《LDR对人CML干祖细胞增殖与凋亡影响的实验研究（毕业设计-肿瘤学专业）》由会员分享，可在线阅读，更多相关《LDR对人CML干祖细胞增殖与凋亡影响的实验研究（毕业设计-肿瘤学专业）（57页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 徐州医学院硕士学位论文LDR对人CML干祖细胞增殖与凋亡影响的实验研究姓名：李向阳申请学位级别：硕士专业：肿瘤学指导教师：章龙珍20090501 徐州医学院硕士学位论文缩略词表Abbreviation 缩略词AMLCMLCR英文全称 中文全称acute myelogenous leukemiachronic myelogenous leukemiacompletely release急性粒细胞白血病慢性粒细胞白血病完全缓解CTL cytotoxic T lymphocyte 细胞毒性 T淋巴细胞GM-CFUHSCsLDRLSCsMNCPBSgranulocyte-macrophage col
2、ony-forming unit粒-巨噬细胞集落形成单位haemopoietic stem cellslow dose radiationleukemic stem cellsmononuclearcell造血干细胞低剂量辐射白血病干细胞单个核细胞磷酸盐缓冲生理盐水集落形成率存活分数phosphate buffered salinePlating efficiencyPESF surviving fractionSLD sub-lethal damage 亚致死损伤1 徐州医学院硕士学位论文论文审阅认定书研究生 在规定的学习年限内，按照研究生培养方案的要求，完成了研究生课程的学习，成绩合格；在
3、我的指导下完成本学位论文，经审阅，论文中的观点、数据、表述和结构为我所认同，论文撰写格式符合学校的相关规定，同意将本论文作为学位申请论文送专家评审。导师签名： 日期： 200年 月55 徐州医学院硕士学位论文第一章：HSCs与 LSCs放射敏感性的实验研究中文摘要目的：通过检测正常人造血干细胞（haemopoietic stem cells ，HSCs ）和慢性粒细胞白血病患者白血病干细胞（leukemic stem cells，LSCs）辐射后细胞存活曲线各参数，探讨两者放射敏感性和亚致死损伤（sub-lethal damage,SLD）修复能力的差异，为LSCs的靶向治疗提供理论 依据。方
4、法：取健康产妇脐血及初诊的慢性粒细胞白血病病人骨髓，采用免疫磁株分离法（EasySepHuman CD34 selection Kit）分别分选出 CD34+CD38 -的 HSCs和CD34 CD38 CD123+ - +的 LSCs细胞。实验依据 细胞类型分两组：即 HSCs组与 LSCs组，各组依照射剂量不同（0Gy、1Gy、2Gy、4Gy、6Gy 、8Gy 、10Gy）分为 7个亚组，每组每个剂量点均设 3个平行样本。接种于 1%甲基纤维素半固体培养基，照射后培养 14天即行集落形成实验。根据各组接种的细胞数、形成的集落数，计算细胞存活分数（surviving fraction，SF
5、），采用多靶 单击模型和线性二次模型拟合绘制细胞存活曲线，根据 D0、Dq、SF2及 比等放射生物学参数，比较两种细胞的放射敏感性和亚致死损伤（sub-lethal damage,SLD）修复能力的差异；流式细胞仪检测两种细胞的细胞周期分布及凋亡情况。结果（1） 90%的 HSCs 细胞处于 G0/G1期，而 50%的 LSCs处于 G0/G1期，两种细胞的凋亡指数均较低；（2）两种干细胞对射线均较敏感，呈现良好的剂量效应关系；（3）多靶单击模型中，HSCs的 SF2、D0、Dq 值分别为 0.3508、2.247、0.083，LSCs的 SF2、D0、Dq值分别为 0.2972、1.828、
6、0.037；（4）线性二次模型中，HSCs和 LSCs的 值分别为 4.577和 7.879。2 徐州医学院硕士学位论文结论（1）HSCs、LSCs对射线均较敏感，且照射后 亚致死损伤修复能力均较差；（2）LSCs细胞对射线的敏感性是 HSCs的 1.23 倍；（3）两种细胞辐射敏感性的差异可能与细胞周期分布差异有关。关键词：造血干细胞；白血病干细胞；放射敏感性3 徐州医学院硕士学位论文第二章：LDR对人 CML干祖细胞增殖与凋亡影响的实验研究中文摘要目的：探讨低剂量照射 (low dose radiation， LDR)在体外对人造血干细胞(hematopoietic stem cells，
7、HSCs)和白血病干细胞（ leukemic stem cells，LSCs ）增殖与凋亡的影响，并探讨其可能作用机制。方法:取正常人脐血及初诊的慢性粒细胞白血病病人骨髓，用免疫磁株分离法，分离纯化 CD34+CD38-的 HSCs和 CD34+ CD38-CD123+的 LSCs，实验依据细胞类型分成两组：HSCs组和 LSCs组；每组 LDR设 5个 剂量点（0cGy、5cGy、7.5cGy、12.5cGy、20cGy）。细 胞计数及克隆形成法分析 LDR对两种细胞增殖抑制的影响，流式细的胞仪检测其对周期分布的影响，Annexin/PI检测细 胞凋亡率情况。结果：（1）各剂量点 LDR处理
8、后，LSCs细胞增殖速度明 显加快、细胞数量增加；（2）克隆形成实验显示： LDR照射后， LSCs细胞的克隆形成能力明显增加（P0.05 ）；（ 5）LDR后 HSCs 和 LSCs的凋亡率极低，不能引起 HSCs和 LSCs的凋亡。结论：（1） LDR能特异性促进LSCs的增殖分化；（ 2）其作用机理可能是通过改变LSCs周期进程，使G0/G1期的LSCs 进入增殖周期，而与细胞凋亡无关；（3）LDR对HSCs的增殖、细胞周期分布和凋亡均无明显影响。关键词：低剂量辐射；凋亡；白血病干细胞4 徐州医学院硕士学位论文PartThe empirical study of LSCs VS HSCs
9、 radiosensitivityAbstractObjective To measure parameters of survival curves of HSCs and LSCs in vitro, in otherwords,to compare the difference of radiosensitivity and the repaireing ability ofsublethal damage repaire(SLDR) between HSCs and LSCs.Methods We utilized the EasySepTM magnet for CD34 cells
10、 isolation from the+ CD38-cord blood of term deliveries and CD34 CD38 CD123 cells isolation from the BM of+ - + patients who were firstly diagnosed as CML.The test were divided into two groups ofHSCs vs LSCs. According to different dosage of irradiation ,each group were redividedinto seven subset of
11、 dosage groups,including 0 Gy,1Gy,2Gy,4Gy,6Gy,8Gy,and10Gy.Every dosage group contains three parallel samples.The final concentration was1% methyl cellulose semisolid culture was used to detect colonyforming assay(CF) and measure the cell survival rate when HSCs and LSCs wereradiated with 6MV X-ray a
12、t the dose rate of 2Gy/min according to the each dosagegroups.Then the cells were incubated at 37 in humidified air 5% CO2 for colonyformation for a period of two weeks after irradiation.Counts colony formation numberand computes the survival fraction.The parameters of the multi-target/single-hitmod
13、el,D0,Dq,N,as well as those of the linear-quadratic model,ratio of alpha andbeta,were elicited, then compare the difference of radiosensitivity and the repaireingability of sublethal damage repaire(SLDR) between HSCs and LSCs. After irradiation，cells for each experimental group were harvested for de
14、tection of cell cycle, apoptosis.Results (1)The average proportion of HSCs in G0/G1 is 90%,and the averageproportion of LSCs in G0/G1 corresponds to 50%. The percentages of apoptosis in the5 徐州医学院硕士学位论文HSCs group and LSCs group were low .(2) Both HSCs and LSCs have a higerradiosensitivity to ionizin
15、g radiation.There is a good relation between the dose and theeffect.(3)The parameters of HSCs, D0 and Dq,were 2.247 and 0.083Gy,whereas theyare 1.828 and 0.037Gy for LSCs in the multi-target/single-hit model,respectively.(4)Inthe linear-quadratic model ,the ratio of alpha and beta increased from 4.577 to 7.879.Conclusion: (1) Both HSCs and LSCs have a higer radiosensitivity to ionizingradiation,and the ability of sublethal damage
