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1、本 科生毕业设计（论文）题 目 番泻叶中总黄酮的提取及含量分析 学 院 化学工程学院 专 业 应用化学 班级 应化 061 班 姓 名加尔肯木尔扎汗 学号 065131115 指 导 教 师 毛丽哈 职称 副教授 2011 年 5 月 5 日新疆农业大学教务处制目 录摘要1前言21 实验部分31.1 实验仪器31.2 实验试剂31.3 实验原理31.4 溶液的制备31.4.1 标准溶液的制备31.4.2 试剂的配制31.4.3 番泻叶中总黄酮的提取31.4.4 样品溶液的制备32 结果与分析42.1 波长选择性试验42.2 标准曲线的绘制42.3 提取溶剂的选择52.4 提取溶剂浓度的选择62
2、.5 提取时间的选择62.6 提取温度的选择72.7 精密度试验72.8 样品总黄酮含量的测73 讨论84 结论8谢辞9参考文献 101番泻叶中总黄酮的提取及含量分析加尔肯木尔扎汗摘要：黄 酮 类 化 合 物 是 自 然 界 广 泛 分 布 于 植 物 中 的 一 大 类 天 然 产 物 ，其 结 构 类型 的 多 样 性 和 生 物 活 性 的 光 谱 性 ，已 成 为 国 内 外 研 究 开 发 的 热 点 。目 前 多 以 芦 丁为 标 准 品 进 行 植 物 黄 酮 含 量 的 测 定 。本 实 验 以 番 泻 叶 中 芦 丁 为 对 照 品 ，在 波 长510nm 下 ，用 可 见
3、分 光 光 度 法 测 定 潘 泻 叶 总 黄 酮 的 含 量 。确 定 了 提 取 总 黄 酮 的 提取 溶 剂 ，提 取 溶 剂 浓 度 、提 取 时 间 和 温 度 ，还 有 精 密 度 。建 立 了 以 芦 丁 标 准 溶 液 浓度 和 吸 光 度 关 系 的 标 准 曲 线 ，其 回 归 方 程 为 ：Y=0.03389+9.70238X，R =0.9989。样品 总 黄 酮 含 量 为 ：65.24mg/g，RSD=3.65%(n=5)。 关键词：番 泻 叶 ；总 黄 酮 ；分 光 光 度 法 ；测 定 ；2前言番 泻 叶 为 豆 科 植 物 叶 ， 有 狭 叶 番 泻 小 叶 及
4、 尖 叶 番 泻 小叶,具有泻热导致、通便利水之功效东非洲的近海及岛屿上，阿拉伯南部及印度西北部，西部均有，尖叶番泻叶产于带非洲尼罗河流域，现广东海南，云南已国外引种栽培 1-3。临床应用较多，因其属于天然药物。番泻叶甘苦、性寒 ,归大肠经 ,为苦寒、质黏、滑润攻下之品 ,作用泻热导滞 ,治热结便秘 ,积滞腹胀 4。番泻叶是全世界应用最广泛的导泻剂 ,在国外应用已有千余年的历史。在临床上使用较多,如门诊的直肠检查、术前清洁肠道等通常会用番泻叶泡水饮服,连泻数次,可将肠道粪便排泄干净。使用剂量存在个体差异 ,服用有效剂量番泻叶及其制剂具有安全。番泻叶及其制剂用量以软便排泄为度 ,短期用药可以增强
5、其安全性和有效性 5。番泻叶粉口服对胃溃疡、十二指肠溃疡、胃炎、胃癌、憩室等疾病引起急性出血有良效 ,番泻叶可增加大肠蠕动 ,有利于肠内瘀血排除 6。而且价格便宜 ,是一种非常有开发价值的药物 ,应进一步的开发和利用。植物体中往往含有多种黄酮类化合物，成为总黄酮，它们之间或是异构体，或是生物合成过程中不同的中间产物 7。番泻叶中黄酮类在黄酮类化合物中，简单黄酮、黄铜醇、查耳酮和花色素类等具有交叉的共轭体系，是一个平面型分子，而二氢黄酮，二氢黄酮醇和异黄酮由于共轭体系被破坏，形成的是非平面型分子。黄酮分子的结构特点对其性质有较大的影响 8。黄酮类一般难容或不溶于水，易容于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、醚
6、及稀碱液中。分子中存在共轭体系且为平面型黄酮的分子的黄酮、黄铜醇和查耳酮类，分子间作用力大，在水中的溶解性较小；而二氢黄酮及二氢黄酮醇为非平面型分子，分子间作用力较小，所以在水中的溶解性较大 9。黄酮是其中一类较为重要的化合物。黄酮类物质广泛存在于植物界，几乎分布于所有的绿色植物中草药的有效成分，如苦荞、山楂、桑叶、银杏叶、竹叶、可可、葛根等 10。它可分为多种类型，其化合物是有效活性成分之一，它是一类具有 CCC 基本母核的天然产物，可分为黄酮类、异黄酮类、黄酮醇类、查尔酮类等 11。近年来发现黄酮类化合物的生理活性较为广泛，具有抗癌防癌作用；有很强的抗氧化效果，可防止或延缓食品发生氧化反应
7、，饲料出现酸败变质等，能防止机体脂质过氧化反应。还有抗衰老、治疗心脑血管疾病、降血脂等药用保健功能 12。已经研究证明，黄酮类化合物是一类安全可靠、成本低、来源广、具有强抗氧化活性的抗氧化剂，因此，是一种具有广阔开发前景的新型饲料添加剂，将逐步取代人工合成的抗氧化剂。黄酮类物质有以下生理作用：(1)增强血管张力，降低血管脆性及改善血管通透性：(2)降低血脂及胆固醇；(3)减少红血球、血小板聚集，减少血栓形成，改善微循环：(4)护肝，解肝毒，治疗急、慢性肝炎、肝硬化及多种毒性肝损伤；(5)提高机体免疫能力；(6)抗菌，抗病毒，抗真菌，抑制肿瘤；(7)消炎，祛痰，解热，消肿；(8)抗氧化，抗衰老，
8、抗过敏；(9)抑制特定酶的活性；(10)强化细胞膜，活化细胞 13。由于黄酮类物质有较好的生理作用，近年来对它的研究越来越多。31 实验部分1.1 实验仪器722-SP 型 可见分光光度计（上海棱光技术有限公司）；JA2003 电子分析天平（精确度0.0001g）（上海精科天平）；RE-85C 旋转蒸发器水浴槽（上海青浦泸西仪器厂）；粉粹机，容量瓶，吸量管，移液管，烧杯，比色管，量筒，吸耳球；1.2 实验试剂番泻叶；对照品芦丁中国医药（集团） ；甲醇；70%乙醇；无水乙醇均为分析纯；乙醚；石油醚；4%NaOH；10%Al 2NO3；5%NaNO 2；实验用水为双蒸水；1.3 实验原理根据资料,
9、将样品中黄酮类化合物进行提取纯化后,黄酮类化合物中羰基，与铝盐进行络合反应,在碱性条件下生成红色的络合物。用分光光度法于最大波长下测定其吸光度,与黄酮类标准品比较,进行待测物中总黄酮的定量测定。也可根据朗伯一比尔定律，配制一系列不同浓度的总黄酮溶液，在最大波长处测定各浓度(C)的吸光度(A)，制作标准曲线，并得到回归方程。再用供试样品与铝盐作用，测定吸光度，代人回归方程，得出总黄酮含量。1.4 溶液的制备1.4.1 标准溶液的制备精密称取芦丁标准品 50mg，置于 100.0ml 容量瓶中，加 70%乙醇适量，使芦丁标准品完全溶解。再用 70%乙醇稀释至刻度，摇匀。精密量取 20.00ml，芦
10、丁溶液置于 50.00ml 容量瓶中，加 70%乙醇至刻度，摇匀，配成浓度为0.2mg/ml 的芦丁标准溶液。1.4.2 试剂的配制70%乙醇溶液：准确量称取 70ml 无水乙醇,置于 100.0ml 容量瓶中，加水溶解并定容至刻度。5%亚硝酸钠溶液：精确称取 2.5g 亚硝酸钠，置于 50.00ml 容量瓶中,加水溶解并定容至刻度。10%硝酸铝溶液：精确称取25g硝酸铝，置于250.0ml容量瓶中,加水溶解并定容至刻度。4%氢氧化钠溶液：精确称取10g氢氧化钠, 置于250.0ml容量瓶中, 加水溶解并定容至刻度。1.4.3 番泻叶中总黄酮的提取用电子天平精密称量已粉碎的番泻叶约 0.2g
11、用滤纸包好,进入索氏提取器加 50.00ml, 70%的乙醇后，回流提取 6h, 用 70%乙醇洗涤滤渣两遍，以 70%乙醇定容至 100.0ml。1.4.4 样品溶液的制备精密吸取提取液 10.00ml 置 50.00ml 容量瓶中，加入 5%NaN02溶液 0.7ml，摇匀，静置 5min 后，加入 0.3mol/l Al2NO3溶液 0.7ml，摇匀，静置 5min，加入 1mol/l NaOH 溶液 4.0ml，用水定容至刻度。42 结果与分析2.1 波长选择性试验移取 0.01mg/ml 芦丁标准溶液按实验方法用分光光度计在 430-600nm 波长处测定最佳吸光度并绘制吸收曲线，得
12、结果见表 1 图 1。表 1 波长选择性试验波长（nm） 吸光度（Abs） 波长（nm） 吸光度（Abs）430 0.075 520 0.109440 0.078 530 0.101450 0.081 540 0.098460 0.086 550 0.085470 0.092 560 0.062480 0.099 570 0.053490 0.105 580 0.040500 0.109 590 0.031510 0.112 600 0.0214204046048050520540560580606200.20.40.60.80.10.12吸光度(Abs)波 长 (nm)图 1 波长选择性试验
13、图由图 1 可知芦丁的最大吸收波长为 510nm，在本实验中就用了这个最佳波长来测定出番 泻叶中总黄酮的含量。2.2 标准曲线的绘制准确移取 0.2mg/ml 芦丁标准溶液各1.25，2.5，3.75，5.0，6.25，7.5，8.75，10.0ml，分别置于 25.00ml 容量瓶中，加入 5%NaN02溶液 0.7ml，摇匀，静置 5min 后，加入 0.3mol/l Al2NO3溶液50.7ml，摇匀，静置 5min，加入 1mol/l NaOH 溶液 4.0ml，用水定容至刻度，摇匀。以试剂空白做参比，在波长 510nm 处测定溶液吸光度，所得数据如表 2。以吸光度 A 为纵坐标，以芦丁标准溶液的浓度 C(mg/ml)为横坐标，绘制标准曲线，得结果见表 2 图 2。表 2 绘制标准曲线管号 芦丁标液浓度（mg/ml） 吸光度（Abs）1 0.01 0.1182 0.02 0.2433 0.03 0.3324 0.04 0.4115 0.05 0.5126 0.06 0.6287 0.07 0.7198 0.08 0.8010.0.10.20.30.40.50.60.70.80.90.10.20.30.40.50.60.70.80.9 Y=0.389+.
