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1、使用 EDTA 抗凝血检测凝血酶原时间作者：季明德，魏源华 作者单位：江苏省中医院检验科,现阶段进行凝血项目检测都是用枸橼酸钠抗凝，抽取血液量与枸橼酸钠的比例是 9：1，在真空采血管中包含固定量的 0.3 ml 抗凝剂，真空采血管内的负压保证了从血管中吸出 2.7 ml 血液。但是在实际情况中偶尔会发生血液量不足的问题，比例发生改变会影响凝血结果1。使用 EDTA 抗凝管可能会解决这个问题，因为 EDTA 粉末在 抗凝过程中几乎不对血液造成稀释，也就不会发生稀释比例的改变。本文研究在于诠释用 EDTA 抗凝时所测得的 PT、INR 结果与枸橼酸钠抗凝时的相关性。1 材料和方法1.1 仪器和试剂
2、 Stago 公司生产的 STA 型全自动凝血分析仪，使用Stago 公司配套试剂，配套质控品。Dade-Behring 公司生产的 INR 校准血浆；1.2 标本来源 收集本院健康体检者标本 60 例，男 30 例，女 30 例，年龄 2053 岁；收集本院心胸外科心脏瓣膜置换术后及其它原因致 PT 延长病人标本 60 例，男 35 例，女 25 例，年龄 2155 岁。1.3 实验方法1.3.1 枸橼酸钠抗凝血 MNPT 的计算 同一仪器使用不同生产厂家、不同批号的凝血活酶试剂所计算出的正常人平均 PT（MNPT）值是不一样的，故我们应重测所用凝血活酶试剂匹配的仪器 MNPT 值，而不应使
3、用生产厂家给我们提供的 MNPT 值2。计算 MNPT 需要至少 20 份正常血浆。本实验我们挑选 60 名健康体检者，经过仪器测试 PT 值，剔 除2S 的数据, 经统计学处理，计算得出枸橼酸钠抗凝血的 MNPT 值。1.3.2 EDTA 抗凝血 MNPT 的计算 60 名健康体检者的 EDTA 抗凝血，测试PT 结果后，剔除2S 的数据, 经统计学处理，计算得出 EDTA 抗凝血的 MNPT 值。1.3.3 Local ISI(仪器区域国际敏感指数)的建立 仪器不可使用试剂说明书上附带的 ISI 值，因为此 ISI 值是试剂制造商用手工方法所测出的，并非是实验室仪器对所用批号凝血活酶试剂的
4、 Local ISI3，所以要重新建立Local ISI。用已标注 INR 值的校准血浆复溶后，在 Stago 仪器上测 PT 23 次，得出 PT 秒数均值，INR=（PT/MNPT）Local ISI，将枸橼酸钠及 EDTA 抗凝血各自的 MNPT 结果及已知的 INR 结果代入上式，即可求出 Local ISI=lgINR/(lgPTlgMNPT)，故能分别求出两种抗凝方式各自的 Local ISI。1.3.4 PT、INR 的检测 本院健康体检者标本 60 例，本院心胸外科心脏瓣膜置换术后及其它原因致 PT 延长病人标本 60 例用枸橼酸钠和 EDTA 抗凝管各抽一管血，3 500 r
5、/min 离心 5 min,以制备乏血小板血浆，在 4 h 内完成检测。根据公式 INR=（PT/MNPT）Local ISI，得到 INR 值。 1.4 统计学方法 对枸橼酸钠和 EDTA 抗凝所得的各 120 份标本的PT、INR 结果进行线性回归统计，分析其相关性，并用配对 t 检验分析两者间是否存在显著性差异。2 结 果2.1 MNPT 结果 橼酸钠抗凝血 MNPT 为 13.8 s，EDTA 抗凝血 MNPT 为 18.6 s。2.2 Local ISI 结果 橼酸钠抗凝血 Local ISI 为 1.24，EDTA 抗凝血Local ISI 为 1.33。2.3 枸橼酸钠抗凝血的
6、PT 结果为 y，EDTA 抗凝血的 PT 结果为 x，结果见表 1。经线性回归统计，两者间 PT 线性方程为 y=0.86x- 2.8，R2=0.97, PT结果相关性好，经配对 t 检验，t=-29.8,P=0.00.05，差异无显著性。表 1 枸橼酸钠与 EDTA 抗凝血的 PT、INR 检测结果3 讨 论3.1 研究发现 PT、INR 结果间是有相关性的，在临床上使用 EDTA 抗凝管检测 PT 是可行的。但同时也发现，PT 结果间差异有显著性，两种抗凝方式下PT 的生 物参考区间是不同的，所以要建立 EDTA 抗凝下 PT 的参考区间。INR 结果间差异无显著性，因为我们重新计算了
7、EDTA 抗凝下的 MNPT，从上述结果可 见，EDTA 抗凝下的 MNPT 比枸橼酸钠抗凝下 MNPT 要长，通过 PT/MNPT 在一定程度上消减了 EDTA 抗凝下 PT 的延长，INR 结果有良好的相关 性。因此我们可以报告 INR 结果或者通过公式换算 PT 结果 y=0.86x-2.8。3.2 PT 结果间的差异主要是因为标本的稀释不同造成的，因为枸橼酸钠抗凝管中存在 0.3 ml 抗凝剂，血液：抗凝剂=9：1，而 EDTA 管中抗凝剂是固体粉末，加入血液后几乎不对血液稀释，因而抽取血液量的多少十分关键，这也是分析前质量控制 的一个环节。3.3 使用 EDTA 抗凝血的优势在于抗凝
8、管可与血液学分析使用同一管血液，血样进行完血液学分析后可分离血浆，用于凝血项目检测，便于检验科仪器自动化的建立。 使用一管血液不仅节省抗凝管，而且病人没有必要抽取更多管血液，也便于医疗废弃物的处理，不会因为血量的多少造成稀释不同而影响结果。3.4 本文使用经过计算的 EDTA 抗凝下的 Local ISI，与枸橼酸钠抗凝下的 Local ISI 是不一样的，因为现阶段没有 EDTA 抗凝下的 INR 定值血浆存在，以后若有 INR 定值血浆来校准 ISI 会使得 EDTA 抗凝的使用更方便，更有市场。【参考文献】1 徐爱丽,毛庆民,张乐研.标本采集量对 PT、APTT 检测结果的影响J.临床军医杂志,2007,35(6):913.2 倪赞明，徐明光，王晓明，等.凝血酶原时间 ISI/INR 系统测定中的一些问题及改进意见J检验医学,2006,21(5):492495.3 许蕾,王学锋,李泳，等.血浆凝血酶原时间测定中建立仪器区域国际敏感指数的实验控讨J检验医学,2004,19(5):441443.
