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1、抗胶质瘤号方对脑胶质瘤细胞侵袭性的影响【摘要】 目的：探讨抗胶质瘤号对胶质瘤细胞侵袭性降低的作用及其与 PI3K/PKB 信号传导通路之间的关系。方法：MTT 法检测抗胶质瘤号处理培养的 C6 胶质瘤细胞的抑制率，免疫印迹法检测肿瘤细胞内 PI3K 和 PKB 表达水平，最后，利用结晶紫染色法检测 Transwell 下室面的胶质瘤细胞数。结果：抗胶质瘤号可以抑制 PI3K 和 PKB 蛋白表达水平，抗胶质瘤号作用 0.5 h 时 PI3K 蛋白表达水平最低为（25.13.1） ，作用 1 h 时 PKB 蛋白表达水平最低为（25.13.8） ，与对照组的（99.11.6） 、（91.23.5
2、）比较，差异均有统计学意义（P【关键词】 胶质瘤； 抗胶质瘤号； PI3K/PKB 信号传导通路 【Abstract】 Objective：To investigate the effect of Resistance to Glioma Prescriptions on reducing the invasiveness of glioma cells，and the relationship between Resistance to Glioma Prescriptions and PI3K/PKB signal transduction pathway.Method：MTT metho
3、d was used to detect cell inhibition rate of C6 glioma cells which was treated by the Resistance to Glioma Prescriptions，the expression level of PI3K and PKB in tumor cells was detected by Western blot，in the end，the number of glioma cells in Transwell was detected by crystal violet staining method.
4、Result：Resistance to Glioma Prescriptions can inhibit PI3K and PKB protein expression level，the expression level of PI3K protein was the lowest （25.13.1） when the effect of Resistance to Glioma was 0.5 h，and the lowest level of PKB protein expression was （25.13.8） at the effect of Resistance to glio
5、ma was 1 h，compared with the control group （99.11.6） ， （91.23.5） ，the differences were statistically significant（P 1 材料与方法 1.1 材料与试剂 （1）C6 大鼠脑胶质瘤细胞株由中国医学科学院基础医学研究所基础医学细胞中心提供。 （2）主要试剂羊抗大鼠 PI3K 和 PKB 购自英国 Abcam 公司，小鼠抗大鼠 -actin 抗体购自美国 Santa Cruz 公司。抗胶质瘤号组成成分包括鸦胆子口服液、白花蛇草、蜈蚣、水蛭、枸杞子、土茯苓、猪苓、葛根。 1.2 方法 1.2
6、.1 胶质瘤细胞培养 胶质瘤细胞采用 F-12 培养基培养进行培养，培养基内加入 2.5%胎牛血清和 15%马血清，37 孵箱内孵育，并通以 5%的 CO2。细胞生长至对数生长期后，随机分为实验组和对照组。实验组为抗胶质瘤号作用 0.1、0.5、1、2、3、4 h 六个时间点，对照组在相应的时间点加入等量生理盐水，每组选 10 个标本。 1.2.2 免疫印迹法检测胶质瘤细胞内的 PI3K 和 PKB 蛋白表达水平 培养的胶质瘤细胞给予抗胶质瘤号后，收集不同时间点（0.1、0.5、1、2、3、4 h）的胶质瘤细胞，细胞进行裂解、超声破碎后，低温离心并收集上清液，采用 7.5%的 SDS-PAGE
7、 进行电泳，每个泳道样本的加样量为30 g。半干转印结束后用脱脂奶粉封闭 1 h 后并 4 过夜。次日取出 NC 膜分别加入 PI3K 和 PKB 的一抗震荡孵育 2 h。TTBS 洗后行二抗震荡孵育 1 h。TTBS 洗后的 NC 膜采用增强化学发光检测，结果用 IDV 值进行分析。 1.2.3 抗胶质瘤号对肿瘤细胞增殖的影响 培养的胶质瘤接种于 96 孔板，密度调整为 1104 个细胞/孔，细胞增殖至对数生长期 24 h 后，细胞培养液内加入抗胶质瘤号，对照组加入不含血清的培养基。MTT 染色法检测抗胶质瘤号作用后不同时间点的胶质瘤细胞增殖抑制率。 1.2.4 结晶紫染色法检测胶质瘤侵袭性
8、 Transwell 膜上室接种胶质瘤细胞，密度为 5104 个/膜，培养 24 h 后，分别于抗胶质瘤号作用后不同时间点用测定 Tanswell 膜下室面的贴壁细胞数目。 1.3 统计学处理 采用 SPSS 11.5 软件进行统计学处理，计量资料用（xs）表示，比较采用 t 检验；计数资料以率（%）表示，比较采用 字 2 检验，P 近年来，关于中草药及其活性成分抗胶质瘤作用的研究已经证实，人参皂甙、紫杉醇、氧化砷、苦参碱、榄香烯、丹参酮等多种中药以及合剂对抗胶质瘤的作用机制主要包括：影响胶质瘤细胞周期；抑制癌发生相关基因的表达；调节机体免疫功能；抑制肿瘤血管生长；诱导肿瘤细胞分化；调节肿瘤细
9、胞信号传导；抑制端粒酶活性和细胞毒作用等16-18。中药诱导胶质瘤细胞凋亡是通过多靶点、多途径、多环节来实现的。 笔者通过研究抗胶质瘤号对胶质瘤细胞侵袭性、细胞增殖情况，发现抗胶质瘤号方剂可以降低胶质瘤细胞侵袭性，并于抗胶质瘤号作用 3 h 时最为明显。而抗胶质瘤号对胶质瘤细胞增殖的抑制作用亦于作用 3 h 时达最高水平。说明抗胶质瘤号可抑制胶质瘤细胞增殖，降低胶质瘤侵袭性。 有研究发现，PI3K/PKB 信号通路在机体生命活动过程中的很多方面发挥着重要作用，且常常可被多种肿瘤所激活19-20，与肿瘤的发生、发展、转移、耐药性等密切相关21。PKB 是 PI3K 的一个重要下游信号分子，可促进
10、细胞恶性转化。 本研究发现，抗胶质瘤号可以降低 PI3K 信号蛋白的表达，并于抗胶质瘤号作用后的 0.5 h 时达最低水平，而信号蛋白 PKB 则在抗胶质瘤号作用后 1 h 时达最低表达，据此推测，抗胶质瘤号作用于胶质瘤细胞后，可能是通过降低 PI3K 的表达而激活了其下游的信号分子 PKB，通过此信号通路的激活最终引起胶质瘤细胞增殖受抑降低了胶质瘤的侵袭性。 有关抗胶质瘤号降低胶质瘤侵袭性的作用，可能还有其他的信号通路或信号蛋白分子参与其中，亦可能是调动了机体某些内在机制而实现的，这些尚待进一步研究。 参考文献 1 Zhao M，Xu H，Liang F，et al.Association
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