《喉鳞状细胞癌RECK基因甲基化状态与放疗敏感性的关系》由会员分享，可在线阅读，更多相关《喉鳞状细胞癌RECK基因甲基化状态与放疗敏感性的关系（4页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、主旦_月十瘤0 2 箜 第5期ChinJ Clin Oncol 2014，Vo141，No5 wvgwcjcoan 315 喉鳞状细胞癌REOK基因甲基化状态与 放疗敏感性的关系 崔静李辉卢琳琳 摘要 目的：检测原发性喉鳞状细胞癌组织和正常喉黏膜组织的RECK基因启动子甲基化状态，分析患者术后进行放疗后 RECK基因甲基化与放疗敏感性的关系。方法：甲基化特异性PCR检测手术切除的喉鳞状细胞癌标本70例及正常喉黏膜标本15 例的RECK基因甲基化情况，放疗6个周期，随访5年，分析RECK基因甲基化与放疗敏感性及治疗效果的关系。结果：经6个周 期放疗后，放疗敏感47例(6714)，放疗不敏感23例
2、(3286)，放疗敏感组RECK基因甲基化水平低于放疗不敏感组(P175区域的组织提取 DNA。 123亚硫酸氢钠修饰参照试剂盒说明进行操 作：先将约2 txg DNA在15 mL EP管中，用双蒸水稀 释至50 L，加55 L新鲜配制的3M NaOH后42水 浴30 min，然后加30 L 10 mM对苯二酚至上述水浴 后的混合液中；再加入520 L 36M亚硫酸氢钠，加 200 L石蜡油，50避光水浴16 h。 124修饰后DNA纯化回收 预热树脂10 min (37)，将移液器枪头伸人石蜡油层下吸取混合液 600 IxL于洁净2 mL EP管中；然后使用Promega Wiz ard C
3、lean up DNA纯化回收系统，对修饰后的DNA进 行纯化回收。 125甲基化特异性PCR反应PCR反应体系：去 离子水l165 L；lOxBuffer 2 IxL；dNTP 16 L；上、下 游引物各1 L；DNA模板3 L；Tap酶O15 jxL；加去 离子水至2O L。循环参数：94 预变性5 min后35 个循环：94变性30 S，54c(=复性30 S，72延伸30 S， 最后1个循环延伸5 min。将产物琼脂糖凝胶(25 gL) 电泳，GeneFinder染料染色。以甲基化酶处理、未处 理的正常人外周血细胞、去离子水分别作为甲基化 阳性对照、甲基化阴性对照及空白对照。每批标本
4、同时扩增甲基化和非甲基化阳性对照。甲基化上 游引物5 一G1vrAG 盯rr rIr】 Arr】 TAGTGGTTCG A一3 ，下游弓I物5 一TCCAAAACCTCCCGAAAACGAA AACG一3 ；非甲基化上游引物-GG1_rAG1 TTTTT rrIrrTAT1_I AGTGG1_I GA一3 ，下游引物5-ATTTCC AAAACCTCCCAAAAACAAAAACA一3 。 13临床资料 手术后所有患者均在本院放射科接受6个周期的放 疗，2 Gy肷，l d，5 d为1个周期，总剂量6672 Gy。 放疗疗效评定标准：完全缓解(CR)：影像学未发现肿瘤 或肿瘤消失，症状、体征消失，维持14周，胸苷激酶 或鳞状细胞癌相关抗原均在正常值范围内(胸苷激 酶2 pmolL，鳞状细胞癌相关抗原15 ngmL)；部 分缓解(PR)：影像学暂未发现肿瘤或肿瘤消失，症 状、体征部分消失，维持O05)；但 在有无淋巴结转移、TNM临床分期及不同肿瘤分化
