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1、非发酵革兰阴性杆菌,定义,非发酵革兰阴性杆菌，指一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌；多为条件致病菌。,O-F试验,发酵型（F）,氧化型(O),产碱型(-),非发酵革兰阴性杆菌包括假单胞菌属、产碱杆菌属、无色杆菌属、不动杆菌属、莫拉菌属、金氏杆菌属、黄杆菌属、艾肯菌属、土壤杆菌属、黄单胞菌属、丛毛单胞菌属等。,分类,分群依据,氧化酶试验葡萄糖氧化发酵试验动力试验,二、 非发酵初步分群,假单胞菌属,假单胞菌属为需氧、有鞭毛、无芽胞、无荚膜的革兰阴性杆菌，氧化酶试验阳性，DNA G+C为5871mol，包括200余种菌。多数为腐生菌，少数为植物和动物寄生
2、菌，大多为条件致病菌。 代表菌株为铜绿假单胞菌,假单胞菌属分布广泛，土壤、水和空气中均有存在，人类非发酵菌感染中，假单胞菌占70 80，主要为铜绿假单胞菌，其他较为常见的菌种有嗜麦芽窄食单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、产碱假单胞菌等。这些菌种也是医院感染的主要病原菌。,临床意义,微生物特性,共性 :G-杆菌，无芽孢，有荚膜，多数菌有鞭毛，专性需氧菌，生长温度范围广，最适35度 ，普通培养基上可以生长，可产各种水溶性色素。抵抗力强，多种抗生素耐药,微生物检验,2.鉴定：氧化分解葡萄糖、产酸不产气，触酶氧化酶阳性，吲哚 、甲基红、VP阴性。,微生物检验,3.药敏试验A组：头孢他定、庆大霉素、美
3、洛西林、替卡西林、哌拉西林B组：头孢吡肟、头孢哌酮、氨曲南、亚胺培南、阿米卡星、妥布霉素、环丙沙星C组：头孢噻肟、氯霉素U组：羧苄西林、头孢唑肟、四环素、诺氟沙星、SMZ,铜绿假单胞菌,铜绿假单胞菌广泛存在环境中，加之多种传播途径和污染，因此易感染,特别是免疫力低下的患者。引起:1.皮肤感染、呼吸道感染、泌尿道感染、烧伤感染2.菌血症、心内膜炎、囊性纤维变性3.感染眼部的铜绿假单胞菌，可以合成胶原酶，以致引起角膜穿孔而失明。,临床意义,生物学性状,形态与染色：G- 杆菌，多形性，有鞭毛、菌毛、荚膜，无芽孢,产荧光素和绿脓素培养特性：专性需氧，4不生长42 生长，在血平板上经3537，1824h
4、培养可表现为：菌落大而扁平、湿润、边缘不齐,有金属光泽,有生姜样芳香气味,菌落周围有宽大的兰绿色透明溶血环。,生物学性状,普通琼脂培养基上能产生水溶性绿色素，使整个培养基变为绿色。MAC培养基上，18-24h可形成微小无光泽半透明的菌落。SS平板上可行成类似沙门菌的菌落。,生物学性状,生化反应：氧化酶阳性，触酶阳性，O/F氧化型，精双（+）还原硝酸盐。抗原构造和分型：菌体O,鞭毛H,粘液S和菌毛抗原。抵抗力:耐潮湿、干燥、紫外线，不耐热和消毒剂，临床分离的菌株多耐药。,铜绿假单胞菌检验,1标本采集 按疾病和检查目的，分别采 取不同的标本：患者的血液、脑脊液、胸(腹)水、脓液、分泌液、痰、尿液、
5、十二指肠引流液、粪便等；医院病区或手术室的空气、水、地面、把手、医疗诊断器械及生活用品。,检验程序,检验方法,直接镜检：G-杆菌分离培养：在普通培养基生长良好，经1824h形成圆形、扁平隆起、湿润菌落。琼脂被染成绿色或黄绿色，约80-90产生绿脓素或荧光素。在血平板上表现为：菌落大而扁平、湿润、边缘不齐；有金属光泽；有生姜样芳香气味；菌落周围有宽大的兰绿色透明溶血环。,检验方法,鉴定：氧化酶阳性，触酶阳性，O-F试验氧化型、木糖产酸不产气，液化明胶，还原硝酸盐产生氮气，吲哚阴性，利用枸橼酸盐，精氨酸双水解酶阳性。,铜绿假单胞菌快速鉴定要点：1、能产生绿色素。2、血平板上菌落大而扁平、湿润、边缘
6、不齐；有金属光泽；有生姜样气味；菌落周围有宽大的兰绿色透明溶血环。3、氧化酶阳性,检验结果分析与报告,1.结合感染症状，在血、尿及无菌体液中检出特别是重复检出即可确定为病原菌。2. 若无感染症状，特别是儿童，检出的革兰阴性杆菌可视为正常菌群。3.注意铜绿假单胞菌的耐药性。,嗜麦芽窄食单胞菌,分 类,分类曾经过两次反复 ，最终定为假单胞菌属。,临床意义,分布广泛，为条件致病菌，可引起抵抗力低下患者呼吸道、泌尿道、伤口等部位的感染，严重者可出现菌血症和心内膜炎。 假单胞菌的感染中居第二位，非发酵菌所致的感染中居第三位。,微生物特性,G-杆菌，具有端鞭毛1-8根，有动力，无芽孢无荚膜。,微生物检验,
7、标本采集：血液标本先增菌后分离培养，其他标本直接接种。分离培养：营养需求不高，在血平板和普通琼脂平板上生长良好，经35培养18-24h后可形成中等大小、圆形、光滑、湿润、不溶血的菌落，并可产黄色色素。 4不生长，42 近半数生长。并在MAC平板上生长良好。,微生物检验,鉴定：氧化酶（-），明胶液化试验（+）， 七叶苷（+），赖氨酸脱羧酶（+）， 氧化分解葡萄糖。,药敏试验,含内酰胺酶。 临床治疗首选磺胺类和奎诺酮类抗生素。 对亚胺培南天然耐药 不用K-b法做药敏试验。,嗜麦芽窄食单胞菌初步鉴定要点,在血平板和MAC上生长良好氧化酶（-） OF试验氧化型 赖氨酸脱羧酶阴性 可产黄色色素 抗生素的
8、敏感方式,不动杆菌属,分 类,定义：为一群不发酵糖类、氧化酶阴性、不能运动的G-杆菌。属奈瑟菌科 17个杂交群 临床分离最多的为鲍曼不动杆菌，排在非发酵菌的第二位，仅次于铜绿假单胞菌。,临床意义,分布广泛 条件致病菌 医院感染的常见病原菌,微生物特性,G-球杆菌，常成对排列，也可单个存在。无芽孢，无鞭毛，粘液型菌株有荚膜。营养要求一般，在普通琼脂平板和MAC平板上均能生长。 SS平板上部分菌株可生长。,微生物检验,检验程序：,微生物检验,标本采集：对于含菌量较多的标本采取直接接种血平板和麦康凯平板，含菌量较少的标本需增菌后再培养。直接镜检：标本经革兰染色后镜检可见G-球杆菌常成双排列，并可见白
9、细胞吞噬现象。 抗原检测和分型：,微生物检验,分离培养：血平板形成圆形、灰白色、光滑、边缘整齐、直径2-3mm的菌落。洛菲不动杆菌菌落小，1-1.5mm。溶血不动杆菌可出现溶血。MAC平板生长良好，鲍曼不动杆菌可呈轻微红色。鉴定：氧化酶（-）、动力（-）、硝还（+）,药敏试验和结果解释,可采用K-B法药敏试验 鲍曼不动杆菌对全部氨基青霉素、一代二代头孢菌素和一代奎诺酮类抗生素天然耐药。,鲍曼不动杆菌初步鉴定要点,OF试验：O/-MAC 上生长良好，菌落呈轻微粉红色 氧化酶（-）快速分解葡萄糖和乳糖 无动力 对青霉素耐药,产碱杆菌属,1.与临床有关的有粪产碱杆菌及亚型、皮乔特产碱杆菌、木糖氧化产
10、碱杆菌及亚种，DNA G+C mol%为5670，典型菌种为粪产碱杆菌。2.人体的正常菌群，是医院感染的病原菌，可引起抵抗力低下患者发生败血症，并可从患者呼吸道、尿液、血液及脑脊液中分离出来。,产碱杆菌属,3.为G-杆菌，呈链状、周鞭毛、有动力，无荚膜。 4.在普通培养基上1824h形成无色透明菌落 。氧化酶及触酶均阳性，不分解任何糖类，O-F试验碱性，脲酶阴性，不液化明胶。,黄杆菌属,1.为一群无动力和芽胞、氧化酶阳性的G-杆菌。与临床相关菌种有短黄杆菌、脑膜炎败血性黄杆菌、芳香黄杆菌、水田黄杆菌、嗜糖黄杆菌、嗜醇黄杆菌、嗜温黄杆菌。模式菌种为水田黄杆菌。2.本菌有两个特点：产生黄色素,菌落
11、多数呈黄色；分解碳水化合物产酸不产气。 DNA G+C mol%含量3142。,3.存在于水、土壤和蔬菜中，还可从口腔、上呼吸道、皮肤中检出，是条件致病菌，也是引起医院感染的常见菌。可引起术后感染、菌血症、在新生儿及婴幼儿的化脓性脑膜炎中分离出脑膜败血性黄杆菌比例较高。,黄杆菌属,4. -杆菌，需氧代谢，血琼脂培养基生长良好，典型菌落为淡黄色，氧化酶、触酶、磷酸酶阳性。,黄杆菌属,5. 临床上常见的脑膜炎败血性黄杆菌及芳香黄杆菌对广谱抗菌药(如氨基糖甙类、-内酰胺酶类、四环素类、氯霉素)有耐药性，应根据药敏试验选择用药。,黄杆菌属,莫拉菌属,1.与临床有关的有缺陷莫拉菌、犬莫拉菌、非液化莫拉菌
12、、亚特兰大莫拉、林肯莫拉菌、苯丙酮酸莫拉菌、奥斯陆莫拉。DNA G+Cmol为40475。 2.本菌能引起眼结膜炎、气管炎、肺炎、脑膜炎、脑脓肿、心炎、心内膜炎及泌尿生殖系统炎症。近年来非液化莫拉菌引起脑膜炎及婴幼儿菌血症者日益多，应引起高度重视。,3.为-球杆菌，双短链状排列，具有多形性。 4.本菌营养要求较高，血琼脂平板上生长，无色不溶血的菌落。本菌氧化酶阳性，触酶阳性，无动力，不分解糖类，吲哚试验阴性。 5.对青霉素类敏感，对头孢类、四环素类、氨基糖甙类药物均为敏感。,莫拉菌属,军团菌属,1976年新发现的菌属。各种天然水源及冷、热水管道系统（如自来水、空调系统、冷却水塔）是本菌的储存场所。所致疾病：军团病。有流感型和肺炎型两种类型。主要症状：发热、寒颤、咳嗽、咳痰、胸痛、呼吸困难及腹泻等。主要通过呼吸道吸入带菌飞沫而感染。多流行于夏秋季。军团菌是胞内寄生菌，细胞免疫为主,G-杆菌，无芽孢,无荚膜,有菌毛和单端鞭毛。严格需氧，触酶+ ,部分菌株氧化酶+。营养要求苛刻，生长缓慢，初次分离需用BCYE培养基。鉴定：根据色素产生情况建立BCP斑点实验法。治疗：首选红霉素，可加用利福平、氨曲南 。氨基糖苷类、青霉素、头孢菌素类无效。,军团菌属,谢谢大家,
