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1、 成人呼吸道感染病毒病原学检测摘要: 目的 了解哈尔滨医科大学附属第二医院成人呼吸道病毒感染的流行特征。方法 采用直接免疫荧光法（DIF） ，对2007年4月-2008年6月住院的399名16-87岁呼吸道疾病患者痰标本进行七种病毒检测。结果 399例患者中病毒检测阳性者54例，病毒总体阳性率13.53。首位病毒为呼吸道合胞病毒29例（7.27）和流感病毒A型27例（6.77），其次为副流感病毒3型17例（4.26）、副流感病毒1型13例（3.26）、腺病毒5例（1.25）、流感病毒B型2例（0.50）和副流感病毒2型2例（0.50），混合感染22例（5.51）。64-87岁年龄组病毒检出率最
2、高（18.12），32-47岁年龄组病毒检出率最低（6.94）。肺炎、支气管炎、支气管扩张、哮喘、慢性阻塞性肺疾病（COPD）均有病毒检出，其中以COPD检出率最高（16.67），其次是哮喘（15.38）。 结论 病毒在成人呼吸道感染中占有重要的地位，感染主要集中在48-87岁年龄阶段（15.38），COPD和哮喘病毒感染率最高，以呼吸道合胞病毒和流感病毒A型最为常见。关键词 呼吸道病毒感染；成人Abstract: Objective To understand the epidemiologic feature of respiratory tract viral infection in
3、the adults of Harbin Medical University The Second Affiliated Hospital.Methods From April 2007 to June 2008, a total of 399 hospitalized adults were studied.Sputum were screened for virus by direct immunofluorescent (DIF) assay.Results Virus was identified in 54 patients ( 13.53%) .The most prevalen
4、t was respiratory syncytial viruses (RSV) (29, 7.27%) , followed by influenza A (27, 6.77%) , parainfluenza 3(17,4.26%) , parainfluenza 1(13,3.26%) , adenovirus (5, 1.25 %) ，influenza B (2, 0.50 %) , parainfluenza 2 (2, 0.50%) , and mixed viral infection(22, 5.51%).The highest virus detection rate (
5、18.12%) occur in adults between 64 and 87 years, virus detection rate of the lowest (6.94%) exist in 37-47-year-old.Pneumonia, bronchitis, bronchiectasis, asthma, chronic obstructive pulmonary disease (COPD) have detected the virus, with the highest detection rate of COPD (16.67%), followed by asthm
6、a (15.38%).Conclusions Viruses still play an important role in respiratory tract infections in adults and was concentrated in the 48-87 age group(15.38%), the infection rate of COPD and asthma was the highest. Respiratory syncytial virus and influenza A virus was the most common types.Key words Resp
7、iratory tract viral infection;Adults材料和方法 1. 研究对象 2007 年 4 月-2008 年 6 月随机选择哈尔滨医科大学附属二院呼吸科住院病人 399 例。其中年龄 16 岁-87 岁，男性 214 例，女性 185 例。2. 设备及试剂 荧光显微镜（TS100） ，离心机（TGL20LM） ，漩涡混合器（XH-B） ，37培养箱（SKP-02.500） ，直接免疫荧光试剂盒（3137，chemicon） 。3. 病毒抗原检测3.1 标本收集和处理 由专职护士将塑料导管经鼻腔插入 7-8cm 达到咽部以下诱导吸取 1-2ml 分泌物于 10ml 无菌
8、离心管中 1，-40冻存。实验时取出标本，向离心管中加入 4-8ml 冷 PBS,4放置 3-4 个小时，用漩涡混合器震荡3-5 分钟后，标本液转移入 1.5mlEP 管中，1000-6000r/min 离心 5-10 分钟，弃去上清液，如果有粘液也一并弃去。沉淀物再加入 1ml 冷 PBS 震荡 3-5分钟，1000-6000r/min 离心 5-10 分钟，再次弃去上清液。沉淀物中加入适量 PBS，调节细胞浓度到含纤毛柱状上皮细胞 1.0106/ml。3.2 细胞片制备 微量加样器吸取上述纤毛柱状上皮细胞悬液 20ul，点于预先用 4丙酮浸泡过的载玻片上。室温下空气干燥后 4丙酮浸泡固定
9、10 分钟。3.3 免疫荧光染色 用Chemicon直接免疫荧光试剂盒对所有标本进行直接免疫荧光检测。筛查试剂中含有7种混合单克隆抗体,即腺病毒（ADV）、流感病毒A(IFVA)、B型(IFVB)、副流感病毒1、2、3型(PIV1、2、3)及呼吸道合胞病毒(RSV)单克隆抗体。当筛查试验为阳性时,再用单一特异性单克隆抗体对标本进行鉴定检测。按试剂盒说明一滴混合单克隆抗体或单一单克隆抗体置于标本上,37 孵育，筛查为15分钟，鉴定为30分钟后,用PBS 洗片3次，每次3-5分钟，风干后封片。封片剂由试剂盒提供。在荧光显微镜下观察。所有标本均涂两张载玻片，一张上面涂一个样点用于筛查,另一张载玻片上
10、面涂七个样点，如筛查为阳性,则用涂有七个样点的载玻片进行鉴定实验。 3.4 阳性结果判定及对照设定 荧光显微镜下读片，放大倍数为 200 倍。如果样点中含有=20 个细胞,则认为此片是可以评价的。筛查实验阳性：在荧光显微镜 200 倍视野下有=2 个柱状纤毛细胞呈明亮黄绿色荧光即为筛查实验阳性，否则为阴性。鉴定实验阳性：在荧光显微镜下呼吸道合胞病毒及副流感病毒显示细胞浆染色,流感病毒及腺病毒为核染色或细胞浆内染色，否则为阴性。由试剂盒提供阳性及阴性对照片作对照。4.数据处理 采用SPSS统计软件进行数据处理。结果1.呼吸道病毒种类分布 399例入选病人中病毒检测阳性者54例，男27例，女27例
11、，病毒感染率13.53。其中腺病毒感染5例（1.25），呼吸道合胞病毒感染29例（7.27），流感病毒A型感染27例（6.77），流感病毒B型感染2例（0.50），副流感病毒1型感染13例（3.26），副流感病毒2型感染2例（0.50），副流感病毒3型感染17例（4.26），混合感染22例（5.51）。2.病毒检出率与年龄的关系 表1 呼吸道病毒检出率与年龄的关系年龄组 例数 检出数 检出率（） ADV RSV IFVA IFVB PIV1 PIV2 PIV3 混合感染16-23 22 3 13.64 1 2 2 0 0 0 0 124-31 19 2 10.53 0 2 1 0 1 0 1
12、232-39 27 2 7.41 0 2 0 0 1 0 0 140-47 45 3 6.67 0 1 1 0 0 0 2 148-55 52 7 13.46 1 4 5 0 1 0 1 356-63 96 12 12.50 2 5 7 0 3 0 2 464-71 70 16 22.86 1 8 8 0 5 0 7 771-79 48 4 8.33 0 2 0 0 0 1 1 080-87 20 5 25.00 0 3 3 2 2 1 3 33.呼吸道病毒种类的季节分布表2 呼吸道病毒的年份、季节分布季节 例数 检出数 检出率（） ADV RSV IFVA IFVB PIV1 PIV2 PI
13、V3 混合感染07春季 33 2 6.06 0 2 1 0 0 0 0 107夏季 91 20 21.98 0 10 11 0 5 0 2 707秋季 99 11 11.11 2 6 4 0 3 1 3 307冬季 73 8 10.96 1 5 5 0 2 0 4 508春季 93 13 13.98 2 6 6 2 3 1 8 608夏季 10 0 0 0 0 0 0 0 0 0 04. 不同疾病的病毒检出情况表3 几种常见疾病的病毒检出情况常见疾病 例数 检出数 检出率（） ADV RSV IFVA IFVB PIV1 PIV2 PIV3 混合上呼吸道感染 4 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0肺炎 117 12 10.26 1 7 7 1 4 0 5 5支气管炎 38 5 13.16 0 5 1 0 2 0 1 2支气管扩张 35 3 8.57 1 1 2 0 0 0 1 1哮喘 13 2 15.38 1 0 2 0 0 0 1 1COPD 60 10 16.67 1 4 4 1 0 2 2 25. 混合感染检出情况表4 七种病毒的混合感染情况例 数
