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1、第三节动物的克隆,1、动物细胞培养,（一）动物细胞、组织培养,动物组织,分散成单个细胞,培养,细胞得以生存并保持生命活动现象,生长、分裂乃至接触抑制和有规律的衰老、死亡性能等,一、动物克隆的技术基础,机械消化或胰酶消化,（1）定义,动物组织在体外及人工条件下维持生活状态或生长特性。,2、动物组织培养,3.动物组织培养与动物细胞培养的关系,单个细胞,转入特殊培养液中进行原代培养,细胞形成生长晕并增大,分装到多个卡氏瓶中进行传代培养,?,细胞系,有关概念:,（2）连续细胞系:,（1）有限细胞系：,连续细胞株,有限细胞株,细胞株-,可连续传代的细胞,不能连续培养下去的细胞系,能连续培养下去的细胞系,
2、发生了转化：大多数具有异倍体核型，有的是恶性细胞系，具有异体致瘤性，有的获得不死性（保留接触抑制，不致癌）,例：二倍体细胞,通过一定的选择或纯化方法，从原代培养或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞,具有恒定的染色体组型、同工酶类型、病毒敏感性和生化特性。,细胞系泛指可传代的细胞细胞株是具有特殊性质的细胞系,细胞系与细胞株的关系,（3）动物组织培养的条件:,1.无菌无毒的环境2.营养3.温度和pH4.气体环境,植物组织培养和动物组织培养的比较,细胞的全能性,细胞增殖,固体培养基,液体培养基,蔗糖 植物激素,葡萄糖 动物血清,植物体,细胞株、细胞系,（三）克隆培养法,把一个单细胞从群体中分离出来单独
3、培养，使之繁衍成一个新的细胞群体的技术,1、定义：,未经克隆的异质性细胞系,纯系：,分离 克隆,经克隆以后的细胞的后裔细胞群，来源于一个共同的祖细胞。,2、产物:,遗传性状均一、表现的性状相似的纯系,3、细胞克隆的基本要求:,必须保证所建成的克隆来源于单个细胞,单细胞不如群体细胞原代培养细胞和有限细胞系不如无限细胞系、转化细胞系和肿瘤细胞,4、克隆对象的选择,依据：,选择对培养环境具有较大适应范围和具有较强独立生存能力的细胞。,5、提高细胞克隆形成率的措施,选择适宜的培养基、添加血清、以滋养细胞支持生长、激素刺激、使用CO2培养箱调节PH,6、细胞克隆的用途,从普通细胞系中分离出缺乏特殊基因的
4、突变细胞系，方便科学研究,1.动物细胞全能性的表现程度,二、动物的克隆繁殖,全能干细胞多能干细胞专能干细胞：,低等动物细胞的全能性一般比较容易体现。,无论分化或癌变，变化的都是表现型，基因组完整性可以保留,2.动物难以克隆的原因,细胞的分化使得细胞发生了基因的差异表达，有的基因开放，有的基因关闭已分化的体细胞，基因组中基因的活动很不完全，不能像受精卵那样发挥细胞的全能性,3.动物核移植实验和克隆繁殖,利用一个细胞的细胞核（核供体）来取代另一细胞中的细胞核，形成重建的“合子”。,核移植：,实践证明：胚胎细胞核的移植成功率远高于成体细胞。,克隆羊培育过程,另一头绵羊的子宫,体细胞核移植技术实例,讨论（阅读P36-37）,体细胞羊的克隆成功证明了什么？,为什么克隆羊能获得成功，请用分子细胞学机理来阐述原因。,克隆动植物具有哪些应用？,
