《皮肤鳞癌组织中MMP》由会员分享，可在线阅读，更多相关《皮肤鳞癌组织中MMP（10页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1皮肤鳞癌组织中 MMP【关键词】 皮肤肿瘤；免疫组织化学；明胶酶 B；抗原 CD34；微血管密度Expression of MMP9 in skin squamous cell carcinoma and its significance in microangiogenesis【Abstract】 AIM: To detect the role and the significance of MMP9 in microangiogenesis in skin squamous cell carcinoma (SCC) and to observe the relation between
2、the expression of MMP9 and microvessel density (MVD) in SCC. METHODS： Immunohistochemical SP staining was used to examine MMP9 expression and the change of MVD under light microscope in 45 cases of SCC, 19 cases of Bowen disease, and 10 cases of normal skin. RESULTS： The expression of MMP9 in SCC gr
3、oup was significantly higher than that in Bowen disease group（P0.05）, while the latter was also significantly higher than that in normal skin group（P=0.028， P0.05）. The level of MVD in SCC group was significantly higher than that in Bowen disease group （ P0.05） , and the latter was significantly hig
4、her 2than that in normal skin group（P0.05）. CONCLUSION： MMP9 is highly expressed in SCC, and may be one of important factors in angiogenesis of SCC.【Keywords】 skin neoplasms; carcinoma, squamous cell immunohistochemistry; gelatinase B; antigens, CD34; microvessel density【摘要】 目的： 探讨皮肤鳞状细胞癌（SCC ）发生发展过
5、程中基质金属蛋白酶 9（MMP9）对微血管生成的意义 . 方法： SCC45 例, Bowen 病 19 例、正常皮肤 10 例进行 CD34,MMP9 免疫组化染色. 检测 MMP9 的表达和微血管密度（MVD ）的变化，分析 MMP9 的表达与 MVD 之间，及它们与 SCC 临床病理特征之间的关系. 结果： 在 SCC 组中 MMP9 表达高于 Bowen 病组（P0.05）, Bowen 病组中 MMP9 表达高于正常皮肤组（P=0.028, P0.05）. 在 SCC 组中 MVD 值高于 Bowen 病组(P0.05)，Bowen 病组中 MVD 值高于正常皮肤组（P0.05）.
6、结论：MMP9 可能是 SCC 促进微血管生成因子之一，与 SCC 的侵袭性相关.【关键词】 皮肤肿瘤；免疫组织化学；明胶酶 B；抗原CD34；微血管密度30 引言癌细胞侵袭和转移能力与其诱导产生蛋白酶降解细胞外基质（ ECM） ，基底膜（BM）的能力密切相关 . 基质金属蛋白酶（MMP）是其中最为重要的一组蛋白酶，研究表明1-2 ，MMP 对肿瘤的侵袭和转移起重要的作用. Guttman 等1研究表明MMPs 在肿瘤血管生成中也有重要作用. 明胶酶是 MMPs 的一个亚类，包括基质金属蛋白酶 2（MMP2）和基质金属蛋白酶9（MMP9） ，近年 MMP9 与肿瘤血管生成的关系逐渐被重视. M
7、MP9 不仅是降解基底膜和 ECM 的关键酶，而且在肿瘤间质血管生成中起重要作用. 在皮肤鳞癌中，有关 MMP9 的研究报道很少，其结果也不完全一致. 我们通过免疫组织化学技术检测 Bowen 病(BD)，鳞状细胞癌（squamous cell carcinoma, SCC）组织中MMP9 和 CD34 的表达，并对 MMP9 的表达与微血管密度（MVD）做定量分析，探讨皮肤鳞状细胞癌、Bowen 病、基底细胞癌组织中 MMP9 对血管生成的作用及其临床意义.1 材料和方法1.1 材料石蜡包埋组织标本选自西安交通大学第二附属医院199901/200605 病理确诊手术患者. SCC45 例，年
8、龄 4595( 平4均 68.8)岁，男 27 例，女 18 例. Bowen 病 19 例，年龄 4587( 平均 65.2)岁，男 12 例，女 7 例. 正常人皮肤 10 例对照，年龄4678（平均 62.5）岁，男 5 例，女 5 例作鼠抗人 MMP9 mAb（MAB0245）和 CD34 mAb（(MAB0034)，免疫组化 SP 试剂盒(KIT9710)及 DAB 试剂盒均购自福州迈新生物技术有限公司.1.2 方法所有组织均经 40 g/L 甲醛液固定，常规石蜡包埋切片，连续切片 5 张，厚约 4 m. 采用 SP 法，免疫组化染色程序按试剂盒说明书进行. 阳性对照采用自身对照,用
9、 PBS 代替一抗和二抗进行阴性对照. MMP9 和 CD34 均采用高温高压抗原修复. MMP9结果判定：在不知任何背景资料的情形下,采用双盲法进行判定,以肿瘤细胞膜和/或细胞质出现淡棕黄色颗粒为阳性，并按着色强弱分级：无色为 0，浅黄色为 1，深黄色为 2，棕黄色为 3；着色范围以在1040 高倍镜下随机选区 5 个视野（每个视野记数 100 个细胞）计数阳性细胞所占的百分数均值：25%为 1, 25%49%为 2，50 %为3. 上述两项相加为 MMP9 的表达强度积分：2 为阴性，3 为弱阳性（+） ，34 为阳性（） ，4 为强阳性（）. MVD 计数参照文献3-4 方法进行微血管计
10、数，先在低倍镜（100）下观察确定血管密度最高处，在（200）视野下选择 3 个高血管密度区，计算单位视野（200）平均血管数. 单个内皮细胞或内皮细胞簇，均作为一个血管计数，而直径大于约 8 个红细胞的血管，有较厚肌层的血管以及硬化区的血管不在计数范围内. 5统计学处理: 采用 SPSS 10.0 统计软件包进行处理,根据资料类型组间比较分别采用方差分析和 2 检验，P0.05 为有统计学意义.2 结果2.1MMP9MMP9 阳性改变为细胞质或细胞膜呈棕黄色，偶尔可见细胞核着色，阳性颗粒多呈团块状. 正常人皮肤组织中MMP9 呈弱阳性表达，主要表达于颗粒层和棘细胞层，真皮层中纤维样细胞、单一
11、核细胞等见阳性染色. BD 组织中表皮全层均有MMP9 均匀弥漫表达. SCC 中 MMP9 在癌巢组织弥漫分布，以肿瘤周边表达强烈（图 1）MMP9 表达在正常皮肤组、 Bowen 病组、SCC 组依次增高（表 1）. MMP9 在 SCC 组中高于 Bowen 病组织（2=6.667, P0.05） ，Bowen 病组中 MMP9 高于正常皮肤组（P=0.028， P0.05）. 在 SCC 组中 MMP9 的表达与患者的年龄、性别、肿瘤组织的病理分级均无关（P0.05）.表 1MMP9 在正常皮肤组、 Bowen 病组和 SCC 表达(略)2.2MVD 计数 CD34 标记的微血管呈点状
12、分布，血管内皮细胞膜被染成褐色. 在 SCC 组织中微血管形态不规则，部分血管呈现发芽状，血管分布不均匀，在 SCC 的边缘区域最为密集，呈簇状6(图 2). Bowen 病组织中微血管形态较规则，但分布不均，血管簇偶见. 正常皮肤组织内的微血管形态规则，分布均匀. Bowen 病组中和 SCC 组中 MVD 明显升高（表 3）.图 1SCC 组织 MMP9 表达 SP 400(略)表 2SCC 组织 MMP9 表达与患者年龄、性别及鳞癌分期的关系(略)图 2SCC 组织 MVD 计数 SP 100(略)表 3CD34 和 MVD 在 Bowen 病和 SCC 中表达(略)aP0.05 vs
13、正常皮肤.3 讨论本研究结果显示,MMP9 在 SCC 组中高于 Bowen 病组织（P0.05） ，Bowen 病组中 MMP9 高于正常皮肤组（P0.05）. Bowen 病 MMP9 在增生表皮细胞质或细胞核表达；在 SCC 组织中 MMP9 在肿瘤细胞，增生上皮细胞和间质细胞均有阳性表达，在表达的强度、阳性细胞的种类、数量上均高于 Bowen7病组，提示 MMP9 高表达可能是 SCC 转移、侵袭能力的分子基础. 同时观察到仅有部分有肿瘤细胞能表达 MMP9，且表达 MMP9 的肿瘤细胞多位于癌巢的外周部分和毛细血管、淋巴管管腔周围，提示 MMP9 表达的肿瘤细胞可能具有更强的侵袭能力
14、. 实体肿瘤的新生血管提供了更多与体循环连接的通路，这使肿瘤细胞更容易从原发灶向远隔部位转移. 肿瘤组织中微血管密度越大，肿瘤细胞进入血循环及淋巴循环的机会越多，淋巴结及邻近脏器转移的机会也增大. 在许多肿瘤中都发现：微血管密度与肿瘤侵袭性与肿瘤转移的发生率相关1, 5- 6 . 近来研究表明，MMP9 不仅是降解基底膜和 ECM 的关键酶，而且在肿瘤间质血管生成中起重要作用1，5. Wang 等7人的研究表明,存在于细胞外基质的 VEGF能够通过存在于血管平滑肌细胞上的 VEGFR1 受体调节 MMPs 的表达. 而 MMPs 又能降解细胞外基质释放更多的 VEGF ,这便建立了一个正反馈调
15、节环路来促进新生血管的形成. Naglich 等8研究发现 MMP1, MMP2, MMP9 诱发和促进血管生成， TIMP1, TIMP2, TIMP3, TIMP4 抑制新血管生成.本实验显示，在 SCC 组织中微血管形态不规则，血管分布不均匀，在 SCC 的边缘区域最为密集，呈簇状. Bowen 病组织中微血管形态较规则，但分布不均. 正常皮肤组织内的微血管形态规则，分布均匀. SCC 组中 MVD 高于 Bowen 病组织（P0.05 ） ，Bowen 病组中 MVD 高于正常皮肤组（P0.05） ，提示细胞在发8生恶性转化之前已有血管生成增多，这很可能是 SCC 血管生成的启动阶段.
16、 我们发现在 SCC 组、Bowen 病和正常皮肤组中 MMP9表达高者 MVD 表达亦高，且 MMP9 的高表达的部位与 MVD 高密度区具有一致性，均位于癌巢边缘地区，提示： 肿瘤的浸润生长与新生血管生成是同步进行的，MMP9 的表达与肿瘤血管形成有关. 本研究结果表明，SCC 的发生和侵袭转移与肿瘤细胞的分化程度及新生血管的密度密切相关，MMP9 可能是 SCC 的重要促血管生成因子之一. 阻断 MMP9 的表达，抑制 MMP9 的活化可能对抑制SCC 转移具有重要意义.【参考文献】1 Guttman D, Stem Y, Shpizer T, et al. Expression of MMP9, TIMP1, CD34 and factor8 as prognostic markers for squamous cell carcinoma of the tongue J. Oral On
