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1、1参照 CLSI EP 方案评价直接胆红素试剂分析性能摘要目的 通过应用 CLSI EP 方案分别对国产和进口直接胆红素（DBil）试剂分析性能进行评价，了解国产直接胆红素试剂分析性能能否满足临床需要。方法 在同一台全自动生化分析仪上，同时测定试剂准确度、精密度、最低检测限、线性范围、干扰试验、方法比对实验、稳定性观察等 7 项技术指标。结果 两种试剂准确度测定，其相对偏差10%；批间变异系数小于 4.0%；国产 DBil 试剂线性范围 0.2-595.0mol/L，进口试剂线性范围-0.4-595.7mol/L；国产 DBil 试剂的最低检测限为 0.4mol/L，进口试剂的最低检测限为0.
2、9mol/L；方法比对实验结果 Y0.997X+5.2467，R 20.9996（浓度范围 0.2-595.0mol/L） ；抗干扰能力无明显差异；试剂稳定性相近。结论：国产直接胆红素试剂与进口试剂的分析性能无显著性差异，能满足临床实验室的需要。关键词CLSI EP 方案；钒酸盐氧化法； 直接胆红素；分析性能评价Evaluation of the analytical performance of Direct Bilirubin (DBil) reagents with CLSI EP document Xie Wen Hui.( PingChang District Chinese Med
3、icine Hospital, Ba Zhong 636400,China)【Abstract】 Objective Through evaluate the analytical performance of domestic Direct Bilirubin (DBil) reagents and imported WAKO Direct Bilirubin (DBil) reagents with CLSI document, understanding performance differences of domestic and imported WAKO Direct Biliru
4、bin. Methods On the same automatic biochemical analyzer, determinate the reagents analytical performance at the same time, such as accuracy, precision, minimum detection limit, linear range, anti-interference ability, stability, method comparison. Results Determinate accurate of the two reagents, th
5、e relative deviation 10%; the within run coefficient of variation 4.0%; The linear range of self-made DBil reagent is 0.2-595.0mol/L, and the linear range of imported reagent is-0.4-595.7mol/L) ; The minimum detection limit of domestic DBil reagents was 0.4mol/L, of the import reagents was 0.9mol/L;
6、 the result of the method comparation was Y0.997X+5.2467，R20.9996; there was no significant difference with anti-interference ability; the two reagents had similar stability. Conclusions There was no significant difference of analytical performance with self-made Direct Bilirubin (DBil) reagents and
7、 imported WAKO Direct Bilirubin (DBil) reagents.【key words】CLSI document；Vanadate Oxidizing Method ; Direct Bilirubin (DBil); performance evaluation胆红素是红细胞正常或非正常降解后在内皮系统形成的有机复合物，在临床实验室测定直接胆红素（DBil）主要用于肝细胞损害、胆道阻塞、Dubin-Johnson综合征和Rotor综合2征等疾病的辅助诊断。直接胆红素与总胆红素结合用于鉴别黄疸类型。所谓直接胆红素，即结合胆红素，能溶于水，能直接与重氮试剂起反应产
8、生重氮色素。DBil测定方法主要有重氮测定法和钒酸氧化法，重氮测定方法主要应用是改良J-G 法。1993年日本学者Tokuda发表了血清胆红素的钒酸盐氧化测定法，与传统方法重氮测定法具有良好的相关性。此前国内生化试剂厂家，也对钒酸氧化法直接胆红素测定试剂进行研究开发，但与进口试剂相比较，在试剂性能指标上仍存在较大差异。近来，四川新成生物经过长达7年的自主创新，推出了钒酸氧化法直接胆红素测定试剂盒。我们依照临床和实验室标准协会（Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI）制订的一套评价方案(Evaluation Protocols)，包括E
9、P5-A(临床化学设备精密度性能的评价)，EP6-P （定量分析方法线性的评价） ，EP9-A（用患者样本的方法比较和偏差的估计） ，EP10-A（定量临床检验方法的初步评价） ，现将国产与进口试剂在分析性能方面进行评价。1 材料与方法 1.1 材料1.1.1 国产试剂及配套校准品四川新成生物科技有限责任公司直接胆红素测定试剂（规格 R1 60ml3, R2 45ml1；批号是 0609091；效期是一年） 。1.1.2 进口试剂及配套校准品日本和光（WAKO）直接胆红素测定试剂（批号 AM672 AJ192 效期 2010 年 7 月） 。1.1.3 仪器 奥林巴斯 AU400 全自动生化分
10、析仪1.1.4 质控品：宝灵曼质控品(批号 PU181949、PU181528)；朗道（RANDOX）质控品（批号578UN） 。 1.2 方法1.2.1 测定试剂的试验参数设置 ：按照试剂说明书的要求设置。1.2.2 测定方案 有关精密度、准确度、最低检测限、线性范围、方法比对试验、干扰实验等评价指标参照相关 EP 文件及国内外惯用方法进行。 精密度按EP-5A文件评价 1：取高值和低值的病人混合血清各1份，分批测定DBil 20次，计算批间精密度。取上述高、低值混合血清在暗室中各自分装成20份，并于-20避光冰冻保存。每天取高、低值混合血清各1份，待其在避光状态下完全溶解后测定DBil，计
11、算批间精密度。线性评价按EP-6A文件评价 2：取病人黄疸血清和健康人正常血清标本各1份，分别编为号、 号。将 号高值和号低值分别按3：1、2：2、1：3的比例混合作为 、 、 号。将5个不同浓度的标本随机排列，测定每份标本中的DBil，重复测定4次，取其均值为测定值，与设定值做线性对比。3干扰实验按照CLSI EP-7A文件评价 3：分别对高、低值混合血清加入干扰物做该实验。方法比对试验按CLSI EP-9A 文件评价 4：对40例以上临床样品分别用两种试剂测定，将结果进行数据统计分析，计算其相关系数和回归方程。1.3 统计学处理：数据统计用Excel统计软件进行数据统计。2 结果2.1 准
12、确度：分别用国产试剂和进口试剂测定宝灵曼和朗道质控品，通过对测定结果比较（参见表 1） ，相对偏差满足临床的要求（误差10%） 。表 1：准确度试验结果宝灵曼 PU181528 宝灵曼 PU181949 朗道 578UE均值(mol/L) 靶值(mol/L) 偏差(%) 均值(mol/L) 靶值(mol/L) 偏差(%) 均值(mol/L) 靶值(mol/L) 偏差(%)国产试剂 10.9 10.4 4.81 27.8 27.5 1.09 13.5 13.1 3.10进口试剂 10.8 10.4 3.85 27.9 27.5 1.45 13.4 13.1 2.292.2 精密度：国产试剂和进口
13、试剂分批测定高值混合血清各 20 次（参见表 2） ，批间变异系数（CV%）分别为 3.53%、3.82%；测定低值混合血清时，批间变异系数（CV%）分别为3.75%、4.00%（参见表 2） ，符合临床要求。表 2：精密度试验结果高值混合血清 低值混合血清国产试剂 进口试剂 国产试剂 进口试剂均值(mol/L) 65.2 64.2 2.4 2.5SD 2.30 2.45 0.09 0.01 CV% 3.53 3.82 3.75 4.002.3 最低检测限：以蒸馏水为样本，分别用国产试剂和进口试剂重复测定 20 次，结果为国产 DBil 试剂的最低检测限为 0.4mol/L，进口试剂的最低检测
14、限为 0.9mol/L（参见表 3） 。表 3：最低检测限实验结果国产试剂 和光试剂均值(mol/L) 0.25 0.63SD 0.06 0.10CV% 24.00 15.872.4 线性范围测定：国产试剂线性范围评估时相关方程及相关系数分别为Y0.997X+5.2467，R20.9996（浓度范围 0.2-595.0mol/L） ；进口试剂和线性范围评估时相关方程及相关系数分别为 Y0.9984X+9.5042，R 20.9986（浓度范围-0.4-4595.7mol/L） 。2.5 干扰试验：将混合血清分成若干份，加入不同浓度的干扰物质，测定加入干扰物前后TBil 的浓度，以相对偏差10%作为有明显干扰的评判指标（参见表 4） 。表 4：最低检测限试验结果乳糜（相当 TG 浓度 mmol/L） VitC（g/L） Hb（g/L）国产试剂 35mmol/L 0.5g/L 5.0g/L进口试剂 35mmol/L 0.5g/L 5.0g/L2.6 方法比对实验：国产试剂与进口试剂同时测定临床标本 52 例，将测定结果进行相关回归分析，计算出相关方程和相关系数为 Y1.0014X-2.0832，R 20.9946。2.7 稳定性观察：国产试剂经 14 天热破坏（37）和试剂仓开瓶（4-10
