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1、1参力保对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用作者：董淑雯 宋海滨 单迅 金毅 【摘要 】 目的 观察参力保对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法 结扎兔冠状动脉左前降支（LAD）30 min，再灌注120 min 后制备家兔心肌缺血再灌注模型。 56 只家兔，随机分为 7组，生理盐水对照组：假手术组，模型组（给予溶媒 8.58 mg/kg） ，参力保高剂量组（22.36 mg/kg，内含 5.2 mg/kg 人参皂苷 Rg2） ，参力保中剂量组（11.18 mg/kg，内含 2.6 mg/kg 人参皂苷 Rg2） ，参力保低剂量组（5.59 mg/kg，内含 1.3 mg/kg 人参皂苷 Rg
2、2） ，阳性对照组（给予盐酸尼卡地平注射液） ，测定血浆磷酸激酸同工酶（CKMB ） 、乳酸脱氢酶（ LDH） 、天门冬氨酸转氨酶(AST) 和心肌组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）及游离脂肪酸 (NFFA) 含量；高效液相法测定心肌组织去甲肾上腺素（NE ）含量。结果 参力保能显著降低血浆 CKMB 和 LDH、AST 的活性，与模型组相比有显著差异（F=13.03132.604,P0.05、0.01） 。参力保 3 个剂量组与模型组比较可明显降低心肌 MDA 含量，提高SOD 活性和 NE 的含量（F=2.88015.927， q=5.24912.510,P0.05） ；
3、参力保高、中、低剂量组 NFFA 与模型组比较，差异有显著性（Z1=Z2=Z3=-2.329，P0.05） 。结论 参力保对家兔心肌缺血再灌注损伤有保2护作用，其机制与清除自由基抑制脂质过氧化反应有关。 【关键词】 参力保 再灌注损伤 心肌 脂质过氧化损伤 兔 ABSTRACT Objective To investigate the effect of Shenlibao against myocardial ischemia reperfusion injury in rabbits.Methods An animal model was established by ligation o
4、f left desending coronary artery for 30 min and reperfusion for 120 min. Fiftysix rabbbits were randomly divided into seven groups: saline control group, shamoperation group, media control group, highdose Shenlibao group, moderatedose Shenlibao group, lowdose Shenlibao group and nicardipine hydrochl
5、oride treatment group. Serum level of CKMB and lactate dehydrogenase (LDH), superoxide dismutase (SOD), malondialdehyde (MDA) and free fatty acids (NFFA) were detected. Results Compared with the control groups, Shenlibao decreased the activity of CKMB and LDH in blood plasma (F=13.031-32.604;P0.05,0
6、.01). Furthermore, Shenlibao of three differentdosage groups increased the activity of superoxide dismutase (SOD) (F=8.765,P0.01), reduced malondialdehyde (MDA) (F=2.880,P0.05) and free fatty acids (NFFA) content in myocardium (Z1=Z2=Z3=-2.329,P0.01), and raised myocardial norepinephrine (NE) conten
7、ts 3(F=15.927,P0.01). Conclusion Shenlibao has a protective effect on myocardial ischemia reperfusion injury. The mechanism is related to the clearance of free radicals and inhibition of subsequent lipid peroxidation. KEY WORDS Shenlibao; Reperfusion injury; Myocardium; Lipid peroxidation damage; Ra
8、bbit 研究表明，氧自由基及其脂质过氧化反应是导致心肌缺血再灌注损伤的重要因素之一1。人参总皂甙对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用2。参力保的有效成分系从五加科植物人参属人参Panax ginseng 茎叶中提取的单体人参皂苷 Rg2 的羟丙基 环糊精包裹物，其对心肌缺血再灌注损伤的作用报道较少。本实验以兔复制心肌缺血再灌注模型为研究对象，观察参力保对心肌缺血再灌注损伤的保护作用，为其临床应用提供理论依据。 1 材料和方法 1.1 实验材料 1.1.1 动物 普通级大耳白兔，体质量为 2.03.0 kg，由武汉市新洲区全耀动物养殖场提供（实验动物合格证号：Scxk(鄂)20040006） 。
9、1.1.2 药品及试剂 参力保粉剂由吉林省中医中药研究院提供，临用时配成所需浓度；羟丙基 环糊精由西安德立生物化工有限4公司生产；盐酸尼卡地平注射液由日本山之内制药株式会社生产，批号 041117A；丙二醛（MDA ）测试盒，批号 20060313；过氧化物歧化酶（SOD）测试盒，批号 20060317；游离脂肪酸（NFFA）测试盒，批号 20060321，均由南京建成生物工程研究所提供。乳酸脱氢酶（LDH）测试盒,批号：200507130031；肌酸磷酸激酶（CKMB ）测试盒 , 批号：200511050051；天冬氨酸转氨酶（AST）测试盒，批号：200511050101 ；总蛋白（TP
10、 ）试剂盒，批号 200507260031，均由中生北控生物科技股份有限公司提供。盐酸去甲肾上腺素(NE)、辛烷基硫酸钠购自 Sigma 公司。 1.1.3 仪器 全自动生化分析仪（LANDMARK,AG, 美国） 。高效液相色谱仪(600 HPLC 泵，717 自动进样器， 2465 电化学检测器，Empower 色谱管理软件,美国 Waters 公司)。 1.2 实验方法 1.2.1 模型制备 大耳白兔 56 只，用 20 g/L 戊巴比妥钠 30 mg/kg 经耳缘静脉缓慢注入，麻醉后固定于兔台，去胸前毛，沿胸正中线剪开皮肤，从剑突上沿胸骨正中线开胸，以小型开胸器扩开切口使心脏暴露良好，
11、按文献3介绍方法进行缺血再灌注实验。实验分 7 组。正常对照组：麻醉后，至实验结束时，开胸从左心室取血和左心室肌；假手术组：开胸 LAD 下穿线不结扎,给予生理盐水；模型组：给予溶媒（羟丙基 环糊精）8.58 mg/kg；参力保用药组：高剂量组（22.36 mg/kg，内含人参皂苷 5.2 mg/kg） ，中剂量组（11.18 mg/kg，内含人参皂苷 2.6 mg/kg） ，低剂量组5（5.59 mg/kg，内含人参皂苷 1.3 mg/kg） ；阳性对照组：给予盐酸尼卡地平注射液（0.25 mg/kg） 。用药体积均为 2 mL/kg 体质量。1.2.2 不同浓度 NE 标准品的配制 精确称
12、取 NE 标准品 1 mg，加入 0.1 mol/L HClO4 1 mL,浓度为 1 g/L,为标准储备液。取标准储备液各 10 L,加流动相 990 L 稀释，浓度为 10 mg/L,为标准应用液。用前取标准应用液各 40 L，将流动相稀释至 1 000 mL,浓度为 400 g/L,将该液依次稀释，得到一系列不同浓度的标准液，浓度分别为 400、200、100、50、25 g/L。 1.2.3 流动相组成 0.1 mol/L 柠檬酸0.1 mol/L 醋酸钠溶液(pH 3.7,内含有体积分数为 0.10 的甲醇，1.2 mmol/L 辛烷基硫酸钠，1.3 mmol/L 二正丁酰胺) ，真
13、空抽滤脱气后使用，流量 1.2 mL/min,电化学检测器工作电压+0.75 V。 1.3 测定项目 1.3.1 血浆心肌酶测定 心脏采血（肝素抗凝） ，3 000 r/mim 离心 15 min，取上清，用自动生化分析仪测定血浆CKMB、 LDH、AST 的活性。 1.3.2 心肌组织中 SOD 活性、MDA 及 NFFA 活性测定 取血后迅速剪取心脏，沿冠状沟剪开取左心室肌，用 4 生理盐水冲净血迹后，加入 0.1 mol/L PBS 冰浴制成 100 g/L 的心肌组织匀浆，3 000 r/min 离心 15 min，取上清液按试剂盒要求测 MDA、NEFA含量及 SOD 活性，并测定心
14、肌组织匀浆 TP 含量。 61.3.3 心肌组织 NE 含量测定 用高效液相色谱 电化学检测法(HPLCEC) 进行检测。操作方法如下：取左心室肌组织100 120 mg，加入 350 L4 的 0.4 mol/L 高氯酸溶液（含 0.5 mol/L EDTA，0.1 g/L 半胱氨酸） 冰浴中制成心肌组织匀浆，离心（4 ，1 0000 r/min，10 min） ，取上清液与 1/2 体积的钾盐溶液（含枸橼酸钾 20 mmol/L，K2HPO4 300 mmol/L，EDTA 2 mmol/L）混合，冰浴静置 10 min，离心（同前） ，上清液 20 L注入色谱系统分析,比较组织样品中 N
15、E 含量。 2 结果 2.1 参力保对血浆心肌酶的影响 参力保 3 个用药组、阳性对照组与模型组比较，均可明显降低 CKMB、LDH 和 AST 的活性（F=13.03132.604，q=4.573 17.501,P0.05） 。见表 1。 表 1 参力保对缺血 再灌注损伤后血浆心肌酶活性的影响（略） 与模型组比较，F=13.03132.604 ， #q=4.57317.501，P0.05 2.2 参力保对心肌组织 MDA 含量、 SOD 活性及 NFFA 含量的影响 7参力保 3 个剂量组与模型组比较可明显降低心肌 MDA 含量，提高 SOD 活性和 NE 的含量(F=2.88015.927,q=5.249 12.510,P0.05)；参 2 期董淑雯, 宋海滨 ,单迅,等. 参力保对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用 101 力保高、中、低剂量组 NFFA 与模型组比较差异有显著性（Z1=Z2=Z3=-2.329,P0.05） 。见表 2。 表 2 参力保对缺血 再灌注损伤后家兔心肌MDA、SOD、NFFA 和 NE 的影响（略） 与模型组比较，F=2.88015.927，#q=5.249 12.510,Z1=Z2=Z3=-2.329，P0.05 3 讨论 自 20 世纪 80 年代以来，随着溶栓疗法、经皮穿刺冠状动脉腔内成形术（PTCA） 、冠状动脉旁路移植术、激光冠状动脉再
