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1、1槲皮素抑制卵巢癌细胞生长的作用研究作者：曾维诚张艺段承刚何涛刘佳佳 【摘要 】目的观察槲皮素对卵巢癌细胞生长的影响，为寻找治疗卵巢癌的新药物提供实验依据。方法运用细胞培养、光镜观察及MTT 法测定细胞活性等方法，对比卵巢癌细胞在槲皮素作用不同时间后的生长情况和细胞活性，探讨槲皮素对卵巢癌细胞生长的影响。结果加入 50mol/L 槲皮素后，卵巢癌细胞的生长受到明显的抑制，且呈时间依赖性。结论槲皮素能够抑制卵巢癌细胞的生长。 【关键词】槲皮素卵巢癌细胞抑制 槲皮素（Quercetin,Que）是一类广泛分布于被子植物的花叶部分的黄酮类化合物，研究发现槲皮素具有扩张冠脉、降血脂、清除自由基、抗炎、
2、抗过敏、调节免疫及抗肿瘤的作用1。而卵巢癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，早期诊断困难，化疗药物治疗副作用大、疗效差，因此寻找价格低廉，副作用小，疗效好的药物成为卵巢癌治疗的一个重要突破口。本实验拟通过观察槲皮素对卵巢癌细胞株SKOV3 生长的影响，为槲皮素应用于卵巢癌的临床治疗提供实验资料和理论依据。 1.材料和方法 1.1 试剂和器材 卵巢癌细胞株由四川大学华西医院妇产科惠赠；槲皮素购自2Sigma 公司； RPMI-1640，胎牛血清（FCS）购自 Gibco 公司；MTT 购自北京华瑞生物公司。其它试剂均为国产分析纯。 C-2323 型 CO2 培养箱为美国 Slshelab 公司产品；MA
3、XIMASC型超纯水仪为英国 EegaDemon 公司产品；EXL-800 型酶标仪为美国 BIO-TEK 公司产品；XDS-1B 型倒置相差显微镜为重庆光学仪器厂产品。 1.2 实验方法 1.2.1 细胞培养将卵巢癌细胞株培养于含 10胎牛血清的 RPMI-1640 培养基中，于 37，CO2 含量 5，湿度 90的 CO2 培养箱中培养。至对数生长期时观察细胞形态并离心收集细胞，待用。 1.2.2 细胞分组将上述细胞按 5104 个细胞/ml 的浓度重悬于RPMI-1640 培养基中，接种于 96 孔培养板，并将细胞随机分为空白对照组（以生理盐水代替槲皮素） ，槲皮素组（槲皮素终浓度为50
4、mol/L） ，每组设 5 个复孔，分别培养 12h、24h、36h 和48h。培养过程中采用倒置相差显微镜观察细胞形态并拍照。 1.2.3 细胞活性检测依据参考文献2，采用四氮唑盐（ MTT）还原法检测细胞活性。分别于加入药物 12h、 24h、36h 和 48h 后再加入 MTT 溶液（5mg/ml）20ul ，继续培养 4 小时，吸出培养液，每孔加入 200ul 二甲亚砜震荡 10min 后，用全自动酶标仪 490nm波长下测定各孔的吸光度（A 值） ，并计算细胞生长抑制率。 细胞生长抑制率( ) 1 (实验组 A 值空白孔 A 值)100。 1.2.4 实验数据处理所得结果以均值标准差
5、表示，组间和组内比3较采用 F+q 检验，p 0.05 为差异有显著性。所有处理均在SPSS15.0forwindows 统计软件包中进行。 2.实验结果 2.1 形态学观察 倒置显微镜下，空白对照组 SKOV3 细胞呈单层生长，多角形或短梭形，胞核圆形或椭圆形，胞浆透亮，部分细胞内可见分泌颗粒；槲皮素组细胞胞体变长，胞浆透明度下降，细胞膜皱缩，细胞边界模糊，颗粒感增强，部分细胞胞突回缩变圆，脱落呈悬浮状，可见细胞碎片。2.2 细胞活性检测 MTT 法检测细胞活性。槲皮素作用于卵巢癌细胞后，各组细胞的吸光度值（A 值）随时间的延长而逐渐降低，生长抑制率则逐渐升高，表明槲皮素对 SKOV3 的生
6、长有抑制作用，且具有时间依赖性。3讨论 卵巢癌是女性生殖器官常见的肿瘤之一，发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌而列居第三位。但因卵巢癌致死者，却占各类妇科肿瘤的首位，对妇女生命造成严重威胁。其原因在于卵巢癌临床无症状，鉴别其组织类型及良、恶性困难，在治疗上主要采用顺铂、阿霉素等化疗药物，这些药物在杀伤肿瘤细胞的同时，也会影响正常细胞的代谢，因此寻找副作用小，疗效好，价格低廉的药物成为卵巢癌治疗中的一个重要突破口。 槲皮素是一种具有多种生物学活性的黄酮类化合物，广泛分布于4被子植物的花叶部分，资源丰富，无毒无味。研究发现槲皮素具有多种药理作用，能抑制人肝癌细胞、人淋巴瘤细胞、人白血病细胞、人宫颈癌细
7、胞等多种肿瘤细胞的增殖生长3，但尚无槲皮素对卵巢癌细胞系作用的相关研究。本课题在前期研究的基础上4，用浓度为 50mol/L 的槲皮素作用于卵巢癌细胞株，结果表明槲皮素对卵巢癌细胞株 SKOV3 的生长具有抑制作用，且其作用强度与作用时间成正比。根据相关文献，槲皮素可能通过以下作用机制发挥其抗癌作用5、6：1、通过抗氧化及清除自由基等机制抑制致癌、促癌剂；2、通过作用于肿瘤细胞中信号传递过程中的一些激酶发挥抗癌作用；3、诱导肿瘤细胞凋亡； 4、抑制 RNA 聚合酶活性；5 、影响细胞周期。槲皮素是否也通过上述机制抑制卵巢癌细胞的生长尚有待于在本实验的基础上进一步深入研究。 本研究建立了槲皮素抑
8、制卵巢癌细胞生长的细胞模型，为槲皮素应用于卵巢癌的临床治疗提供了实验资料和理论依据，通过深入研究和进行相关临床实验，有望为卵巢癌治疗寻找一类新药物。 参考文献 1Martinez-FlorzsS,Gonzalez-GallegoJ,CulebrasJM,etal.Flavonoids:propertiesandanti-oxidizingactionJ.NutrHosp,2002,17(6):271-278. 2吴尚辉，邓朝晖，罗学滨，等.卵巢癌细胞 MTT 法快速药物敏感实验J.中国医师杂志， 2004，6 （8）：11391140. 3翟莺莺，周蕾，赖永红等.槲皮素抗肿瘤作用的研究 J.现
9、代临5床医学生物工程学杂志，2005，11（1）：1820. 4宋传旺，刘佳佳,段承刚等. 槲皮素对 LPS 延迟中性粒细胞自发性凋亡效应的抑制作用J.中国免疫学杂志，2005，21（1）：1316. 5KangTB,LiangNC.EffectofqueroetiononactivitiesofproteinkinaseandtyrosineproteinfromHL60cellJ.ActaPharmaco,1997,18(4):374-376. 6KimSH,YeoGS,LimYS,etal.SuppressionofmultidrugresistantviainhibitionofheatshockfactorbyquercetininMDRcellJ.ExpMolMnd,1998,30(2):87-90.
