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1、1紫杉醇脂质体的体内外抗肿瘤作用研究作者：杨爱珍李军徐海军陈惠英【摘要 】 目的 研究注射用紫杉醇脂质体的体外细胞毒作用和体内抗瘤作用及药物毒性。 方法 用 MTT 法检测紫杉醇脂质体对人肺腺癌细胞株 SPC-A1 的体外杀伤作用；建立小鼠实体型S180 肿瘤模型，共 50 只，随机分为 5 组：5%葡萄糖溶液组（空白对照组） 、紫杉醇注射液 10mg/kg 组和 15mg/kg 组，紫杉醇脂质体 10mg/kg 组和 15mg/kg 组，观察各组抑瘤作用和小鼠一般状态的变化，并检测肝功能和骨髓像改变。 结果 紫杉醇脂质体对体外培养的人肺腺癌细胞株 SPC-A1 在浓度为2.5ng/ml、5.
2、0ng/ml 和 10.0ng/ml 时, 其抑制率分别为39.1%、51.9%和 55.8%。体内给予紫杉醇脂质体 10mg/(kgd)，15mg/(kgd)3d，对小鼠 S180 实体型的抑瘤率分别为 31.12%和45.29%，与同样剂量紫杉醇注射液组比较无显著性差异；给药后动物行为和小鼠体重变化率较紫杉醇注射液组接近对照组；骨髓抑制程度亦低于同剂量紫杉醇注射液组。 结论 相同给药剂量下，紫杉醇脂质体的体内外抗肿瘤活性与紫杉醇注射液相接近，但药物毒副反应明显降低。 2【关键词】 紫杉醇脂质体人肺腺癌细胞株小鼠移植性肿瘤抗肿瘤作用A Study on Antitumor Effect of
3、 Liposome Encapsulated Paclitaxel in Vivo and in VitroYANG Ai-zhen1, LI Jun2, XU Hai-jun1, et al.(1.PLA Cancer Center, the 81st Hospital, Nanjing 210002, China；2.Lab of Function, School of Basic Medical Science, Nanjing Medical University, Nanjing 210002, China)Abstract: Purpose To study the cytotox
4、ic effect of paclitaxel liposome for injection in vitro, as well as to observe the antitumor activity and toxicity in vivo. Methods The cytotoxic effect of paclitaxel liposome on human lung adenocarcinoma cell line SPC-A1 in vitro was detected by thiazolyl blue(MTT) assay. The model of mice solid S1
5、80 sarcoma was established and 50 mice were divided into 5 groups: 5% glucose solution group (control group), 10mg/kg and 15mg/kg paclitaxel injection groups, 10mg/kg and 15mg/kg paclitaxel liposome groups. The antitumor activity of each group and general condition of mice were observed, the myelogr
6、am and the hepatic function index of S180 mice were detected. 3Results The inhibitory rate of paclitaxel liposome on human lung adenocarcinoma cell line SPC-A1 was 39.1%，51.9% and 55.8% at the concentrations of 2.5ng/ml, 5.0ng/ml and 10.0ng/ml, respectively. Under the doses of 10mg/(kgd),15mg/(kgd)
7、for 3 days,the inhibitory rate of paclitaxel liposome against xenograft of solid S180 tumor in mice was 31.12% and 45.29%, and there were no significant difference among those of the paclitaxel injection groups. Comparing with the paclitaxel injection groups, the animal behavior and mice weight vari
8、able rate of paclitaxel liposome groups were similar to the control group, and less myelosuppression. Conclusion It suggests that paclitaxel liposome possessed the same anti-tumor activities in vitro and in vivo but its toxicity is lower than that of paclitaxel injection under the same dosage.Key wo
9、rds: paclitaxel; liposome; human lung adenocarcinoma cell; mice transplant tumor; anti-tumor effect由于紫杉醇不溶于水及多种药用溶媒，目前市售紫杉醇注射液均采用由聚氧乙基代蓖麻油和无水乙醇组成的混合溶媒，而聚氧乙基4代蓖麻油对人体具有多种毒性并引发部分病人严重过敏反应，因而使紫杉醇注射液的应用受到了限制1。脂质体是一种新的药物载体，它具有改善药物的溶解性，延长药物的半衰期，提高药物靶向性和降低药物毒副反应等优点2。注射用紫杉醇脂质体（力扑素） ，采用脂质体这一药物新载体，解决了紫杉醇不溶于水的难题
10、，不再使用聚氧乙基代蓖麻油和无水乙醇的混合溶媒，从而避免了因其引起的人体毒性反应和过敏反应。本文研究比较了注射用紫杉醇脂质体和紫杉醇注射液的体内外抗肿瘤效果和相关毒副反应。1 材料与方法1.1 试验药物和试剂注射用紫杉醇脂质体，南京思科药业有限公司生产，规格30mg/瓶，批号：050501；紫杉醇注射液，四川太极制药有限公司生产，规格 30mg/瓶，批号：33050012。注射用紫杉醇脂质体用 10ml 5%葡萄糖溶液稀释，置振荡器上振摇 5min 后使用。紫杉醇注射液用 5%葡萄糖溶液稀释。 RPMI1640 为美国 GIBCO 公司产品，新生牛血清购自杭州四季青公司，噻唑蓝(MTT)为 F
11、luka 公司产品。1.2 细胞株和实验动物5人肺腺癌细胞株 SPC-A1 引自中国科学院细胞所，S180 瘤株引自中国药科大学，均在本科液氮长期冻存，用前复苏，SPC-A1 细胞用含 10%新生牛血清的 RPMI1640 培养液常规培养。S180 瘤株在昆明种小鼠腹腔传代。昆明种小鼠由南京医科大学实验动物中心提供。1.3 MTT 法检测紫杉醇脂质体对 SPC-A1 细胞的细胞毒作用将对数生长期的 SPC-A1 细胞以 5104 个/ml、100l/孔接种于 40 孔培养板中，置于 37、5%CO2 及饱和湿度培养箱中培养，培养 24h 后分别将药物配成 3 个级别成倍比稀释浓度梯度(用 16
12、40培养液稀释)，每一浓度的化疗药物设 4 个平行孔，每孔加入药液100l，另设无药对照组，继续培养 96h 后，加入 5.0mg/ml MTT 20l，再培养 4h，弃培养上清，每孔加 100l 0.04mol/L 盐酸异丙醇，振荡溶解结晶，用酶标仪检测 570nm 处的吸光度值，计算细胞抑制率。相对抑制率=(1-加药组 OD 值/ 对照组 OD 值)100%。1.4 S180 小鼠移植瘤模型的建立及实验分组6用体重 18g22g 的昆明种小鼠 50 只，每只小鼠前肢腋下注射0.2ml S180 瘤株细胞悬液（2107/ml ） ，24h 后按体重随机分为5 组，每组 10 只，雌雄各半。5
13、 组分别为 5%葡萄糖溶液组（空白对照组） ，紫杉醇注射液 10mg/kg 和 15mg/kg 组，紫杉醇脂质体10mg/kg 和 15mg/kg 组。各组给药途径均为尾静脉，给药体积均为 0.2ml。各组于接种后 1、3、5d 分别给予 5%葡萄糖注射液和相应剂量药物。每天观察小鼠的精神、活动状况，并于用药前和接种后第 11d 处死前称体重，经小鼠眼眶静脉丛取血，随即处死动物，解剖剥离肿瘤并称重，另取骨髓进行细胞分类检查，血样用于肝功能检测。根据以下公式计算抑瘤率：肿瘤抑瘤率（1 给药组平均瘤重/对照组平均瘤重）100%1.5 统计学处理检测数据以 xs 表示，统计方法采用配对 t 检验。2
14、 结 果2.1 注射用紫杉醇脂质体对 SPC-A1 细胞的生长抑制作用7由表 1 可见，在紫杉醇浓度为 2.5ng/ml、5.0ng/ml 及10.0ng/ml 时培养 96h，紫杉醇注射液对 SPC-A1 细胞的抑制率分别为 32.5%、48.1%及 51.9%，紫杉醇脂质体分别为 39.0%、51.9% 及55.8%。紫杉醇脂质体的抑制率略优于紫杉醇注射液，但两组间差异无显著性(P0.05)。2.2 动物给药后的反应注射用紫杉醇脂质体给药后动物行为未出现异常，紫杉醇注射液给药后动物先出现短暂的兴奋，随后出现伏卧状，持续约 10min。2.3 注射用紫杉醇脂质体对小鼠实体型 S180 肉瘤的
15、抑瘤作用由表 2 可以看出在 15mg/kg 剂量组，紫杉醇脂质体和紫杉醇注射液具有相似的抑瘤作用，而在 10mg/kg 剂量组，紫杉醇脂质体的抑瘤作用略优于紫杉醇注射液，但无显著性差异(P0.05)。2.4 各组小鼠的肝功能及体重变化本研究的两个剂量，两种剂型的紫杉醇对小鼠肝功能均无明显影响，但从动物体重变化可以看出，紫杉醇脂质体组给药前后动物体重增长较紫杉醇注射液组更接近空白对照组（见表 3、4 ） 。82.5 各组小鼠的骨髓细胞分类检查结果从表 5 可以看出，紫杉醇脂质体组因化疗导致的粒细胞系和红细胞系的抑制程度要轻于紫杉醇注射液组。3 讨 论紫杉醇是目前临床治疗乳腺癌、非小细胞肺癌、卵
16、巢癌等多种肿瘤的最有效的药物之一，但因紫杉醇难溶于水，所以紫杉醇注射液都是以聚氧乙基代蓖麻油和无水乙醇组成混合溶媒制成的注射剂，为预防因上述溶媒引发的过敏反应及超过敏反应，临床上目前普遍采用大剂量激素加组织胺受体拮抗剂作为紫杉醇注射液使用前的常规预处理，即使如此仍然无法杜绝过敏反应和超过敏反应的发生3。此外，因使用预处理方案，限制了伴有糖尿病、高血压和溃疡病的肿瘤病人使用。注射用紫杉醇脂质体是以磷脂、胆固醇等为膜材料，采用特殊制备工艺将紫杉醇包裹在脂质体中，不再使用混合溶媒，避免了因使用混合溶媒而对人体所产生的毒副反应和临床使用的限制。本研究结果表明：相同给药剂量下，注射用紫杉醇脂质体的体内外抗肿瘤效果与紫杉醇注射液相似，表明紫杉醇脂质体并未改变紫杉醇的化学结构，仍然保持了紫杉醇的抗肿瘤活性。体外试验紫杉9醇脂质体对 SPC-A1 细胞的生长抑制作用略优于紫杉醇注射液，其原因可能与脂质体包裹药物后更容易进入细
