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1、液相色谱实验一、【实验目的】1了解并熟悉高效液相色谱仪的流程。2掌握液相色谱定性及外标定量方法。3. 了解液相色谱检测器及色谱柱的分类。二、【实验原理】根据液相色谱分离理论：其中 K为分配系数, k为容量因子，Vm。Vs分别为移动相和固定相的体积，p和q分别为组分在固定相和移动相中的重量。苯，萘，联苯，菲分别属于单环，多环及稠环芳烃，且极性强度和分子量均有差别，因此，它们在强极性的流动相与非极性固定相之间的分配系数K就不同，保留时间也就不相同，混合样品因此而得以在色谱体系中被分离开。由于苯，萘，联苯，菲都对紫外波长有吸收，因此选用紫外检测器进行检测。在反相色谱系统里, 固定相是非极性的, 流动
2、相是极性的。在 和相色谱中，固定相的配合 是 长2-18 原子的 。流动相一 为极性有 和 的混合 液。以 极性 的 。 移动相极性的强。保留 之 。反相色谱的分离是以 的 的差 为 的， 极性 ，保留 ，对于同系，其保留 数的 而 。 的组对样品的保留有非 的， 保留 的 是 液的极性的currency1而“currency1的，流动相组一定时, 样品在长 配合 的固定相的保留 。在高效液相色谱中, 定性方法有fifl标 定性，保留 验定性、用不同色谱体系定性、离色谱用其 方法定性。 实验用fifl标 根据保留 定性的方法。定量方法有一 法、”标法、外标法。 实验用外标法定量。标 法外标法是
3、配 fifl度 定量组分的标 液，测量组分的高积，用高积对度标 。 测组分于与标 相同的分“ ，得的积高用法与标 的 对 ，就 得组分的度。数据 理 分用 用色谱 -色谱 理， 以方 的 谱 动积分、定量分及分 动 于一 。方 重 性 。高效液相色谱仪的 ：液器、高 、 度 、进样器、色谱柱、检测器、器、数据 理系统。为 638-50 高效液相色谱仪 仪器流程：液器中 的 液 由高 色谱柱。用 度 时一 用 系统 。样品由进样器 液系统，而色谱柱进行分离。分离的组分由检测器检测， 记录仪数据 理。如果收集馏分进一步分，则在色谱柱一侧样品馏分收集起 。 分功能： 1 高 ：往 式柱塞 ：是一种流
4、 ，这种 的特点是不受整个色谱体系中其余 分阻力稍有变 的，连续 定体积的流动相；更换 方，很适用于 度 ；不足之 是 有脉冲波动，会干扰某些检测器 如差示折光检测器 ，但对紫外检测器的不 2 进样：高 定量进样阀：这是通进样阀 用六通阀 直接向 力系统”进样而不必停止流动相流动的一种进样。色谱柱：目前液相色谱法 用的标 柱 是”径为4.63.9mm，长度为1530cm的直形不锈钢柱。填料颗粒度510m，色谱柱的填料种类 有-C18、-C8、-C6、-NH2、-CN、-SO3-、-COOH、-NR3-、。 3 检测器：紫外光度检测器：紫外光度检测器是液相色谱法广泛使用的检测器，它的用原理是 于
5、被分样品组分对特定波长紫外光的选择性吸收，组分度与吸光度的关系遵守比耳定律。紫外光度检测器有固定波长 单波长和多波长 和 变波长 紫外分光和紫外 见分光 两类。“是一种光路 的紫外光度检测器光路 ：光源1一 用 汞灯，透镜2光源射 的光束变平行光，遮光板3变一对细 的平行光束，分别通测量池4与参比池5，然用紫外 片6 掉非单色光，用两个紫外光敏电阻接惠斯通电桥，根据 差 代表被测样品的度 进行检测。这种检测器的特点： 灵敏度高 最 检测度 达10-9g/ml 对度和流速不敏感， 用于 度 简单 缺点是不适用于对紫外光 不吸收的试样的选用受限 有紫外吸收的 不能用 。液相色谱检测器还包括示差折射
6、率检测器、荧光检测器、库仑检测器。示差检测器是通对 的理 数折光指数的测量 进行检测的，它是一种通用 检测器，但是，它的缺点是对度变 非 敏感，不能用于 度 ，荧光检测器是通检测被测在一定波长紫外光激发“发的荧光量 对被测进行定量的，并不是所有有 都能发荧光，在紫外光 射“会产生荧光的有 ， 多数为环 合， 某些代 、 品、 、 、多 、 类。 生 、 高 点馏分、生 、 和 合。 、【实验】色谱仪： 638-50高效液相色谱仪。色谱柱；spherisorb C18 5um 4.6 200mm 流动相： ： =85：15 流速：1.0ml/min 检测器：UV-254nm 度： 数据 理器：E
7、Chorm98色谱 。苯、萘、联苯、菲的标 液度：0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.3mg/ml. 、【实验步 】 1.分别 适量的苯、萘、联苯、菲标 品于100ml 容量 中，用 解，并 度为标 液。 2. 适量苯、萘、联苯、菲混和样品于100ml容量 中并用 解 度为 fl样。 3.用 0.45m 和 色谱 配 比为85：15的混合 液为流动相。 4.开 开关，然currency1 开紫外检测器， 器及色谱 的电源开关。 5.在 的 板，开动开关。分别 流速参数，度参数， 力“限 ，最“动色的 开关。器定fi在 力表，fl 力 。 6.整检测器波长在254nm ，
8、然定fi点。fl 色谱 中色谱 。 7. 平，用量进样器分别 5ul标 液，由进样阀进样， 同时记录色谱 和保留时间。 8. fl样品5ul进样，记录色谱 和保留时间 。、【数据 理】 1.根据得的标 色谱 与保留时间，在 fl样品谱 中定”个的属。 2.用色谱 通相的色谱积标 的 方程和性相关系数， 3.外标法 fl样品中 测组分的量。 4. 相的色谱 。六【】 1. fl 的 力 ，如有 ， 及时停 ，2.使用量射器时 量的 性， 3.射样品 进样阀时， 射器阀的根 。【 】 1. 实验目的，实验原理，与实验步 。 实验得的数据 进行 理数据。 2. 整， 表 , 原 色谱 。 【 论】 1.根据分离原理的不同，高效液相色谱法 分为类 2.高效液相色谱的定量方法有 种 3.流动相使用前 些 4.流动相还 以为变 的参数
