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1、1神经营养素3 重组腺病毒促进脊髓背根神经节的存活作者：朱锦宇，朱庆生，黄耀添，杨浩，李顺利 【关键词】 神经营养素 关键词: 神经营养素;背根神经节; 腺病毒 ;基因治疗 摘 要:目的 观察神经营养素-3（neurotrophin3，NT-3）重组腺病毒（adenovirus vector for NT-3，Ad-NT-3）对脊髓背根神经节（dorsal root ganglia，DRG）细胞存活的促进作用. 方法 原代培养 DRG，加入不同感染增殖率（multiplicity of infection，MOI ）的 Ad-NT-3，观察 DRG 细胞的形态，MTT 法测定 DRG 细胞的增
2、殖活性. 结果 当加入 MOI 为 10 和 50 的 Ad-NT-3 时，形态学观察发现，DRG 细胞数目增加，突起变长，尤其以 3d 后表现更为明显 ;DRG 细胞的增殖活性显著增加（P0.01）.当 MOI 为 100 时 1d 和 3d，DRG 细胞数目明显减少，无突起或变短，部分细胞死亡;MTT 法测定 DRG 细胞的增殖活性均显著降低（P0.01）. 加入 MOI 为 10 的 Ad-NT-3 后 3d，加入 MOI 为50 的 Ad-NT-3 后 1d 和 3d，DRG 细胞 MTT 活性明显增加，经统计有显著性差异（P0.01 ）.当 MOI 为 100 时 1d 和 3d，D
3、RG细胞 MTT 活性均明显减低（P0.01，Tab1）.表 1 加入不同MOI 的 Ad-NT-3 后对体外培养 DRG 细胞活性的影响（略） 3 讨论 NT-3 是神经营养素（neurotrophins，NTs）家族的成员之一.NT-3 具有双重受体系统，一种是低亲和力受体，称 p75;另一种是高亲和力 trk 受体，属于酪氨酸激酶家族，称 trkC5 .NT-3的作用主要通过 trk 来实现，尤其是 trkC.NT-3 在神经系统发育、中枢神经元的保护、周围神经再生及营养肌肉阻止轴突和运动终板退变等方面发挥着广泛的作用.在中枢神经元的胞体保护上，NT-3可阻止胚胎期和出生后运动神经元细胞
4、死亡，而且大量实验表明NT-3 支持感觉和运动神经的存活. 成年动物骨骼肌存在大量 NT-73mRNA，对支配肌梭的感觉神经元和运动神经元发挥营养作用6 . Dijkhuizen 等 7 用 Ad-NT-3 感染培养的大鼠 DRG 植块后发现，Ad-NT-3 感染的 Vero 细胞（非洲绿猴肾细胞）能合成NT-3 蛋白 .Ad-NT-3 感染 DRG 植块后能刺激突起生长，且呈剂量依赖性，提示 Ad-NT-3 感染靶细胞能表达足够量而且具有较强生物学活性的 NT-3.本实验 Ad-NT-3 以适当的 MOI 感染培养的 DRG细胞，从形态和细胞增殖活性两方面证实对 DRG 细胞的存活有促进作用
5、. 其作用机制可能是培养的 DRG 细胞被 Ad-NT-3 感染后，合成了有生物学活性的 NT-3 蛋白，从而促进 DRG 细胞的存活. 我们还发现当 MOI 为 100 时，DRG 细胞数目明显减少，无突起或明显变短，部分细胞死亡，MTT 增殖活性明显减低.提示过量的 Ad-NT-3 感染可能对 DRG 细胞的生长有毒害作用.MOI 是指病毒滴度与细胞数的比值，用来表示腺病毒的感染量.Slack 等8 认为当 MOI 在 1050 时，既可达到较高的转染效率，又不会对细胞的存活、功能和细胞结构造成明显影响.Durham 等9 认为重组腺病毒载体高效转染靶细胞和毒性作用之间仅一步之遥.因此，要
6、精确把握好 Ad-NT-3 的 MOI，才能发挥其对 DRG 细胞存活的促进作用. 参考文献: 81Zhong SZ.Advance in peripheral nerve research J.Zhonghua Shouwaike Zazhi（Chin J Hand Surg） ，1997;13（ 1）:1-2. 2Sendtner M，Holtmann B，Kolbeck R，Thoenen H，Barde YA.Brain-derived neurotrophic factor prevents the death of motoneu-rons in newborn rats after nerve section J.Nature，1992;360（6406）:757-759. 3Li L，Wu W，Lin LF，Lei M，Oppenheim RW，Houenou LJ.Rescue of adult mouse motoneur
