似物(BFP， L19)在体外清除羟自由基(OH)的活性。方法：采用邻二氮菲-Fe2+氧化法测定 BFP、阿魏酸(FA)、抗坏血酸(Vc)在体外对Fenton 反应产生OH 的清除能力，计算表观清除率(CL)。结果：L5的最大OH 表观清除率(CLmax)最大，L8 最小， L1、L3、L5、L7的 CLmax 都比 FA、 Vc 大。结论：BFP 苄基苯环上 2-Cl、3-Cl、2-CH3、4-CH3、3-OCH3 取代，可增强体外清除OH 活性；3-CH3 取代，体外清除OH 活
2、性基本不变； 2-OCH3、4-OCH3 取代，体外清除OH 活性降低。 【关键词】 阿魏酸；羟自由基；Fenton 反应Abstract Objective: To study hydroxyl radical(OH)scavenging activities in vitro of 1-(5-bromo feruloyl)-4-benzyl piperazine hydrochloride analogs(BFP，L19). Methods: The OH scavenging activities in vitro of BFP, ferulic acid(FA)and L-ascorb
3、ic acid(Vc)were analysed through 1, 10-phenanthroline-Fe2+ detection system. The OH clearance percentage(CL)was calculated. Results: L5 had the highest OH maximum clearance percentage(CLmax). L8 had the 2lowest CLmax. L1, L3, L5 and L7 had higher CLmax than FA and Vc. Conclusion: Substitutes on benz
4、al benzene ring of BFP have different effects on OH scavenging activity in vitro. 2-Cl,3-Cl,2-CH3,4-CH3 and 3-OCH3 may enhance the activity. 3-CH3 may not change the activity. 2-OCH3 and 4-OCH3 may reduce the activity.Key Wordsferulic acid；hydroxyl radical；Fenton reaction阿魏酸(FA)属于酚类抗氧化剂，是当归、川芎、升麻、木贼
5、等中药的活性成分1 ，也可从米糠、小麦、甘蔗、玉米、甜菜2 等谷物提取获得。FA 衍生物具有抗炎、抗脂质过氧化、清除羟自由基(OH)、抗肿瘤、降血糖、调节 DNA 损伤 3,4等药理作用。OH 是活性氧自由基中最活泼、毒性最强的一种，可直接导致 DNA 等生物大分子的破坏而引发一系列疾病。细胞在有氧代谢过程中，可通过多种途径产生OH，机体清除OH 的活性物质不足将导致OH 堆积而引发疾病，所以，研究OH 清除剂具有重要意义。本实验通过测定已合成的 FA 新衍生物在体外清除OH 的活性，筛选出体外清除OH 活性较强的药物，以便进一步进行抗炎或抗氧化动物模型药理研究。31 材料与方法1.1 仪器与
6、试剂Thermo Labsystems Multiskan Spectrum 酶标仪(Labsystems 公司，芬兰)；1-(5-溴阿魏酰基)-4-苄基哌嗪盐酸盐类似物(BFP，L19，汕头大学医学院化学教研室合成，通过MS、 1HNMR、IR 结构鉴定，图 1，表 1)；抗坏血酸(Vc，上海国药集团化学试剂有限公司，中国)；七水合硫酸亚铁(广州化学试剂厂，中国)；体积分数 30的 H2O2(上海凌峰化学试剂厂，中国 )；其它试剂均为国产分析纯。表 1 BFP 的物理性质（略）1.2 BFP 体外清除OH 活性研究采用邻二氮菲-Fe2+ 氧化法测定 BFP、FA、Vc 在体外对OH 的清除能
7、力，实验原理：Fenton 反应产生的OH 将邻二氮菲-Fe2+氧化为邻二氮菲-Fe3+，使邻二氮菲-Fe2+ 在 536nm 的吸光度(A)降低，体系中先加入OH 清除剂，A 降低幅度变小，从而通过计算表观清除率(CL)表达药物清除OH 的能力5,6 。FA、Vc 作为阳性对照。BFP 、FA 、Vc 分别采用体积分数 60%的乙醇、乙醇、水作为溶剂。各药设 6 个浓度，按表 2 的顺序与体积加样于 1.5mL EP 管中，全部试剂加完后离心 6s，(371) 水浴 1h，吸取 250L反应4终液，加至 96 孔板中，酶标仪上测定 536nm 吸光度。表 2 测定清除OH 活性操作步骤（略）
8、按下式计算 CL：CL=(A 药物-A 药物参比)-(A 损伤-A 空白)A 未损-A 损伤100%1.3 统计学处理统计分析采用 SPSS 16.0 软件,用 SNK 检验比较各药物最大OH表观清除率(CLmax) 间的差异，检验水准 =0.05。2 结果BFP、FA、Vc 的 CL 随浓度变化的关系见表 3；各药物 CLmax的 SNK 检验数据见表 4。L5 的 CLmax 最大，L8 最小，L1、L3、L5、L7 的 CLmax 都比 FA、Vc 大。表 3 BFP 体外清除OH 活性 CL 数据（略）表 4 BFP CLmax 的 SNK 检验（略）3 讨论有报道，温度对 Fento
9、n 反应影响较大7 ，故应保持一致的加样间隔时间，水浴 1h要严格计时，设计药物参比组的作用是5消除药物溶剂及颜色对测定结果的影响。以 L4(R=H)为参照物，BFP 体外清除 OH 活性的构效关系可归纳为：苄基苯环上 2-Cl、3-Cl 、2-CH3 、4-CH3 、3-OCH3取代，可增强体外清除OH 活性；3-CH3 取代，体外清除OH 活性基本不变；2-OCH3 、4-OCH3 取代，体外清除OH 活性降低。从苄基苯环上取代位置分析，2、4 位取代既可增强也可降低体外清除OH 活 性，3 位取代体外清除 OH 活性增强或不变。从取代基的电子效应分析，-CH3 作为弱供电子基，引入苄基苯
10、环后，目标化合物活性增强或不变；-Cl 具有吸电子诱导效应和供电子 p-共轭效应，引入苄基苯环后，活性上升；-OCH3 同样具有吸电子诱导效应及供电子共轭效应，引入苄基苯环后，能增加苄基的次甲基电荷密度的 2 或 4 位-OCH3 ，降低了清除OH 活性，而减少苄基的次甲基电荷密度的 3 位-OCH3 ，增加了清除OH 活性。2-Cl、3-Cl 、2-CH3 、4-CH3 、3-OCH3 取代物可进一步进行抗炎或抗氧化动物模型药理研究。【参考文献】1Lu GH, Chan K, Leung K, et al. Assay of free ferulic acid and total ferul
11、ic acid for quality assessment of 6Angelica sinensisJ. J Chromatogr A, 2005, 1 068: 209-219.2Ou S, Luo Y, Xue F, et al. Seperation and purification of fe-rulic acid in alkaline hydrolysate from sugarcane bagasse by activated charcoal adsorption/anion macroporous resin exchange chromatographyJ. J Foo
12、d Engin, 2007, 78(4): 1 298-1 304.3Hazeldine ST, Polin L, Kushner J, et al. Synthesis and biological evaluation of some analogs of the antitumor agents, 2-4-(7-chloro-2-quinoxalinyl)-oxyphenoxypropionic acid, and 2-4-(7-bromo-2-quinolinyl)-oxyphenoxypropionic acidJ . Bioorg Med Chem, 2005, 13: 1 069
13、-1 081.4Sudheer AR, Muthukumaran S, Kalpana C, et al. Protective effect of ferulic acid on nicotine-induced DNA damage and cellular changes in cultured rat peripheral blood lymphocytes:A comparison with N-acetyl-cysteineJ. Toxicology in Vitro, 2007, 21(4): 576-585.5Wu WM, Long Y, Wang T, et al. Free
14、 radical 7scavenging and antioxidative activities of caffeic acid phenethyl ester(CAPE)and its related compounds in solution and membranes: A structure-activity insightJ . Food Chem, 2007, 105: 107-115.6Zhao G, Xiang Z, Ye T, et al. Antioxidant activities of Salvia miltiorrhiza and Panax notoginsengJ. Food Chem, 2006, 99: 767-774.7Lee C, Yoon J. Temperature dependence of hydroxyl radical formation in the hv/Fe3+/H2O2 and Fe2+/H2O2 systemsJ. Chemosphere, 2004, 56: 923-934.
