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1、1健脾补血片中阿魏酸的质量浓度测定作者：胡森科，于燕，张敬华，苗江丽 【关键词】 阿魏酸；健脾补血片；HPLC摘要：目的 建立健脾补血片中阿魏酸的高效液相色谱(HPLC) 测定方法。方法 采用 HPLC法。色谱柱 Lichrospher C18(4.6mm250mm，5m)，C18 保护柱；流动相：乙腈0.378mol/L冰醋酸水溶液(3070) ；检测波长 321nm；流速0.8mL/min；柱温：室温；进样量 10L。结果 阿魏酸质量浓度在1.0-10.0mg/L范围内，与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9996)，平均回收率为 99.8%，RSD 为 0.26%。结论 HPLC可用于健脾
2、补血片中阿魏酸的质量浓度测定。关键词：阿魏酸；健脾补血片；HPLCDetermination of ferulic acid in Jianpibuxue tablets by HPLCABSTRACT: Objective To establish a determination method of ferulic acid in Jianpibuxue tablets. Methods HPLC 2was used with Lichrospher C18(4.6mm250mm, 5m) as the column. The mobile phase was a mixture of ac
3、etonitrile0.378mol/L acetum (3070) and in a flow rate of 0.8mL/min; The detective wavelength was 321nm; Column temperature was room temperature and the injection quantity was 10L. Results Ferulic acid in samples was well separated. The linear range was 1.0-10.0mg/L(r=0.9996). The average recovery wa
4、s 99.8% and RSD was 0.26 %(n=6). Conclusion This method can be used for quality control of ferulic acid in Jianpibuxue tablets.KEY WORDS: ferulic acid; jianpibuxue tablets; HPLC健脾补血片处方由党参、茯苓、皂矾、神曲茶、黑豆、白术、陈皮、甘草等组成。具有补血、益气、健脾和胃、消积之功能。用于脾虚血少所致的面黄肌瘦，食少体倦等症以及营养性、缺血性贫血及继发性、失血性贫血。为了有效地控制产品质量，对制剂中的主要成分阿魏酸采用
5、高效液相色谱(HPLC)法进行测定。1 材料与方法1.1 仪器与试药 日本岛津 LC10AT高效液相色谱输液泵，3SPD10AVP紫外可见检测仪，岛津 7725i进样器，ANASTAR 色谱工作站，DL360 超声波清洗器(浙江象山县石浦海天电子仪器厂，功率 240W，频率 35kHz)，乙腈为色谱纯，水为双蒸水，其他试剂为分析纯。阿魏酸对照品由中国药品生物制品鉴定所提供，批号0773-9910。健脾补血片由西安阿房宫制药有限公司提供，批号20030501-20030503。1.2 对照品溶液的配制 精密称取阿魏酸对照品，用甲醇溶解并制成每 mL含阿魏酸 0.1mg的对照品溶液，备用。1.3
6、供试品溶液的制备 取本品 20片，研细，取 2.5g，精密称定，置 100mL锥形瓶中，加甲醇 20mL，超声提取 30min，滤过，滤渣用甲醇洗涤 2次，每次 10mL，合并滤液，置 70 水浴蒸干。残渣加 0.2mol/L碳酸钠溶液 10mL溶解，转入 60mL分液漏斗中，用乙醚萃取 2次，每次 25mL，弃去乙醚相，水相用盐酸(5mol/L)调 pH至 1-2，再用乙醚萃取 3次，每次 20mL，合并乙醚相，水浴蒸干。残渣用甲醇溶解并定容于 10mL容量瓶中，离心，上清液作为供试液。1.4 阴性对照溶液的制备 按处方取除党参外的其他几味中药，依处方工艺制成片，再按上述供试品溶液的制备方法
7、制成阴性对照溶液。42 结果与讨论2.1 色谱条件 色谱柱 Lichrospher C18(4.6mm250mm，5m)，C18 保护柱；流动相：乙腈0.378mol/L冰醋酸水溶液(3070) ，使用前经 0.45m微孔滤膜过滤并脱气；检测波长 321nm；流速 0.8mL/min；柱温：室温；进样量 10L。 在此条件下，对照品、供试品及阴性样品溶液的色谱图如图 1所示。图 1 健脾补血片中阿魏酸的 HPLC图谱（略）Fig.1 HPLC graphs of ferulic acid in jianpibuxue tabletsa: standard; b: sample; c: blan
8、k; 1: ferulic acid2.2 线性关系考察 用甲醇稀释阿魏酸的对照品溶液，制成每1mL含 1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 、10.0g 的溶液，进样，记录峰面积，以峰面积 A对对照品溶液浓度 C作图，进行回归分析，得回归方程为：C=1.31410-5A+0.064, r=0.9996。说明，在此色谱条件下，阿魏酸质量浓度在 1.0-10.0mg/L范围内，与峰面积呈良好的线性关系。52.3 供试品溶液制备方法的考察 采用正交实验法对样品浸提体积、超声时间和乙醚提取次数等影响因素进行了考察。2.3.1 因素水平 A浸提体积(mL)：A1=10，A2=20，A3=30；B 超
9、声时间(min)：B1=10，B2=30，B3=60；C 乙醚提取次数：C1=1，C2=2，C3=3 。2.3.2 实验方法及结果 同批号样品，研细，精密称取 2.5g于 100mL锥形瓶中，分别按 L9(34)正交表 (表 1)进行试验，制得供试品并测定，用统计软件 SPSS11.0进行分析处理，结果见表 2-4。表 1 阿魏酸提取工艺正交试验 L9(34)结果（略）Table 1 The results of orthogonal test of extraction technology of ferulic acid表 2 阿魏酸提取工艺多因素方差分析（略）Table 2 Tests
10、of betweensubjects effects for extraction technology of ferulic acid6表 3 阿魏酸不同超声提取时间的方差分析表（略）Table 3 Multiple comparisons of different ultrasonic extracting times表 4 阿魏酸不同乙醚提取次数的方差分析（略）Table 4 Multiple comparisons of different number of times of extraction using ether2.3.3 最佳制备工艺的确定 上述实验结果表明，因素 A对实验
11、结果无显著性影响，因素 B、C 有显著性影响；B1 与 B2、B3 之间有显著性差异，B2、B3 之间无显著性差异；C1 与 C2、C3 之间有显著性差异，C2、C3 之间无显著性差异。考虑到实验操作的便易程度等因素，样品最佳制备工艺为 A2B2C3。2.4 精密度试验 按供试品制备方法制备一份样品，重复进样5次，每次 10L，按上述色谱条件测定峰面积，结果峰面积积分值RSD2%。2.5 稳定性试验 按供试品制备方法制备一份供试品溶液，分7别于 0、2、4、8、12h 精密吸取 10L，按上述色谱条件测定，记录峰面积积分值，结果峰面积积分值的 RSD1%，表明供试品溶液在 12h内稳定。2.6
12、 重复性试验 取同批样品 5份，按供试品制备方法制备样品并测定，结果 RSD1%。2.7 回收率试验 采用加标回收法，取已知含量样品 6份，分别精密加入阿魏酸对照品，按供试品制备方法制备样品并测定，结果阿魏酸回收率平均值为 99.8%，RSD 为 0.26%，表明回收率良好。2.8 样品测定 按供试品溶液的制备方法分别测定不同生产批号的三批样品，结果三批样品含阿魏酸的量在 4.978-8.957g/g间。3 结论HPLC法测定中药制剂中阿魏酸质量浓度的流动相主要有甲醇水12和乙腈水 3体系。本文对两种流动相体系进行了比较，结果在 Lichrospher C18(4.6mm250mm，5m)色谱
13、柱上乙腈水体系的分离效果优于甲醇水体系，考虑到阿魏酸的分子结构特点，加8入适量的醋酸使得阿魏酸的峰形更好。通过 HPLC指纹色谱定性6以确定制剂和药材中阿魏酸在色谱图中的位置。通过正交试验L9(34)对阿魏酸的提取工艺进行了优化，为测定健脾补血片中阿魏酸的质量浓度提供了一个可靠的方法，以利于健脾补血片的质量控制。参考文献：1陈发奎.常用中草药有效成分含量测定 M. 北京：人民卫生出版社,1997:570.2孟君，龚云,丁野，等. 妇科调经片质量标准研究 J. 中成药，2004, 26(7):541545.3孟艳彬，孙盛, 苏又凡，等. HPLC测定党参中阿魏酸的含量 J. 承德医学院学报 , 2003,20(2):140141.4严永清,余传隆 ,黄泰康,等. 中药辞海(第二卷) M. 北京：中国医药科技出版社,1996: 2048.5王乐云，胡建新,袁海雄，等. 妇科白带片的质量标准研究 J. 中国中医药信息杂志，2004, 11(3):223224.96赵良, 贺浪冲, 杜升旗. 丹皮药材指纹图谱定性和有效成分定量分析方法研究 J. 西安交通大学学报(医学版), 2004,25(6):617620.
