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1、1凉血解毒方治疗银屑病的实验研究作者：顾敏婕, 高尚璞, 李咏梅【摘要 】 目的：观察凉血解毒方对小鼠尾部有颗粒层的鳞片和阴道上皮细胞有丝分裂的影响，探讨其治疗银屑病的可能作用机制。方法：选取 60 只小鼠随机分为凉血解毒方组、复方青黛胶囊组、阿维 A 胶囊组和生理盐水组，每组 15 只，另选 10 只正常小鼠作为空白对照组。按人鼠等效剂量连续灌胃相应药物 14 d，1 次/d ，第15 天处死，取材，苏木精和伊红（hematoxylin and eosin, HE）染色法检测并计算尾部表皮细胞中颗粒细胞百分比。随机选取 60只雌性小鼠，腹腔注射乙烯雌酚 3 d 后分为上述 4 组，继续腹腔注
2、射乙烯雌酚。另选用 10 只正常小鼠作为对照组。分组和灌胃方法同前。第 15 天小鼠腹腔注射秋水仙碱（2 mg/kg） ，6 h 后处死，取材，HE 染色法观察并计算小鼠阴道上皮细胞有丝分裂指数。结果：与生理盐水组比较，凉血解毒方组小鼠尾部鳞片颗粒细胞增加(P0.01)，小鼠阴道上皮基底细胞的有丝分裂细胞数减少（P0.01） 。 结论：凉血解毒方能促进小鼠尾部颗粒层形成和显著抑制小鼠阴道上皮细胞的有丝分裂，其治疗银屑病的机制可能与促进表皮细胞正常分化和抑制表皮细胞增殖有关。 【关键词】 凉血解毒方; 银屑病; 有丝分裂; 小鼠2Objective: To study the effects o
3、f Liangxue Jiedu Decoction, a compound traditional Chinese herbal medicine with the function of bloodcooling and detoxicating, in treating psoriasis in mice and to explore its mechanism.Methods: (1) Sixty mice were randomly divided into Liangxue Jiedu Decoction group, compound Indigo Naturalis capsu
4、le group, acitretin capsule group and normal saline group. Another 10 mice were selected as blank control. After 2week administration, mice were sacrificed to obtain samples. After hematoxylin and eosin (HE) staining, tail scales with granular layers were calculated by an optical microscope. (2) Exc
5、ept for ten mice in blank group, sixty female mice were injected intraperitoneally with diethylstilbestrol once daily. After 3day injection, mice were randomly divided into four groups and treated as above description. After 2week treatment, all mice were injected intraperitoneally with colchicine (
6、2 mg/kg), and sacrificed 6 h after the injection. The mitotic rate in virginal epithelium was calculated after HE staining.3Results: Compared with normal saline, Liangxue Jiedu Decoction could significantly inhibit the mitosis of mouse vaginal epithelium (P0.01) and promote the formation of granular
7、 layers in mouse tailscale epidermis (P0.01).Conclusion: The mechanism of Liangxue Jiedu Decoction in treating psoriasis may be related to promoting granular cell growth and inhibiting proliferation of epidermic cells.Keywords: Liangxue Jiedu Decoction; psoriasis; mitosis; mice上海市名中医马绍尧教授采用凉血解毒方治疗银屑
8、病，取得了较好的临床疗效1 。本实验通过观察中药凉血解毒方对小鼠尾部表皮鳞片模型和雌性小鼠阴道上皮有丝分裂模型的影响，探讨凉血解毒方治疗银屑病的作用机制。1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1 实验动物 昆明种 SPF 级小鼠，68 周龄，体质量4（202）g，雌雄兼取，共 140 只，由上海龙华医院实验动物中心提供，动物许可证号为 SCXK（沪）20030003 。1.1.2 实验药品 凉血解毒方（水牛角、生地黄、白茅根、土茯苓、丹参各 30 g，大青叶、紫草各 15 g，赤芍、牡丹皮各 9 g，白花蛇舌草 30 g） ，经上海龙华医院制剂室统一煎取。将中药加水 1 000 mL，浸泡 1
9、 h，武火煮沸后，文火煮 30 min，取汁 150 mL。第 2煎加水 500 mL，煎取 150 mL，两次煎液混合，浓缩至 1.36 g/mL备用；复方青黛胶囊（500 mg/粒） ，陕西天宁制药有限责任公司生产，批号为 051101；阿维 A 胶囊（10 mg/粒） ，重庆华邦制药股份有限公司生产，批号为 20060302；秋水仙碱注射剂（100 mg/支） ，华美生物制品公司生产，批号为 060404；乙烯雌酚注射液（2 mg/支，1 mL） ，上海通用制药有限公司生产，批号为050907。1.2 实验方法1.2.1 凉血解毒方对小鼠尾部鳞片颗粒层的影响 选取 70 只小鼠用作小鼠尾
10、部鳞片模型2 。取 10 只小鼠作为空白对照组，另 60只小鼠随机等分为 4 组，按人鼠等效剂量连续灌胃 14 d，1 次/d 。其中凉血解毒方组 15 只，灌胃剂量 26.97 g/(kgd)；复方青黛胶囊组 15 只，灌胃剂量 0.709 g/(kgd)；阿维 A 胶囊组 15 只，灌胃剂5量 3.55 mg/(kgd)；生理盐水组 15 只，灌胃剂量 0.4 mL/d。灌胃剂量参照药理与中药药理实验 3中的体型分数换算法计算，公式为：dB=dARBRA3WA3WB。其中 dB 是欲求算的 B 种动物每千克体质量所用剂量， dA 是已知 A 种动物每千克体质量所用剂量；WA、WB 为已知动
11、物 A、B 的体质量；RA、RB 为动物的体型系数。第 15 天上午 8 时将 70 只小鼠处死，取材、固定、切片，苏木精和伊红（hematoxylin and eosin, HE）染色，光学显微镜下计数小鼠尾部 100 个表皮细胞中的颗粒细胞数，并与对照组的数据进行比较。1.2.2 凉血解毒方对小鼠阴道基底细胞有丝分裂的影响 随机选取60 只雌性小鼠腹腔注射乙烯雌酚，0.2 mL/只，1 次/d ，连续 3 d，使小鼠处于高雌激素状态，小鼠阴道上皮细胞出现有丝分裂4 。同时选 10 只正常小鼠作为空白对照组。第 4 天将造模小鼠随机分为 4 组，灌胃方法和治疗方式同前，继续每日 1 次腹腔注
12、射乙烯雌酚。第 15 天将 70 只小鼠腹腔注射秋水仙碱 2 mg/kg，使细胞分裂停滞于有丝分裂期，6 h 后处死，取材，HE 染色，在光学显微镜下计数 300 个小鼠阴道基底细胞中所出现的有丝分裂细胞数，换算成每 100 个基底细胞的有丝分裂细胞数（有丝分裂指数） 。61.3 统计学方法 统计软件为 SPSS 11.5，计量资料采用 xs 表示，各组组间差异比较采用单因素方差分析，并采用 LSD 法进行两两比较。2 结 果2.1 凉血解毒方对小鼠尾部表皮细胞中颗粒细胞数的影响 生理盐水组小鼠尾部表皮浅层见少量颗粒细胞，各药物治疗组小鼠尾部表皮浅层见数量较多成层排列的颗粒层细胞形成。凉血解毒
13、方对小鼠尾部颗粒层形成有明显的促进作用，凉血解毒方组颗粒细胞显著多于生理盐水组（P0.01 ） 。见表 1 和图 1。表 1 凉血解毒方对小鼠尾部鳞片颗粒细胞形成的影响2.2 凉血解毒方对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂的影响 生理盐水组小鼠阴道上皮基底层见较多的核分裂细胞，而各治疗组阴道上皮基底层细胞核分裂少见。凉血解毒方对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂具有明显的抑制作用，凉血解毒方组有丝分裂指数显著低于生理盐水组（P0.01） 。见图 2 和表 2。表 2 凉血解毒方对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂的影响3 讨 论7银屑病由热毒侵犯肌肤血脉而致血热妄行，流溢肌肤所致。因紧张、劳累、情志不畅而导致银屑病的诱发与
14、加重，屡见不鲜。一旦发作，则红斑色鲜，肌肤灼热，瘙痒剧烈，患者因此而焦虑不安，心烦失眠。故急性发病或进展期患者，病性多为实证热证，由心肝火旺，热入血分，泛发肌肤而成。治宜凉血清心平肝，清热解毒，以犀角地黄汤主之。凉血解毒方中重用水牛角（代犀角） ，其为寒性类药，可解心经之热邪而宁心、除烦；生地黄、赤芍、紫草、大青叶、白花蛇舌草凉血活血、清热解毒；丹参活血化瘀、通络。实验结果提示，凉血解毒方与阿维 A 胶囊、复方青黛胶囊均能促进小鼠尾部鳞片上皮颗粒层的形成。凉血解毒方组小鼠尾部鳞片上皮颗粒层细胞在数量上和层次上比生理盐水组明显增多，体积明显增大，从而使表皮增厚（P0.01） 。凉血解毒方对雌性小
15、鼠阴道上皮细胞有丝分裂具有明显的抑制作用，凉血解毒方组小鼠阴道上皮的有丝分裂指数显著低于生理盐水组（P0.01 ） 。从病理角度看，银屑病皮损处表皮细胞增殖过快，单位面积的有丝分裂指数明显高于非皮损处，且皮肤颗粒层细胞减少或消失。因此，抑制表皮细胞的异常增生，诱导颗粒层细胞形成，无疑是治疗银屑病的重要机制之一5 。本实验中雌性小鼠经乙烯雌酚造模成功后，处于雌激素周期，表现为阴道口黏膜明显肿胀充血，病理显8示阴道上皮细胞有丝分裂增加，增生活跃。本实验中的模型组有丝分裂指数显著高于空白对照组，符合银屑病皮损中表皮细胞增生过度的特点6 ，因此通过用药前后比较有丝分裂指数的大小，可以了解药物对过度增殖
16、的上皮细胞的抑制作用。正常情况下，小鼠尾部鳞片表皮细胞中颗粒层缺失，仅在毛囊附近有少量的颗粒细胞，表皮较薄，其天然的角化形成与人类银屑病表皮相似，故可直接利用小鼠尾鳞片模型，模拟银屑病皮损中表皮角化不全7 。此模型简便易行，目前大多应用该模型进行银屑病药物实验研究8 。药物如能抑制阴道上皮有丝分裂，促进鼠尾鳞片颗粒层的形成，说明其可转化表皮细胞的角化过程，因此可能对银屑病具有治疗作用。维 A 酸类药物有诱导表皮细胞正常角化的作用，因其疗效肯定，是目前国际公认的治疗银屑病的常用药物之一。但常见皮肤黏膜过度干燥，以及部分患者出现肝功能、血脂异常的副反应。复方青黛胶囊也是目前临床上常用的中药制剂，患者服用后常出现胃肠道反应。本次动物实验研究证实，凉血解毒方能诱导小鼠尾部颗粒层形成，抑制雌性小鼠雌激素期阴道上皮细胞有丝分裂。因此中药凉血解毒方治疗银屑病的作用机制可能与其促进角质形成细胞的正常角化，抑制角质形成细胞过度增殖有关。9【
