《hplc法测定醋酸奥曲肽注射剂中乳酸对映异构体含量》由会员分享，可在线阅读，更多相关《hplc法测定醋酸奥曲肽注射剂中乳酸对映异构体含量（8页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、HPLC 法测定醋酸奥曲肽注射剂中乳酸对映异构体含量 梅芊 刘英 河南省食品药品检验所 摘 要： 目的:建立 HPLC 法和手性分离柱对醋酸奥曲肽注射剂中乳酸 2 种对映异构体进行拆分, 并测定其含量, 以评价产品的安全性。方法:采用手性柱 Phenomenex Chirex 3126 (D) -penicillami (4.6 mm250mm) , 流动相为 2 mmolL-1硫酸铜溶液 (溶剂为 2%异丙醇溶液) , 流速为 1.0 m Lmin-1, 柱温 35, 紫外检测波长为 230 nm。结果:L-乳酸与 D-乳酸峰分离良好;L-乳酸浓度在 0.513.05 mgm L-1范围内线
2、性关系良好 (r=1.000) , 平均回收率为 100.9% (n=9) ;D-乳酸浓度在 4.1941.90gm L -1范围内线性关系良好 (r=0.999 7) , 平均回收率为 99.8% (n=9) ;70 批醋酸奥曲肽注射液的 L-乳酸含量在 0.72.4 mgm L-1, D-乳酸含量在 6.835.9gm L -1;21 批注射用醋酸奥曲肽的 L-乳酸含量在0.83.0 mgm L-1, D-乳酸含量在 4.340.6gm L -1;诺华公司的 1 批醋酸奥曲肽注射液仅检出 L-乳酸, 含量为 2.4 mgm L-1。结论:该方法操作简便、准确度高、灵敏度好, 可用于醋酸奥曲
3、肽注射剂中乳酸 2 种对映异构体的含量测定与质量控制。关键词： 醋酸奥曲肽; 对映异构体; L-乳酸; D-乳酸; 手性柱; 高效液相色谱法; 作者简介：刘英 Tel:18625569135;E-mail:ying_作者简介：梅芊 Tel:18625569115;E-mail:收稿日期：2016 年 11 月 18 日HPLC determination of lactic acid enantiomeric content in octreotide acetate injectionMEI Qian LIU Ying Henan Provincial Institute of Food a
4、nd Drug Control; Abstract： Objective:To establish an HPLC method with a chiral column for enantiomeric separation of lactic acid, assay the content of each enantiomer and evaluate the safety in the octreotide acetate injection.Methods:A Phenomenex Chirex3 126 (D) -penicillami (4.6 mm250 mm) chiral c
5、olumn was adopted.The detection wavelength was set at 230 nm.The mobile phase consisted of 2 mmolL (-1 ) copper sulfate solution-isopropyl alcohol (982) at a flow rate of 1.0 m Lmin-1.The column temperature was set at 35.Results:L-lactic acid and D-lactic acid were well separated.The linear rang of
6、L-lactic acid was 0.51 mgm L-1-3.05 mgm L-1 (r=1.000) , the average recovery was 100.9% (n=9) .The linear rang of D-lactic acid was 4.19gm L -1-41.90gm L -1 (r=0.999 7) , the average recovery was 99.8% (n=9) .The content range of L-lactic acid was 0.7-2.4 mgm L-1 and D-lactic acid was 6.8-35.9gm L -
7、1 in 70 batches of octreotide acetate injection, the content range of L-lactic acid was 0.8-3.0 mgm L-1 and D-lactic acid was 4.340.6gm L -1 in 21 batches of octreotide acetate for injection.Only 2.4 mgm L (-1 ) L-lactic acid was detected in original octreotide acetate injection from Novartis.Conclu
8、sion:The method is simple and easy to operate with high accuracy and sensitivity and which can be use for the determination of two lactic acid enantiomers and quality control in octreotide acetate injection and for injection.Keyword： octreotide acetate; enantiomers; L-lactic acid; D-lactic acid; chi
9、ral column; HPLC; Received： 2016 年 11 月 18 日乳酸 (lactic acid) 是一种具有良好生物相容性的有机酸, 常作为酸味剂和 p H 调节剂应用于食品、化妆品、药品及化学应用中1,3。其分子中含有 1 个手性碳原子, 故存在 L (+) -乳酸和 D (-) -乳酸 2 种对映异构体。L-乳酸在肝脏中可通过 L-乳酸脱氢酶的作用快速代谢为丙酮酸, 但哺乳类动物体内缺乏 D-乳酸脱氢酶2, D-乳酸的代谢是通过 D-乳酸脱氢酶的作用且代谢速率仅为 L-乳酸脱氢酶的 1/53, 若外源性过量摄入 D-乳酸, 可能会对人体代谢有害并造成酸中毒及脱钙4-
10、6。WHO 明确规定, 人体每天摄取的 D-乳酸的量限制在每千克体重在 100 mg 以下, 而不限制 L-乳酸的用量7。奥曲肽 (octreotide) 是由 Bauer 等8于 1982 年合成的一种生长抑素类似物, 为八肽环状化合物。在临床上广泛应用于肢端肥大症、消化道肿瘤等的治疗。目前国内生产的醋酸奥曲肽注射剂主要有醋酸奥曲肽注射液及注射用醋酸奥曲肽 2 种, 两者处方中的辅料均包含乳酸。将醋酸奥曲肽注射剂中乳酸的 2 种对映异构体进行拆分后确定其中 D-乳酸的含量对该制剂的临床使用安全性具有重要意义。采用普通的有机酸色谱柱无法区分乳酸 2 种对映体9, 且使用文献9-14的色谱条件对
11、醋酸奥曲肽注射剂测定时会出现干扰峰, 故本文建立了 HPLC 法, 采用手性色谱柱对 L-乳酸和 D-乳酸进行拆分及定量, 该方法操作简便、重复性好, 可监测该品种中乳酸的添加情况, 确保该产品的安全性。1 仪器与试药Waters 2695 高效液相色谱仪, Waters 2996 二极管阵列检测器及 Waters 2487紫外检测器, Empower 色谱工作站;Sartorius BP211D 电子天平;Millipore 去离子水发生装置 (德国 Merck Millipore) 。色谱柱为手性柱 Phenomenex Chirex 3 126 (D) -penicillami (4.6
12、 mm250 mm) , 固定相为 (D) -penicillami, 填料为 Fully Porous Silica。L (+) -乳酸对照品 (Sigma-alorich, 批号 SLBB4580V, 含量 98%) ;D (-) -乳酸对照品 (Sigma-alorich, 批号 SLBM4484V, 含量 100%) 。醋酸奥曲肽注射液 (2015 年国家评价性抽验样品, 来源于 11 家企业, 70 批次, 规格 1 m L0.05 mg、1 m L0.1 mg、1 m L0.15 mg、1 m L0.2 mg 及 1 m L0.3 mg) ;注射用醋酸奥曲肽 (2015 年国家评价
13、性抽验样品, 来源于 6 家企业, 21 批次, 规格 0.1 mg 及 0.3 mg) ;醋酸奥曲肽注射液 (诺华制药, 批号 S0369, 规格 0.1 mgm L) 。硫酸铜为分析纯, 异丙醇为色谱纯, 水为去离子水。2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱为手性柱 Phenomenex Chirex3126 (D) -penicillami (4.6 mm250 mm) , 固定相为 (D) -penicillami, 填料为 Fully Porous Silica;流动相为 2 mmolL 硫酸铜溶液 (溶剂为 2%异丙醇溶液) , 流速 1.0 m Lmin, UV 检测器, 检测波长
14、 230 nm, 柱温 35, 进样量 10L。2.2 溶液制备混合对照品溶液:精密称取 L (+) -乳酸、D (-) -乳酸对照品适量, 加流动相溶解并稀释制成浓度分别为 2.0 mgm L、30.0gm L 的溶液。供试品溶液:取醋酸奥曲肽注射液原液作为供试品溶液;取注射用醋酸奥曲肽 1瓶, 加水 1 m L 溶解作为供试品溶液。2.3 系统适用性精密量取“2.2”项下混合对照品溶液, 进样 10L, 记录色谱图, 结果色谱图中两种成分出峰顺序依次为 L-乳酸、D-乳酸 (见图 1) , 两峰间分离度大于1.5。2.4 专属性精密量取流动相 10L 进样, 得空白溶剂色谱图;按醋酸奥曲肽
15、注射剂处方量制备空白辅料溶液 (不含乳酸) , 进样 10L 并记录色谱图 (图 2) 。结果表明空白溶剂及辅料对测定均无干扰。图 1 系统适用性试验溶液 HPLC 色谱图 Fig.1 HPLC chromatogram of system suitability test 下载原图1.L-乳酸 (L-lactic acid) 2.D-乳酸 (D-lactic acid) 图 2 专属性试验色谱图 Fig.2 Chromatogram of specificity test 下载原图A.空白辅料 (blank excipient) B.空白溶剂 (blank solvent) 2.5 线性关系
16、考察精密称取 L (+) -乳酸、D (-) -乳酸对照品适量, 加流动相溶解并稀释制成浓度分别为 5.0 mgm L、50.0gm L 的溶液。精密量取该溶液, 逐级稀释成含 L-乳酸浓度为 0.51、1.02、1.52、2.03、2.53、3.05 mgm L;含 D-乳酸浓度为 4.19、8.38、16.76、28.49、33.52、41.90gm L 的系列对照品溶液, 分别进样 10L, 记录色谱图, 以峰面积 Y 为纵坐标, 进样浓度 X (gm L) 为横坐标进行线性回归, 得 L-乳酸的回归方程 (n=6) :D-乳酸的回归方程 (n=6) 为:结果表明, L-乳酸浓度在 0.51 mgm L3.05mgm L 范围内, D-乳酸浓度在4.19gm L41.90gm L 范围内, 均与峰面积的线
