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1、1 例水貂犬瘟热继发绿脓杆菌感染的诊治戴 秀美 ， 王秋 菊 ， 常 维山*( 山东农业大学动物科技学院 ， 山 东 泰安 271018)1 发病情况2013 年 11 月 22 日 ， 山 东省临朐县某大型水貂养 殖场出现发病症状 。该养殖场饲养水貂 3 600 只 ，连续数天出现水貂死亡 ， 每天死亡近 20 只 ， 死亡迅速 。经了解 ， 该貂场曾进行过一次犬瘟热疫苗的接种 ， 但接种时操作不规范 ， 不能保证每只水貂有足够的接种剂量 。水貂发病初期 ， 场主曾对病貂进行连续3 d 的药物治疗 ， 使用盐酸大观霉素和林可霉素进行拌食饲喂 ， 但收效甚微 ， 不能控制病情的发展 ， 遂来诸
2、城市皮毛动物研究所进行化验 。2 临床症状经问诊与观察 ， 病貂出现精神沉郁 ， 拒绝采食 ，部分出现极度消瘦 ， 鼻镜发绀 ， 鼻孔流出红色泡沫性液体 ， 并伴有异常叫声 ， 眼周围出现眼眦 ， 有的病貂出现四肢抽搐 、口吐白沫的神经症状 ， 排黑色或绿色粪便 ， 死后水貂倒提后口吐血水的临床症状 。3 剖检变化肺脏呈弥漫性出血 ， 呈暗红色 ， 压之出现气泡 ;气管中有大量血样泡沫 ; 心外膜有出血点 ; 肝脏肿大淤血发黑 ， 呈樱桃红色 ， 充满血液 ; 胆囊肿大 ， 内有大量绿色胆汁 ; 脾脏肿大出血并呈黑色 ; 肾脏出血 ;胃黏膜潮红 ; 小肠及大肠黏膜有散在出血点 ; 直肠黏膜出血
3、 ; 膀胱黏膜有条状出血 。4 实验室诊断4. 1 犬瘟热病毒 、犬细小病毒和阿留申病毒检测采用韩国进口 BIT 快速胶体金试纸条对病貂病料进行犬瘟热病毒和犬细小病毒检测 ， 结果犬瘟热病毒呈现阳性 ， 犬细小病毒呈现阴性 。病貂进行心脏采血 ， 离心后获得血清 ， 分别进行碘凝集和研究所建立的对流免疫电泳试验 ( CIEP) 检测送检的 6 只黑白色水貂中的阿留申 ， 结果碘凝集试验均为阴性 ， 对流免疫电泳试验均未出现沉淀线 ， 即为阴性 。排除了犬细小病毒和阿留申病毒感染 。4. 2 细菌分离与鉴定取肺脏组织直接涂片 ， 革兰染色后镜检 ， 可见大量革兰阴性杆菌 。无菌取肝脏接种于普通琼
4、脂 、绵羊血琼脂 ， 37 培养 24 h。结果在普通琼脂上长出表面光滑 、湿润 、圆形 、中等大小 、微微隆起的蓝绿色菌落 ， 且有特殊芳香味 ， 整个培养基被染成青绿色 ;在血液琼脂上菌落呈灰褐色 ， 出现红细胞溶解现象 ;单菌落进行肉汤培养 ， 可见肉汤呈青绿色 ， 且表面可见菌膜 。分离到的单菌落进行革兰染色镜检 ， 可见与直接涂片镜检相同的革兰阴性大杆菌 。4. 3 生化试验对分离菌的纯培养物进行常规生化鉴定 ， 鉴定结果为 : 乳糖 ( ) ， 葡萄糖 ( ) ， 麦芽糖 ( ) ，甘露醇 ( ) ， 蔗糖 ( ) ， 阿拉伯糖 ( ) ， 半乳糖 ( ) ， 木 糖 ( + )
5、， 卫 矛 醇 ( ) ， 棉 子 糖( ) ， 枸橼酸盐利用 ( + ) ， 硝酸盐还原 ( + ) ， 靛基质 ( ) ， M ( ) ， V P ( ) ， 硫化氢( + ) ， 尿素 酶 ( + ) ， 氧化酶 ( + ) ， 触酶 ( + ) ，明胶液化 ( + ) ， 丙二酸盐 ( + ) ， 精氨酸双水解酶( + ) ， 根据以 上试 验 ， 鉴定为绿脓杆菌 。4. 4 致病性试验10 只昆明小鼠分为 2 组 ， 试验组注射 0. 2 mL 菌液 ， 对照组注射等量的生理盐水 ， 试验组小鼠于 24 h内全部死亡 ， 从死亡小鼠脏器内又分离到能产生绿色素的革兰阴性杆菌 ; 对照组
6、 96 h 后未见异常 。4. 5 药敏试验分离菌肉汤培养物涂布普通琼脂平板 ， 使用庆大霉素等 14 种药敏片进行药敏试验 ， 结果分离菌对新霉素 、环丙沙星 、左氧氟沙星高度敏感 ， 对多黏菌素 、强力霉素 、头孢噻肟中度敏感 ， 对替米考星 、复方新诺明 、甲氧苄啶 、土霉素 、痢菌净等耐药 。5 治疗病貂隔离 ， 对笼舍 、粪便等进行喷洒消毒 ， 消毒可选用 5%热火碱水 。食槽和饮水槽彻底消毒 ， 地面消毒可用新洁尔灭 。根据药敏试验结果 ， 选用左氧氟沙星 ( 5 mg/kg) ， 每天 2 次拌料喂食 ， 连用 3 d。黄芪多糖拌料喂食 ， 每只 0. 8 g， 每天 2 次 ，
7、 连用 3 d 以增强水貂抵抗力 ， 间隔 1 d 后对健康貂群进行犬瘟热疫苗紧急接种 。经上述治疗后 ， 疾病得到了有效控制 ， 貂群基本恢复正常 。6 小结与讨论根据临床症状 、病理剖检 、细菌分离鉴定 、细菌生化鉴定 、药敏试验 、动物试验结合犬瘟热胶体金试041 Animal Husbandry Veterinary Medicine 2014 Vol. 46 No. 12纸检测 ， 确定临朐县某貂场黑白色水貂发病死亡 ， 原发病 为 犬瘟热 ， 绿脓杆菌为继发感染 。动物感染犬瘟热病毒后其机体免疫功能和抗病力下降 ， 经常继发某些条件致病菌感染而加剧病势 ， 绿脓杆菌本身亦为条件性致
8、病菌 ， 能引起水貂的出血性肺炎 ， 且绿脓杆菌引发的出血性肺炎通常发生于气温较高且降雨较多的 6、7、8 月份 ， 而临朐县水貂在11 月中下旬出现出血性肺炎 ， 且经检测有犬瘟热 ，说明本文病例很可能是犬瘟热继发了绿脓杆菌的感染 。本文貂场出现大批死亡原因主要是犬瘟热疫苗免疫剂量不足且免疫不规范 ， 这也提醒水貂养殖户切不可忽视对犬瘟热疫苗的适时接种 ， 一定要制定合理的免疫程序 ， 保证疫苗接种时操作规范 ， 才能从根本上预防犬瘟热并减少各种条件致病性细菌的继发感染 。收稿日期 : 2013 12 09* 通信作者野生蒲公英根叶提取物体内抗炎作用比较赵立香 ， 史静( 吉林农业科技学院制
9、药工程学院 ， 吉 林 吉林 132101)蒲公英为 多年生草本菊科蒲公英属植物 ， 味 苦 、甘 ， 性寒 ， 归肝 、胃经 。蒲公英具有较好的营养价值和较高的药用价值 。国内外学者深人研究了蒲公英的化学成分和药理作用 ， 发现蒲公英植物体中含特有的蒲公英醇 、蒲公英素 、胡萝卜素等多种健康营养成份 ， 并对中药的抗炎作用进行了证实和应用 ， 开发出了不少抗炎效果较好的蒲公英中药 。但蒲公英根叶提取物分别在体内抗炎作用的比较鲜见报道 。本文主要以野生蒲公英的根和叶为研究对象 ， 比较提取物在体内的抗炎作用差异 ， 为进一步研究蒲公英根和叶两部位所含化学成分的差别及改进临床应用提供了科学依据
10、， 也为蒲公英进一步开发利用打下基础 。1 材料与方法1. 1 药材与试剂野生蒲公英 ( 取材于吉林 4 月中旬花初开时的蒲公英 ) ; 二 甲 苯 ( 吉林省军区化工厂 ， 批 号 :131210) ; 0. 9%生理 盐水 ( 吉林农业科技学院实验室提 供 ) ; 95%乙醇分 析纯 ( 天津市津东天正化学试剂 厂 ， 批号 : 140121) 。1. 2 实验动物昆明种小鼠 35 只 ， 体重 18 22 g， 雌雄各半 ，由吉林医药学院实验动物中心提供 。1. 3 野生蒲公英粗提液的制备野生蒲公英水煎剂的制备 : 将粉碎的 50 g 干样品蒲公英根和叶分别和 500 mL 的水加入到
11、2 个砂罐中 ， 浸泡 1 h， 大火煮沸后文火熬煎 30 min， 滤出汁液 ， 向滤渣中加入 150 mL 水再煮沸后文火煎煮 15min， 过滤 ， 将两次滤液合并 ， 静置 24 h， 抽取上清液 ， 最后煎煮浓缩至 50 mL， 保证 1 mL 煎剂含生药 1g， 分别编号 A1 ( 根 ) 、A2 ( 叶 ) 。野生蒲公英 70% 醇沉物的制备 : 取 30 mL 蒲公英根 、叶水提物 ， 分别对其加 95% 乙醇 112 mL， 使含醇量达 70%， 静置 48 h， 滤过回收乙醇 ， 在水提浓缩液中浓缩至 30 mL， 即得蒲公英根 、叶水提 70%醇沉物 ， 分别编号 B1
12、( 根 ) 、B2 ( 叶 ) 。野生蒲公英 75% 醇沉物的制备 : 取 15 mL 蒲公英根 、叶水提 70%醇沉物 ， 分别对其加 95% 乙醇 80mL 使含醇量达 75%， 静置 48 h， 滤过回收乙醇 ， 在水提浓缩液中浓缩至 15 mL， 即得蒲公英根 、叶水提75%醇沉物 ， 分别编号 C1 ( 根 ) 、C2 ( 叶 ) 。1. 4 鼠耳肿胀模型建立取 35 只供试小鼠 ， 随机分为 7 组 ， 雌雄各半 ，编号 A1、A2、B1、B2、C1、C2、D 组 ， D 为对照组 ， 按照 0. 2 mL/10 g 的剂量 ， 分别对 A1、A2、B1、B2、C1、C2 组小鼠灌胃口服相应编号的提取液 ， 对照组灌胃相应剂量的生理盐水 。末次给药 1 h 后用二甲苯致耳肿胀 ， 按下式求出给药组及对照组肿胀度 5。数据用 x s 表示 ， 数据间 差 异的显著性采用SPSS13. 0 软件处理 。肿胀度 = 右耳质量 左耳质量肿胀度抑制率 =( 给药组肿胀度 对照组肿胀度 )对照组肿 胀 度 %2 结果与分析通过建立二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验模型 ， 研究蒲公英不同部位提取物的抗炎作用 ， 结果见表 1。141畜牧与兽 医 2014 年 第 46 卷 第 12 期
