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1、安徽医科大学硕士学位论文分类号： 密级：UDC ： 编号：学 位 论 文二苯乙烯苷对改善全脑缺血再灌注致沙鼠海马损伤的研 究Study on the Improvement of Tetrahydroxy Stilbene Glucoside onGlobal Cerebral Ischemia Reperfusion Injury in GerbilsHippocampus王 齐指导教师姓名 陈 晓 宇 副 教 授 安 徽 医 科 大 学 基 础 医 学 院申请学位级别 硕 士 专 业 名 称 人体解剖和组织胚胎学提 交 论 文 日 期 2013-04 论 文 答 辩 日 期 2013-05
2、-19学 位 授 予 单 位 和 日 期 安 徽 医 科 大 学答 辩 委 员 会 主 席 汪 青 松 教 授3安徽医科大学硕士学位论文评 阅 人 肖 明 教 授 张 敏 教 授2013 年 5 月安徽医科大学Anhui Medical University硕 士 学 位 论 文二苯乙烯苷对改善全脑缺血再灌注致沙鼠海马损伤 的 研 究Study on the Improvement of Tetrahydroxy StilbeneGlucoside on Global Cerebral Ischemia Reperfusion Injuryin Gerbils Hippocampus作 者：
3、王 齐指导教师： 陈 晓 宇 副 教 授专 业 名 称 ： 人 体 解 剖 与 组 织 胚 胎 学研究方向：神经退行性疾病论 文 工 作 时 间 ： 2011 年 3 月至 2013 年 3 月3安徽医科大学硕士学位论文2013 年 05 月目 录英 文 缩 略 词 表 1中 文 摘 要 3英 文 摘 要 5论文正文前 言 7材料 8实验方法 11实 验 结 果 21讨 论 27小 结 32结 论 34参 考 文 献 35简 历 39致 谢 41综 述 423安徽医科大学硕士学位论文综 述 参 考 文 献 483安徽医科大学硕士学位论文英 文 缩 略 词Abbreviation英文缩写 英文全
4、称 中文全称A absorbance 吸 光 度APO apoptosis 细 胞 凋 亡CAT hydrogenperoxidase 过 氧 化 氢 酶Caspase-3 Cysteine aspartate specific protease-3 半 胱 氨 酸 天 冬 氨 酸 特 异性 蛋 白 酶 -3CNS Central nervous system 中 枢 神 经 系 统d day 天DAB diaminobenzidine 二 氨 基 联 苯 胺ED edaravone 依 达 拉 奉ECL enhanced chemiluminesence 增 强 化 学 发 光 试 剂GSH
5、-Px glutathione peroxidase 谷 胱 甘 肽 过 氧 化 物 酶h hour 小 时ICVD ischemic cerebral vascular disease 缺 血 性 脑 血 管 疾 病I/R ischemia reperfusion 脑 缺 血 /再 灌 注MDA malonaldehyde 丙 二 醛mg milligram 毫 克min minute 分 钟OD optical density 吸 光 度PAGE polyacrylamide gel electrophoresis 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 法1安徽医科大学硕士学位论文POD p
6、eroxidase 过 氧 化 物 酶PBS phosphate buffer saline 磷 酸 盐 缓 冲 液PMSF phenylmethylsulphonyl fluoride 苯 甲 基 磺 酰 氟PVDF polyvinylidene difluoride 聚 偏 （ 二 ） 氟 乙 烯ROS reactive oxygen species 活 性 氧rpm revolution per minute 转 /分 钟SDS sodium dodecylsulphate 十 二 烷 基 硫 酸 钠SOD superoxide dismutase 超 氧 化 物 歧 化 酶TBS tr
7、is buffer saline Tris 缓 冲 液 盐TUNEL terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP 脱 氧 核 糖 核 苷 酸 末 端 转nick end labeling 移 酶 末 端 标 记TEMED N,N,N,N-tetramenthyl-ethylenediamine N,N,N,N-四 甲 基 乙 二 胺TSG tetrahydroxy stilbene glucoside 二 苯 乙 烯 苷TdT terminal deoxynucleotidyl transferase 末 端 脱 氧 核 苷 酸 转 移 酶Tween-
8、20 polyethylene glycol sorbitan monolaurate 吐 温 -202安徽医科大学硕士学位论文二苯乙烯苷对改善全脑缺血再灌注致沙鼠海马损伤的研 究摘 要目前，缺血性脑血管疾病以及因 此引发的脑血管性痴呆已成为严重危害 人类健康的常见疾病。临床 中常用溶栓治疗缺血性 脑血管疾病，然而溶栓 后的再灌注损伤却是目前临床难以 解决的重大医疗事件之 一。脑缺血后的再灌注 是神经功能恢 复 的 基 本 条 件 ， 但 同 时 也 是 脑 组 织 损 伤 加 重 的 重 要 因 素 。 缺 血 /再 灌 注 （ ischemia- reperfusion， I/R）后，产生
9、大量自由基，过量的自由基损伤神经元的线粒体，启动线粒体依赖的凋亡通路，最终导致神经元凋亡、丢失。二 苯 乙 烯 苷 （ tetrahydroxy stilbene glucoside， TSG） 为 中 药 何 首 乌 中 的 水 溶 性生物活性成分，具有抑 制 动脉粥样硬化、保护 肝脏、防治老年性痴呆 、抗氧化、清除自由基、舒张血管 、降低胆固醇、抗肿瘤 等多项生理功能。前 期 研究表明，TSG 可 以 抑 制 沙 鼠 I/R 后自由基的产生以及学习记忆能力的下降。由于海马 CA1区在学习记忆功能方面占有重要地位，TSG 对 沙 鼠 I/R 后 神 经 元 凋 亡 ， 尤 其 是 海 马CA
10、1 区神经元损伤是否有改善作用以及其明确的机制却少有研究。本实验拟进行以 下 研 究 ：目 的 ： 研 究 二 苯 乙 烯 苷 在 沙 鼠 脑 I/R 引 发 的 脑 海 马 损 伤 的 保 护 作 用 及 机 制 ， 为TSG 在临床治疗脑 I/R 损伤方面的应用提供理论和实验依据。方法：采用结扎沙鼠双侧颈动脉，缺血 30min， 再 灌 注 5d 复制沙鼠全脑 I/R模 型 。 36 只 沙 鼠 随 机 分 为 6 组 ， 每 组 6 只 ， 假 手 术 组 、 模 型 对 照 组 、 TSG 大剂量组 （ 6mg/kg 体重） 、 TSG 中 剂 量 组 （ 3mg/kg 体 重 ） 、
11、 小 剂 量 组 （ 1.5mg/kg 体 重 ） 和阳 性 对 照 药 依 达 拉 奉 注 射 组 （ 3 mg/kg 体重） 。 5d 后 通 过 Morris 水 迷 宫 测 定 沙 鼠 学习 和 记 忆 功 能 ； 脑 组 织 匀 浆 行 超 氧 岐 化 酶 （ SOD） 、 谷 胱 甘 肽 过 氧 化 物 酶 （GSH-Px）活 性 和 丙 二 醛 （ MDA） 含 量 测 定 ； Nissl 染 色 观 察 沙 鼠 大 脑 海 马 CA1 区神经元的3安徽医科大学硕士学位论文结构和数量变化；TUNEL 染色法观察沙鼠大脑海马 CA1 区神经元的凋亡变化；Western blot 法
12、检测沙鼠脑组织 caspase-3 的 表 达 。结果：与假手术组相比，I /R 模型组沙鼠学习记忆能力明显降低，海马 CA1区神经元不仅大量丢失且结构紊乱， SOD 活 性 及 GSH-Px 酶 活 力 单 位 明 显 降 低 ，MDA 含量明显升高；I /R 组 沙 鼠 海 马 CA1 区 神 经 元 凋 亡 数 量 明 显 增 加 ； 脑 组 织 海马 CA1 区 中 caspase-3 显 著 活 化 。 TSG 中 、 高 （ 3、 6 mg/kg） 剂 量 组 和 依 达 拉 奉 阳性 对 照 组 均 可 以 显 著 改 善 I/R 所致的沙鼠学习记忆能力的降低，抑制海马 CA1
13、区神经元的丢失，改善神经元结构受损；显著提高血清 SOD 活 性 和 GSH-Px 酶 活 力单 位 ， TSG（ 3、 6mg/kg） 组 可 明 显 降 低 MDA 含 量 ， 抑 制 海 马 CA1 区 神 经 元 的 凋亡 及 caspase-3 的 活 化 。 而 TSG 低 剂 量 组 对 上 述 变 化 均 没 有 明 显 的 改 善 作 用 。结论：TSG 对 于 I/R 引 发 的 脑 损 伤 ， 尤 其 是 海 马 区 神 经 元 凋 亡 具 有 明 显 的 改 善作用，这种保护作用可能与其抑制 caspase-3 的 活 化 相 关 。关 键 词 ：缺血/ 再 灌 注 二 苯 乙 烯 苷 海 马 神 经 元 凋 亡4安徽医科大学硕士学位论文Study on the Improvement of Tetrahydroxy Stilbene Glucoside onGlobal Cerebral Ischemia Reperfusion Injury in GerbilsHippocampusAbstractIschemic cerebral diseases and consequential vascular dementia has become one
