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1、革兰氏染色法的意义就在于鉴别细菌，把众多的细菌分为两大类， 革兰氏阳性菌 和革兰氏阴性菌。大多数化脓性球菌都属于革兰氏氏阳性菌，它们能产生外毒素使人致病，而大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌，它们产生内毒素，靠内毒素使人致病。基本概念 自然界存在多种多样病菌，如何将这些病菌加以鉴别、分类 ，并选择有效药物进行治疗这是很重要的问题。革兰氏染色法，能够把细菌分为两大类：采用这种染色方法，是先用龙胆紫（亦称结晶紫）来染细菌，所有细菌都染成了紫色，然后再涂以革兰氏碘液，来加强染料与菌体的结合，再用 95%的酒精来脱色 2030 秒钟，有些细菌不被脱色，仍保留紫色，有些细菌被脱色变成无色，最后再用番红或沙黄
2、复染 1 分钟，结果已被脱色的细菌被染成红色，未脱色的细菌仍然保持紫色，不再着色，这样，凡被染成紫色的细菌称为 革兰氏阳性菌 （G+菌）；染成红色的称为革兰氏阴性菌（G-菌）。 实际意义 常见的 革兰氏阳性菌 有：葡萄球菌（Staphylococcus）、链球菌(Streptococcus)、肺炎双球菌、炭疽杆菌、白喉杆菌、破伤风杆菌等；常见的革兰氏阴性菌有痢疾杆菌、伤寒杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、百日咳杆菌及霍乱弧菌等。 在治疗上，大多数 革兰氏阳性菌 都对青霉素敏感（结核杆菌对青霉素不敏感）；而革兰氏阴性菌则对青霉素不敏感（但奈瑟氏菌中的流行性脑膜炎双球菌和淋病双球菌对青霉素敏感）
3、，而对链霉素、氯霉素等敏感。所以首先区分病原菌是 革兰氏阳性菌 还是阴性菌，在选择抗生素方面意义重大。 结构特点 革兰氏阳性菌 细胞壁较厚，约 2080nm。肽聚糖含量丰富，有 1550 层，每层厚度 1nm,约占细胞干重的 5080%。此外，尚有大量特殊组份磷壁酸(teichoic acid)。磷壁酸是由核糖醇(ribitol)或甘油(glyocerol)残基经由磷酸二键互相连接而成的多聚物。磷壁酸分壁磷壁酸(wall teichoic acid)和膜磷壁酸(membrane teichoic acid)两种，前者和细胞壁中肽聚糖的 n-乙酰胞壁酸连结，膜磷壁酸又称脂磷壁酸(l ipteic
4、hoic acid)和细胞膜连结，另一端均游离于细胞壁外。磷壁酸抗原性很强，是 革兰氏阳性菌 的重要表面抗原；在调节离子通过粘肽层中起作用；也可能与某些酶的活性有关；某些细菌的磷壁酸，能粘附在人类细胞表面，其作用类似菌毛，可能与致病性有关。此外，某些革兰氏阳性菌细胞壁表面还有一些特殊的表面蛋白，如 a 蛋白等，都与致病有关。 革兰氏阳性菌 和革兰氏阴性菌的细胞壁结构显著不同，导致这两类细菌在染色性、抗原性、毒性、对某些药物的敏感性等方面的很大差异。 革兰氏染色的结果取决于细菌细胞壁的结构即革兰氏染色原理为： G菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保
5、留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。 G菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄 复染后呈红色。 革兰氏阳性菌 细胞壁厚约 20-80nm，有 15-50 层肽聚糖片层，含 20-40%的磷壁酸。革兰氏阴性菌细胞壁厚约 10nm，仅 2-3 层肽聚糖，另外还有脂多糖、细菌外膜和脂蛋白。 放线菌（Actinomycete）是另一大类 革兰氏阳性菌 ，根据 DNA 中鸟嘌呤(G)和胞嘧啶(C)的含量，放线菌被称为高 G+C 革兰氏阳性菌 ，而厚壁菌被称为低 G+C 革兰氏阳性菌 。如果细胞的第二层膜是衍生特征，这两类
6、 革兰氏阳性菌 可能是细菌基部的分支，否则它们可能组成关系相对较近的单系群。它们被认为可能是古细菌和真核生物的祖先，因为它们都缺乏第二层膜，并且具有一些生化上的相似性，比如含有固醇类。此外，尽管恐球菌-栖热菌(Deinococcus-Thermus)类细菌结构上类似革兰氏阴性菌，但也可被染成革兰氏阳性 原理学说 革兰氏染色原理目前有三种观点：等电点学说、化学学说和渗透学说。 等电点学说 革兰氏阳性菌 的等电点在 pH2-3，比阴性菌（pH4-5）低，加之碘为弱氧化剂，可降低革兰氏阳性菌 的等电点，致使两类菌的等电点差异扩大，因此阳性菌和碱性染料的结合力比阴性菌更强。 化学学说 碘液在菌体内与结晶紫结合后又和菌体内核糖核酸镁盐-蛋白质复合物结合，此结合物不易被丙酮酒精脱掉，呈革兰氏染色阳性。因革兰氏阴性菌缺乏核糖核酸镁盐，故对碘与结晶紫结合物摄取少，且不牢固，易被丙酮酒精脱色而呈革兰氏染色阴性。 渗透学说 乙醇使阳性菌所含粘肽多糖脱水而致细胞壁间隙缩小，通透性降低，在菌体内保留了染料-碘复合物，呈紫色。阴性菌含粘肽少，细胞壁变化不大，通透性不受影响，菌体内的染料-碘复合物较易透出，失去紫色，被复染成为红色。
