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1、硕 士 学 位 论 文题 目 人 脑 胶 质 瘤 中 Ets-1 表 达 与 肿 瘤 血 管 生 成 、 细 胞增 殖 浸 润 的 关 系Relationship between expression of Ets-1 and Tumor英文题目 Angiogenesis ， Cancer Cell Proliferation， Invasion inHuman Glioma.姓 名 朱 家 麟 学 号 11020126所 在 学 院 医 学 院 导 师 姓 名 杨 应 明专 业 外科学入 学 日 期 2010 年 9 月 答 辩 日 期 2013 年 5 月学 位 论 文 原 创 性 声 明
2、本 论 文 是 我 个 人 在 导 师 指 导 下 进 行 的 工 作 研 究 及 取 得 的 研 究 成 果 。 论 文 中除 了 特 别 加 以 标 注 和 致 谢 的 地 方 外 ， 不 包 含 其 他 人 或 其 它 机 构 已 经 发 表 或 撰写 过 的 研 究 成 果 。 对 本 文 的 研 究 做 出 贡 献 的 个 人 和 集 体 ， 均 已 在 论 文 中 以 明确 方 式 标 明 。 本 人 完 全 意 识 到 本 声 明 的 法 律 责 任 由 本 人 承 担 。作者签名： 日期： 年 月 日学 位 论 文 使 用 授 权 声 明本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸
3、质文档，允许论文被查阅和借 阅 ； 学 校 可 将 本 学 位 论 文 的 全 部 或 部 分 内 容 编 入 有 关 数 据 库 进 行 检 索 ， 可以 采 用 影 印 、 缩 印 或 其 它 复 制 手 段 保 存 和 汇 编 论 文 ； 学 校 可 以 向 国 家 有 关 部门 或 机 构 送 交 论 文 并 授 权 其 保 存 、 借 阅 或 上 网 公 布 本 学 位 论 文 的 全 部 或 部 分内 容 。 对 于 保 密 的 论 文 ， 按 照 保 密 的 有 关 规 定 和 程 序 处 理 。作者签名： 导师签名：日期： 年 月 日 日期： 年 月 日汕 头 大 学 医 学
4、院 2010 级 硕 士 毕 业 论 文摘 要目 的 与 背 景研 究 发 现 原 癌 基 因 Ets-1 与 肿 瘤 的 侵 袭 转 移 ， 血 管 增 生 密 切 相 关 ， 且 在 不 同 肿 瘤 中 表达 形 式 各 异 。 但 人 脑 胶 质 瘤 中 Ets-1 表 达 与 肿 瘤 血 管 生 成 、 细 胞 增 殖 浸 润 的 关 系 仍 鲜 有 报道 。 本 实 验 拟 研 究 胶 质 瘤 组 织 中 Ets-1、 微 血 管 密 度 （ MVD） 和 细 胞 增 殖 核 抗 原 （ ki-67）的 表 达 及 其 关 系 ， 探 讨 Ets-1 蛋 白 在 胶 质 瘤 发 生
5、、 发 展 、 侵 袭 转 移 中 的 作 用 及 临 床 意 义 。方 法采 用 免 疫 组 化 双 染 法 和 SP 法 检 测 Ets-1 表 达 及 MVD 和 Ki-67 在 63 例 胶 质 瘤 （ 实 验 组 ）和 10 例 正 常 脑 组 织 （ 对 照 组 ） 中 的 表 达 ， 并 进 行 相 关 性 分 析 。结 果实 验 组 中 Ets-1 表达阳性率为 38.1%， 高 于 对 照 组 (X2=5.204， P=0.02)， III IV 级 组织 中 的 Ets-1 表 达 随 临 床 分 级 (R = 0.59， P50 为 (+)。 阳 性 对 照 ： 用 已
6、知阳 性 标 本 作 阳 性 对 照 。 阴 性 对 照 ： 用 PBS 代 替 一 抗 ， 结 果 应 为 阴 性 。 阳 性 表 现 为 细 胞 胞 浆内 呈 棕 黄 色 或 棕 褐 色 ， 并 呈 颗 粒 状 。Ki-67 阳 性 判 断 标 准 ： 细 胞 核 被 染 成 黄 棕 色 为 阳 性 ， 未 变 色 为 阴 性 。 每 张 切 片 随 机 观 察10 个 高 倍 视 野 ， 每 个 视 野 计 数 100 个 肿 瘤 细 胞 ， 计 算 阳 性 细 胞 数 的 平 均 百 分 率 。 阳 性 细 胞平 均 百 分 率 25 为 ( + )， 26 50 ( + )，5 1
7、(+)。 中 低 度 表 达 指 ( + )，高度 表 达 指 ( + )。 阳 性 对 照 ： 用 已 知 阳 性 标 本 作 阳 性 对 照 。 阴 性 对 照 ： 用 PBS 代 替 一抗，结果应为阴性。阳性表现为细胞胞浆内呈棕黄色或棕褐色，并呈颗粒状。微 血 管 密 度 (MVD)计 数 判 断 标 准 ： 用 CD34 标 记 计 数 MVD。 在 肿 瘤 组 织 中 ， 任 何 染 成 玫 瑰红 的 内 皮 细 胞 或 与 邻 近 微 血 管 、 肿 瘤 细 胞 之 间 存 在 明 显 分 离 的 内 皮 细 胞 团 ， 均 按 独 立 的 微血 管 分 别 记 数 。 分 支 血
8、 管 结 构 只 要 不 相 连 就 视 为 另 一 个 微 血 管 。 先 在 低 倍 镜 下 选 择 切 片 中癌 灶 浸 润 最 明 显 且 间 质 微 血 管 最 为 丰 富 处 ， 然 后 在 200 倍 镜 下 进 行 计 数 ， 计 数 5 个 视 野 中染 成 玫 瑰 红 的 微 血 管 数 目 ， 取 平 均 值 作 为 MVD 值 。8汕 头 大 学 医 学 院 2010 级 硕 士 毕 业 论 文2.5 统计学处理采 用 SPSS 12.0 统 计 软 件 包 进 行 分 析 ， 计 量 资 料 用 t 检 验 和 方 差 分 析 。 计 数 资 料 和 等级 资 料 检
9、 验 用 X2 检 验 及 秩 和 检 验 （ Mann-WhitneyU /Kruskal-Wallis H 检 验 ） 。 两 变 量 间 的关 系 用 Spearman 等 级 相 关 分 析 。3 实 验 结 果3.1 Ets-1 在对照组和实验组中的表达对 照 组 中 细 胞 无 阳 性 着 色 （ 图 2-1A） ， Ets-1 主要表达于肿瘤细胞及内皮细胞的细胞核或 细 胞 质 ， 呈 棕 黄 色 或 红 棕 色 颗 粒 (图 2-1B)，以细胞核着色尤为明显，呈片状或弥漫性分布 （ 图 2-1C） 。 实 验 组 中 有 24 例 Ets-1 表 达 阳 性 (38.1 )，
10、其 中 星 形 细 胞 瘤 6 例 ， 胶 质 母 细胞 瘤 10 例 ， 胶 质 肉 瘤 5 例 ， 少 突 胶 质 细 胞 瘤 3 例。I 级极少见阳性表达（图 2-1D） ， II 级可见少量内皮细胞呈局灶样表达（图 2-1E） ， 级 （ 图 2-1B， C） 表 达 明 显 高 于 级 ， 两 组 间 表 达 差 异 有 统 计 学 意 义 （ P0.001） 。 对 照 组 无 Ets-1 阳 性 着 色 ， 实 验 组 与 对照 组 间 差 异 比 较 具 有 统 计 学 意 义 (X2=5.204,P=0.02,表 2-1)。表 2-1 Ets-1 在 胶 质 瘤 组 织 中
11、的 表 达 与 临 床 病 理 参 数 的 关 系Table 2-1 The relationship between expression of Ets-1 and clinical pathologic parameters inglioma.Ets-1 阳 性 数病 理 参 数 n/例 - + + 阳 性 率%年 龄 45 30 21 6 3 30.0 45 33 22 8 3 33.3对 照 组 10 10 0 0 09汕 头 大 学 医 学 院 2010 级 硕 士 毕 业 论 文实 验 组 63 39 16 8 38.1病 理 分 级I 级 5 5 0 0 0II 级 18 18
12、0 0 0弥 漫 性 星 形 细 胞 瘤 10 10 0 0少 枝 胶 质 细 胞 瘤 8 8 0 0III 级 19 10 6 3 47.4间 变 性 星 形 细 胞 瘤 12 6 4 2间 变 性 少 枝 胶 质 细 胞 瘤 7 4 2 1IV 级 21 6 10 5 71.4胶 质 肉 瘤 7 2 3 2胶 质 母 细 胞 瘤 14 4 7 3Ki-67 中 度 表 达 28 24 4 0 14.3高 度 表 达 35 15 12 8 57.1与 对 照 组 比 P0.05；病理分级间总体差异P 0.001；与中度表达比P 0.0013.2 两组中 MVD 的 变 化MVD 用 CD34
13、 进 行 标 记 ， CD34 定位于血管内皮细胞的胞质中，呈淡黄色。在对照组和实验组级胶质瘤组织中呈孤立或散在的分布（图 2-2A,B） ， 级 组 织 中 呈 密 集的 片 状 分 布 （ 图 2-2C） ， MVD 在正常脑组织和 I、 II、 III、 IV 级 胶 质 瘤 中 的 计 数 分 别 为 ：5.583.87， 16.661.78， 23.284.24， 34.813.83 和 45.774.52。 对 照 组 脑 组 织和 实 验 组 胶 质 瘤 组 织 中 MVD 计 数 分 别 为 5.583.87 和 33.7320.44， 两 组 间 差 异 比 较 具有 统 计
14、 学 意 义 (F=18.31， P0.001)。 实 验 组 中 I II 级 与 III IV 级 胶 质 瘤 组 织 中 MVD 计10(R =0.46， P 0.001) 患 者 年 龄 无 显 著 相 关 性 (X =0.081， P =0.77)。汕 头 大 学 医 学 院 2010 级 硕 士 毕 业 论 文数 分 别 为 21.846.66 和 40.5611.62， 差 别 比 有 统 计 学 意 义 （ F=25.51， P0.001） 。3.3 实验组 Ets-1 表达与 MVD 的关系双 染 图 片 显 示 Ets-1 表达于微血管周边的间质细胞中，部分区域有两者重叠表
15、达（图2-3） ， 胶 质 瘤 组 织 中 Ets-1 与 MVD 表达分别为阴性 21.846.66， 弱 阳 性 34.813.21， 强阳 性 46.253.47， 有 逐 渐 增 高 的 趋 势 ； Ets-l 弱 阳 性 表 达 组 MVD 高 于 阴 性 表 达 组 (P0.001)，强 阳 性 表 达 组 高 于 弱 阳 性 表 达 组 (P 0.001)。3.4 ki-67 在对照组和实验组中的表达ki-67 主 要 定 位 于 肿 瘤 细 胞 核 中 ， 呈 黄 棕 色 或 棕 红 色 。 实 验 组 中 39 例 (61.9 )为 阳 性表 达 ， 对 照 组 无 表 达 。 两 组 差 异 比 较 具 有 统 计 学 意 义 (X2=13.29， P0.001,图 2-4)。3.5 实验组 Ets-l 表达与临床病理参数的关系Ets-1 在 胶 质 瘤 组 织 中 的 表 达 与 患 者 的 病 理 分 级 (R = 0.59， P0.001， 表 2-1 )显 著相 关 ， 其 表 达 且 随 胶 质 瘤 临 床 病 理 分 级 的 进 展 呈 增 高 趋 势 ； Ets-1 与 Ki-67 表 达 密 切 相 关211WHOII、 WHOIII、 WHOIV 四 级 。 WHO 肿 瘤 分 级 中 ， 级 为 交 界 性
