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1、 分 类 号学校代码学 号密 级M20097582310487硕士学位论文乙肝病毒父婴垂直传播分子机制的初步研究学位申请人 ： 刘世伟学 科 专 业： 妇产科学指 导 教 师： 靳镭 教授答 辩 日 期： 2012年 4月 A Dissertation Submitted in Partial Fulfillment of theRequirements for the Degree ofMaster of MedicinePreliminary study on the mechanisms of hepatitis Bvirus paternal-fetal vertical transm
2、issionCandidate ： Liu Shiwei Major ： Gynaecology and Obstetrics Supervisor ： Prof. Jin Lei Huazhong University of Science & TechnologyWuhan, Hubei 430074, P. R. ChinaApril, 2012 独创性声明本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明
3、。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。学位论文作者签名：日期：2012年 月 日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密 ，在_年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在以上方框内打 ）学位论文作者签名： 指导教师签名：日期： 年 月 日 日期： 年 月 日 目 录英文缩略词 . 1摘要 . 2ABSTRACT . 3引
4、言 . 4 材料与方法 . 6 实验结果 . 8 讨论 . 11 小结 . 14 参考文献 . 15 综述 . 17参考文献 . 34致谢 . 40 华中科技大学硕士研究生学位论文英 文 缩 略 词英文缩写HBV英文全称 中文全称hepatitis B virus 乙型肝炎病毒ASGPRHAAHCCARTasialoglycoprotein receptorhepatitis associated antigenhepatocellular carcinomaassisted reproductive technologyfluorescent in situ hybridizationin
5、vitro fertilization去唾液酸糖蛋白受体肝炎相关抗原肝细胞肝癌辅助生殖技术FISHIVF荧光原位杂交体外受精-胚胎移植卵胞浆内单精子注射丙型肝炎病毒ICSIHCVPCRintracytoplasmic sperm injectionhepatitis C viruspolymerase chain reactionhepatitis A virus聚合酶链式反应甲型肝炎病毒HAVFITCHIVfluorescein isothiocyanatehuman immunodeficiency virusinterleukin-6异硫氰酸荧光素人类免疫缺陷病毒白介素-6IL-6TfR
6、 transferrin receptor 转铁蛋白受体PHSASPSSpolymerized human serum albuminstatistical package for social science多聚人血清白蛋白社会科学统计软件包1 华中科技大学硕士研究生学位论文乙肝病毒父婴垂直传播分子机制的初步研究摘要目的：通过乙肝病毒感染精子的膜蛋白受体，研究乙肝病毒感染精子的分子机制以及观察乙肝病毒感染导致的精液参数改变，并为体外阻遏 HBV 父婴垂直传播提供理论依据。方法：收集IVF周期中乙肝病毒阴性的男性精液标本与HBV阳性患者血清及去唾液酸糖蛋白受体（ asialoglycoprot
7、ein receptor monoclonal antibody ,ASGPRMab）共培养，根据不同的处理分为以下四组：A组，正常人精液；B组，HBV阴性血清与精液标本共培养；C组，HBV阳性血清与人精子共培养；D 组，ASGPR MAb和HBV 阳性血清与精液共培养。每小 时观察记录精子活率（a+b ）变化，培养24小时后，流式细胞检测C和D组标本精子膜表面 HBsAg、HBcAg 。结果：1h精子活率AD组、CB组、CD组统计结果有显著性差异。2h精液活率 AC 组、BC 组、DC 组统计结果有显著性差异。3h 精液活动率四组均有统计学差异。4-6h精液活动率除B组与D组无统计学差异外其
8、余各 组均有统计学差异。7h活动率AB组、AC组、BC组、DC组统计结果有显著性差异（P均D，CB ，CD(PC,BC,DC(PDBC(P B = D C (PB,AC,BC,DC(P0.05). The HBcAg was no differencebetween group C and group D, but the HBsAg was higher in group C than group D.Conclusion: HBV infection can lead to decrease of sperm motility (a+b)，ASGPRMab can effectively
9、prevent the sperm parameters changing caused by HBV. Foranother, ASGPR is one of the most important membrane protein receptor to HBVpaternal-fetal vertical transmission. Furthermore inhibit ASGPR in vitro maybe agood method to block the HBV paternal-fetal vertical transmission.Keywords: sperm, ASGPR
10、, HBV, paternal-fetal vertical transmission.3 华中科技大学硕士研究生学位论文引言乙型肝炎病毒（ hepatitis B virus，HBV）是指引起人类急性、慢性肝炎的 DNA 病毒,也称丹氏颗粒，简称 HBV。1963 年 Blumberg 在研究人类血1清蛋白多态性时，在澳大利亚土著人血清中发现一种肝炎相关抗原（hepatitis associated antigen ，HAA），通过抗原纯化、抗体制备并联系临床研究，最后确定为乙肝表面抗原，经后来的研究所证实。 HBV 属嗜肝 DNA 病毒科 (hepadnaviridae) ，血清中存在三种
11、形态的病毒颗粒：大球形颗粒、小球形颗粒及管形颗粒。基因组全长约 3200bp，是部分双链环状 DNA。乙型肝炎病毒感染是最常见的肝脏感染性疾病。全世界约 20 亿人曾感染HBV，其中3.5亿人成为慢性携带者 。我国属于高流行区，一般人群的HBsAg2阳性率高达 9.09%，其中相当一部分感染者发展为慢性肝炎，肝硬化，肝细胞癌甚至死亡 。迄今为止，慢性乙型肝炎仍缺乏有效的治愈手段,因此，如何预 3防乙肝病毒的感染是目前研究的热点问题。乙肝病毒传播方式主要包括：输血传播、医源性传播、性传播、密切生活接触传播以及垂直传播。随着人类生活水平的提高，乙肝疫苗、免疫球蛋白的使用，公共卫生和医疗技术的发展，
12、乙肝病毒的水平传播几率越来越低，乙肝病毒通过生殖细胞的垂直传播越来越受到学者们的关注。通过生殖细胞的垂直传播包括：通过卵母细胞的母婴垂直传播和通过精子的父婴垂直传播。母婴垂直传播较为复杂，除了阻遏通过卵母细胞感染胚胎的母婴垂直传播外，还需要阻遏胎儿在宫内通过胎盘血液交换引起的垂直传播，胎儿出生时以及出生后经母亲体液感染乙肝病毒。而通过精子的父婴垂直传播相对较为简单，只需要针对从“男性精子携 带乙肝病毒感染胚胎，乙肝病毒随胚胎发育复制表达” 这条途径控制乙肝病毒的父婴垂直传播，而这条途径的关键也是源头就在于控制乙肝病毒感染受精的精子。因此，本文主要针对 HBV-精子-胚胎父婴垂直传播进行研究。近几十年来，HBV 的预防主要基于人群的乙肝疫苗接种和乙肝免疫球蛋白等，然而对于 HBV 通过男性精子父
