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1、1研究党参与首乌等混合注射液上调抗氧化酶的表达作用【关键词】 党参；,首乌；, 超氧化物歧化酶；,谷胱甘肽过氧化物酶；, 丙二醛摘要：目的探讨党参、首乌、天麻、麦冬、白术、续断混合注射液对快速老化大鼠学习记忆及血、肝、肾、海马、脑皮质抗氧化酶 SOD，GSHPX 和过氧化物 MDA 的影响。方法采用氟哌啶醇造成大鼠获得性记忆缺失动物模型，通过电跳台回避法和腹腔注射党参、首乌等混合注射液，观察对照组、模型组、实验组大鼠行为学改变，测定各组大鼠血和组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPX)和脂质过氧化物丙二醛（MDA）的含量。结果与对照组、模型组比较，党参、首乌等混合注射液可维
2、持学习记忆功能，并使多种组织 SOD 和 GSHPX 显著升高、MDA 显著降低，差别有非常显著性意义(P0.001)。结论 党参、首乌等混合注射液有改善学习记忆和上调抗氧化酶 SOD、GSHPX 、下调过氧化物MDA 表达作用，说明党参、首乌等传统中药延缓衰老与促进抗氧化机制、减轻氧自由基损伤有关。关键词：党参； 首乌； 超氧化物歧化酶； 谷胱甘肽过氧化物酶； 丙二醛党参（Radix Codcnopsitis Pilosulas）对中枢神经系统、心2血管系统、消化系统、免疫系统、血液和造血系统都有重要改善作用，是益气补脾的上乘良药13 。首乌 Polygonum Multiflorum Th
3、unb.有延年益寿、益聪增智、健脑调心、保肝、促进血细胞新生和发育、降血脂和抗动脉粥样硬化等多方面的作用46 。天麻 Gastrodia elata Blume“主诸风痹，久服益气，轻身长年” ，近年来对抗衰老和促进学习记忆作用倍受重视，日本将其用于治疗老年性痴呆7,8 。麦冬养阴润肺、益胃生津、清心除烦、益气润肠，汤剂及注射液对冠心病、心绞痛有一定疗效9,10 。白术 Atractylis macrocephala Koidz.被医家视为延年益寿珍品，在宫庭长寿方中使用频率超过 45%以上11 。续断 Dipsacus asperciaes 有抗衰老作用，对神经元过度表达有明显抑制作用，并可
4、改善大鼠学习记忆12 。鉴此，本实验在研究党参、首乌等单味药物的基础上，采用党参、首乌等混合注射液作实验动物腹腔注射，通过对各组动物血和组织 SOD，GSHPX，MDA 含量测定和各组动物行为学观察，旨在进一步研究党参、首乌等混合注射液对实验动物学习记忆、抗氧化酶、过氧化物是否产生影响，从而探讨党参、首乌等传统中药延缓衰老的作用机理。1 器材与方法1.1 党参、首乌等混合注射液制备党参、首乌、天麻、麦冬、白术、续断由恩施州中药材生产 GAP（质量管理规范）示范基地提供，采用水提醇沉法制成含生药 30%的混合注射液，瓶装密封消毒备用。31.2 药品及仪器氟哌啶醇注射液（湖南洞庭药业股份有限公司生
5、产） ， SOD、GSH-PX 和 MDA 试剂盒（南京建成生物工程研究所生产） ，电跳台回避反应箱（华中科技大学同济医学院病理生理系提供） ，GL-20G II 型高速低温离心机，UV-2450 分光光度仪，水溶箱。1.3 分组雄性 Wistar 大鼠 30 只，鼠龄 4050 周，体重300350 g（华中科技大学同济医学院动物中心提供） 。随机分为对照组：生理盐水 10 只；模型组：氟哌啶醇 10 只；实验组：氟哌啶醇+党参、首乌等混合注射液 10 只。1.4 电跳台行为学训练及测试实验装置为 30 cm30 cm 电跳台回避反应箱，箱底为铜栅，可通刺激电流。另有一高 5 cm、顶端直径
6、 5 cm 橡胶圆台即避电击平台，固定置于箱内一角铜栅上，大鼠能在平台上停留。实验开始后，将大鼠放于回避反应箱内，使适应 35 min，消除探究反应。底部铜栅通电（36V）2 s，大鼠受电刺激后逐渐学会跳上平台回避电击。多数大鼠可再次或多次跳回铜栅上，受电刺激后又重新跳上平台，如此训练 3 min。记录每只大鼠受电刺激次数或犯错次数，以此作学习成绩，如此持续 3 d，直至每只大鼠犯错次数为 01 次。剔除犯错次数 2 次以上的大鼠，再据学习成绩均分至各实验组。1.5 给药途径和剂量实验动物在行为学训练及测试结束后，除对照组外，模型组和实验组均按每克体重 2 次/d 腹腔注射 0.001 mg
7、氟哌啶醇注射液，持续 3 d。实验组在继续注射氟哌啶醇注射液4的同时，再按每 g 体重 bid 腹腔注射 0.003 ml 党参、首乌等混合注射液，持续 10 d。对照组 2 次/d 等量腹腔注射生理盐水，持续10 d。1.6 组织 SOD，GSHPX 测定注射实验结束后，再测试行为学改变并记录，随后断颈处死各组动物。迅速取血及各种组织，血液离心保留血清，组织制成 10%匀浆。SOD，GSHPX 和 MDA 测定，按试剂盒说明书进行。蛋白定量采用双缩脲法测定。1.7 统计学处理所有数据用 SPSS11.0 软件进行统计学处理，计量资料用均数加减标准差表示，在数据分析的过程中，发现个别数据不符合
8、 ANOVA 比较要求时，则改用非参法作比较分析。2 结果 2.1 行为学测试从表 1 可见：实验组与模型组比较差异显著，说明模型组学习记忆能力显著下降，与对照组比较差异不明显，提示实验组学习记忆能力维持正常。表 1 各组 3 min 内犯错记录比较(略)2.2 SOD，GSHPX ，MDA 测试从表 24 可见：党参、首乌等混合注射液使实验大鼠血、肝、肾、海马、脑皮质SOD、GSHPX 表达量显著上升（P0.001 ） ，MDA 表达量显著下降（P0.001） ，说明党参、首乌等混合注射液对抗氧化酶（SOD、GSHPX）和过氧化物（MDA ）确有明显影响。表 2 各组 SOD 结果比较( 略
9、)实验组与模型组比较, *P0.001；对照组与模型组比较, 5P0.05；n=10 表 3 各组 GSH-PX 结果比较( 略)实验组与模型组比较, *P0.001；对照组与模型组比较, P0.05；n=10 表 4 各组 MDA 结果比较(略)实验组与模型组比较，*P0.001；对照组与模型组比较, P0.001；n=10 3 讨论衰老（senility）是人体一种全身性生理变化过程，各系统、器官、组织和细胞都会出现这种过程，其机理复杂，并与多种因素有关。现代医学理论认为，氧自由基损伤对人体衰老影响最大，包括氧阴离子自由基、羟自由基、脂氧自由基、二氧化氮和一氧化氮自由基、氧化氢等13，14
10、 。活性氧自由基虽有一定生理功能，如参与免疫和信号传导过程，但过多就会产生破坏性，导致人体正常细胞和组织损害，从而加速衰老，且引起多种疾病，如心脏病、老年痴呆症、帕金森氏病和肿瘤等14，15 。SOD 和 GSHPX 是重要的抗氧化酶系，普遍存在于人体各组织中，有对抗自由基损伤和清除氧自由基、降低细胞内 H2O2 水平、减少自由基和过氧化物蓄积的作用。氧自由基被 SOD 转变为 H2O2 后，GSHPX 可继续作用在 H2O2 上，使之转变成完全无害的水和氧。 MDA 是氧自由基引发过氧化作用产生过氧化脂质（LPO）的二级分解产物。因此SOD、GSH-PX 和 MDA 表达量的变化，已成为检测
11、衰老最为敏感6和可靠的生化指标16，17 。党参、首乌、天麻、麦冬、白术、续断是抗衰老的传统中药，研究与抗氧化酶 SOD、GSHPX 和过氧化物 MDA 的关系，对解释其作用机制有重要的理论意义和实践意义。本实验研究，根据氟哌啶醇可使动物产生僵住症(catalepsy)的原理诱导动物模型，探讨党参、首乌等混合注射液对不同组织SOD，GSHPX 和 MDA 表达量的影响。结果表明：氟哌啶醇对SOD 和 GSHPX 有抑制作用(P0.05)，是很好的动物老化造模剂。党参、首乌等混合注射液能维持实验大鼠学习记忆能力，并使实验大鼠血、肝、肾、海马、脑皮质 SOD、GSHPX 表达量显著上升(P0.00
12、1)，MDA 表达量显著下降(P0.001), 说明其确有改善学习记忆和上调抗氧化酶、下调过氧化物表达作用。由此可认为，党参、首乌等传统中药是通过提高抗氧化酶活性、降低过氧化物含量、减少自由基对细胞的损伤和脂褐质在脑心等组织的沉积，达到延缓衰老作用的。参考文献：1 朱恩圆，贺 庆，王峥涛，等. 党参化学成分研究J. 中国药科大学学报，2001，32（2）: 94.2 司友琳，焦东桂，孙运东, 等 . 党参中 4 种微量元素的含量测定J.基层中药杂志，2001，1（4 ）：21.3 王 敏,王彦春, 洪小平,等. 党参及其复方对亚急性衰老模型小鼠 IL-2 影响的研究 J.湖北中医杂志， 200
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