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1、生物活性产品描述3-Methyladenine (3-MA)是一种选择性 PI3K 抑制剂，作用于 Vps34 和 PI3K，在 HeLa 细胞中 IC50 分别为 25 M 和 60 M；永久性抑制 I 型 PI3K，但对 III 型 PI3K 的抑制是短暂的，也会阻断自噬体的形成。靶点 Vps34 1 PI3K 1IC50 25 M 60 M体外研究3-MA 对 Vps34 轻微的偏向性可能是由于 Vps34 中某个特异性的疏水环形结构可以环绕在 3-MA 的 3-甲基基团外面造成的 1 。据报道对于正常培养和饥饿处理的癌细胞 3-MA 都能引起细胞死亡。3-MA 还可以不通过抑制自吞噬来
2、抑制细胞迁移和入侵，这表明 3-MA 除了抑制自吞噬之外还有其它生物功能。3-MA 可以造成半胱天冬酶依赖的细胞死亡，这一功能与它对自吞噬的抑制无关。用 5mM 3-MA 处理葡萄糖饥饿 Hela 细胞可降低 gfp-lc3 阳性细胞比例至 23%。3-MA 处理细胞 12 到 48 小时内 LC3-I 的水平上升而 LC3-II 水平下降。LC3-I 转为为 LC3-II 的过程被 3-MA 抑制了。 2.5 mM 或 5 mM 3-MA 处理 HeLa 细胞一天并不影响细胞存活率, 而 10 mM 3-MA 处理一天会造成细胞存活率下降 25.0% 。 2.5, 5 或 10 mM 3-M
3、A 处理细胞两天分别使细胞存活率下降 11.5%, 38.0% 和 79.4% 。3-MA 降低细胞存活率的作用具有时间和剂量依赖特性。3-MA 明显缩短 nocodazole 诱导的前中期阻断时间 2。3-MA 通过抑制自吞噬来抑制 SU11274 诱导的细胞死亡 3。 在野生型 MEF 细胞中延长 3-MA 处理时间 (最多 9 小时) 明显造成 LC3 I 到 II 转换。延长 3-MA 处理时间会明显增加 GFP-LC3 的聚集而 wortmannin 不具有此功能。3-MA 介导的 LC3 转换和游离 GFP 释放是 ATG7 依赖的。 3-MA 处理会导致 p62 蛋白水平明显升高
4、。即使在 Atg5/ 的 MEF 细胞中3-MA 也会使 p62 水平升高，就像在 DOX 介导的 ATG5 缺失的细胞中一样 。3-MA 以不同方式抑制 I 型和 III 型 PI3K。与野生型细胞相比，在 Tsc2/细胞中 3-MA 诱导的 LC3 I 到 LC3 II 转换过程大幅下降。3-MA 会破坏 mTOR 复合物 1 的拮抗自吞噬功能 4。体内研究3-Methyladenine (3-MA)可以通过对磷酸肌醇 3 磷酸激酶(PI3K) 的作用来阻断自吞噬, 而 PI3K 的活性对于自噬体形成早期膜池的成核和组装是必须的。与 SAH 处理组相比 3-MA 并不会改变出血的程度。与
5、SAH +对照成分组相比经过 3-MA 预处理后会明显加重神经病学症状。3-MA 处理会减少自吞噬发生 5。 相反地, 在SAH + 3-MA 组里 断裂的半胱天冬酶表达量明显上调，与此一致的是与 SAH + 对照成分组相比，SAH + 3-MA 组中右脑皮层里原位末端标记阳性细胞数量明显增多 5。特征推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以 Selleck 并不保证其有效性) 激酶实验: 4 Protein degradation assayHeLa cells are radiolabeled for 24 hours with 0.05 mCi/mL l-U- 14Cvaline. A
6、t the end of the labeling period, cells are rinsed three times with PBS. Cells are incubated for the designated times in either full medium or EBSS with or without the presence of 10 mM 3-Methyladenine.细胞试验: 2 细胞系 HeLa 细胞系浓度 1-10 mM处理时间 3 分钟方法用台盼蓝染色法分析细胞存活率（如 HeLa 细胞）。简言之, 经过 3-MA 处理后将贴壁的与漂浮的细胞都用PBS
7、( pH 7.4)重悬，密度控制在每毫升 1-2106。加入等体积的 0.4% 台盼蓝并彻底混匀。室温孵育 3 分钟后用血细胞计数器对细胞计数分析。动物实验: 5 动物模型 体重 300-350 g 的成年雄性 SpragueDawley 大鼠配制 生理盐水配制剂量 400 nM给药处理 脑室给药不同实验动物依据体表面积的等效剂量转换表（数据来源于 FDA 指南）小鼠 大鼠 兔 豚鼠 仓鼠 狗 猴 狒狒重量 (kg) 0.02 0.15 1.8 0.4 0.08 10 3 12体表面积 (m2) 0.007 0.025 0.15 0.05 0.02 0.5 0.24 0.6Km 系数 3 6
8、12 8 5 20 12 20动物 A (mg/kg) = 动物 B (mg/kg) 动物 B 的 Km 系数 动物 A 的 Km 系数例如，依据体表面积折算法，将白藜芦醇用于小鼠的剂量 22.4 mg/kg 换算成大鼠的剂量，需要将 22.4 mg/kg 乘以小鼠的 Km 系数（3），再除以大鼠的 Km 系数（6），得到白藜芦醇用于大鼠的等效剂量为 11.2 mg/kg。小鼠的 Km 系数(3)大鼠剂量 (mg/kg) = 小鼠剂量 (22.4 mg/kg) 大鼠的 Km 系数(6)= 11.2 mg/kg1 参考文献 1 Miller S, et al. Autophagy. 2010,
9、6(6), 805-807. 2 Hou H, et al. PLoS One. 2012, 7(4), e35665.view more化学数据点击下载 3-Methyladenine (3-MA) (SDF 格式文件) 分子量 149.15化学式 C6H7N5CAS 号 5142-23-43 年 -20 粉状稳定性6 个月-80 溶于溶剂别名 NSC 66389 EMEM: Eagles minimal essential medium 25 mg/mL warmed (167.61 mM) 乙醇 4 mg/mL (26.81 mM) 体外DMSO 3 mg/mL warmed (20.1
10、1 mM) 溶解性 (25C) *体内 30% propylene glycol, 5% Tween 80, 65% D5W 30 mg/mL* 99%【同义名】：(3-MA)（NSC 66389）【中文名】：3-甲基腺嘌呤订购信息：（原装进口，常备现货）货号 名称 CAS 号 规格 目录价IPA1009-0010MG 5142-23-4 10MG 379 IPA1009-0050MG 5142-23-4 50MG 569IPA1009-0100MG3-Methyladenine (3-MA,NSC 66389）3-甲基腺嘌呤5142-23-4 100MG 1049产品描述：3-Methyla
11、denine (3-MA, NSC 66389)是一种广泛应用的细胞自噬抑制剂，可以抑制 PI3K 活性，具有限制性抑制作用，对 PI3K Vps34 的抑制作用强于 PI3K，IC 50 分别为 25 M，60 M1。 3-Methyladenine 以时间和剂量依赖的方式降低细胞活力，其作用 caspase-3 的活化相关。在正常和饥饿条件下，3-MA 都可以引起癌症细胞死亡，并抑制细胞迁移和侵袭，该作用与其抑制细胞自噬的能力无关 2。3-MA 阻断自噬体的形成，有效抑制细胞内蛋白降解，但是，对细胞内蛋白酶活性没有影响，抑制烟草细胞的细胞自噬反应 3。产品结构： 基本特性：CAS 号：51
12、42-23-4， 分子式：C 6H7N5， 分子量：149.15溶解与保存：粉末直接保存于-20 C，有效期 2 年。DMSO 溶解配制储存液（50 mM） 。建议分装后-20C 避光保存，避免反复冻存，至少可存放6 个月。使用浓度：3-Methyladenine (3-MA)的具体使用浓度请参考相关文献，并根据自身实验条件（如实验目的，细胞种类，培养特性等）进行摸索和优化。应用实例（仅作参考）：(1) 为检测 3-Methyladenine (3-MA)对细胞自我吞噬的抑制作用，用 5 mM 3-Methyladenine 处理 HeLa 细胞，结果显示，3-MA 可以抑制无葡萄糖条件和正常
13、条件下的 HeLa 细胞。为检测 3-MA 对 HeLa 细胞活力的作用，分别用 0, 2.5, 5 和 10 mM 3-MA 处理 HeLa 细胞，发现用 2.5 mM 或 5 mM 3-MA 处理 HeLa 细胞 1 天后不会影响细胞的活力，而用 10 mM 3-MA 处理 1 天后，细胞活力降低 25.0%。另外，用 2.5, 5 和 10 mM 3-MA 处理 2 天后，细胞活力分别降低 11.5%，38.0% ，79.4% 3。注意事项： 本产品为化学试剂对人体可能有害，请做好安全防护工作，避免直接接触皮肤。 本产品仅用于科研用途，禁止用于人身上。其他相关产品：1） Rapamycin 雷帕霉素 货号： IPA1021-0100MG
