《临床检验基础血型和输血》由会员分享，可在线阅读，更多相关《临床检验基础血型和输血（18页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、第五章血型和输血血型定义：早期指红细胞表面抗原的差异，现知，血小板和白细胞表面抗原也存在差异，因此，血型是抗原抗体系统的遗传特征。 血型研究的应用：治疗输血、器官移植、骨髓移植、法医鉴定、考古研究等。第一节红细胞 AB0 血型系统 本节考点：（1）ABO 血型系统的抗原及抗体检查 （2）ABO 血型系统的亚型 （3）ABO 血型鉴定 （4）交叉配血法 （5）ABO 血型鉴定及交叉配血中常见错误 （6）ABO 血型系统主要临床意义 （一）AB0 血型系统的抗原及抗体检查1996 年，国际输血协会（ISBT）将红细胞表面抗原分为 23 个血型系统、5 个血型关联和 2 个血型系列。血型系统指由一个
2、或数个基因所编码的数个相关联抗原的组成。目前，国际输血协会对红细胞血型系统的命名，有 2 种方法：一种是 6 位数字法，如 001001 为 AB0 血型系统的 A 抗原；另一种是字母加数字法，如 RH1 为 Rh 血型系统 D 抗原。1.AB0 血型抗原 （1）AB0 抗原的遗传：AB0 血型系统的产生及定位：由 3 个分离位点的基因所控制，即AB0、Hh、Sese 基因。基因 Hh 和 Sese 紧密相连在第 9 对染色体上。现在一般接受“三复等位基因”学说：认为在决定 AB0 血型遗传的基因座上，有 A、B、O 三个等位基因。AB0 遗传座位在第 9 号染色体的长臂 3区 4 带。A 和
3、 B 基因对于 0 基因而言为显性基因，0 基因为隐性基因。父母双方如各遗传给子代一个基因.则可组成 6 个基因型；O0、AA、A0、BB、BO、AB；4 种表现型：A、B、O、AB。 （2）AB0 抗原的发生：56 周胎儿红细胞已可测出 ABH 抗原。新生儿 A、B 抗原位点较成人少，一般在生后 18 个月时才能充分表现出抗原性，但抗原性也仅为成人的 20%。此外,ABH 抗原频率亦随种族而不同。（3）AB0 分泌型：ABH 抗原不仅存在于红细胞膜上，也可存在于白细胞、血小板及其他组织细胞上。ABH 血型特异物质存在于唾液（含量最丰富）、尿、泪液、胃液、胆汁、羊水、血清、精液、汗液、乳汁等体
4、液中，但不存在于脑脊液。这些可溶性抗原又被称为“血型物质”。凡体液中有血型物质者为分泌型（可以中和或抑制抗体与具有相应抗原的红细胞发生凝集），无血型物质者为非分泌型。 血型物质意义：测定唾液血型物质，可辅助鉴定血型。中和 AB0 血型系统中的“天然抗体”，有助于检查免疫性抗体，鉴别抗体的性质。检查羊水可预测胎儿 AB0 血型等。2.AB0 系统抗体 （1）天然抗体与免疫性抗体：天然抗体是在没有可觉察的抗原刺激下而产生的抗体，以 IgM 为主，又称完全抗体或盐水抗体；也可能是由一种无觉察的免疫刺激产生而得。免疫性抗体：有IgM、IgG、IgA，但主要是 IgG。抗 A 和抗 B 可以是 IgM
5、与 IgG，甚至是 IgM、IgG、IgA 的混合物，但主要是 IgM，而 0 型血清中以 IgG 为主。（2）天然抗体和免疫抗体的主要区别；见表 1-5-1。 （3）抗 A、B 抗体：O 型人血清中不仅有抗 A、抗 B 抗体，还含有一种抗 A、B 抗体。它与 A 型或 B 型红细胞都能凝集，但当用 A 或 B 型红细胞分别吸收时，不能将其分为特异的抗 A 和抗 B。它与两种红细胞反应的活性不能通过特异吸收来分离。即使用 A 和 B 型红细胞反复吸收，它仍保持与 A 和 B 型红细胞都发生反应的活性。所以，不可能在抗 A 和抗 B 的混合液中找到抗 A、B 具有的血清学活性。这可能是 O 型血
6、清中的抗 A、B 是一种直接针对 A 和 B 抗原的共同抗体结构。 （二）AB0 血型系统的亚型亚型是指属同一血型抗原，但抗原结构和性能或抗原位点数有一定差异。AB0 血型系统中以 A 亚型最多见，A 亚型主要有 A1和 A2，占全部 A 型血的 99.9%，其他 A 亚型（A 3、A X、A M）为数少；作 AB0 血型鉴定时，应加 O 型血清，以防对 A 亚型误定型。B 亚型（B 3、B M、B X）比 A 亚型少见，临床意义不大。 1.A 1、A 2亚型基本特征 A 1亚型的红细胞上具有 A1和 A 抗原，其血清中含有抗 B 抗体；A 2亚型的红细胞上只有 A 抗原，其血清中除含抗 B
7、抗体外，还有少量抗 A1抗体。在直接凝集反应中，A 1、A 2亚型两种红细胞的 A1与 A2抗原均能与抗 A 试剂发生凝集反应。但抗 A1不仅存在于 A2亚型，在 B 型和 0 型人的血清中除含抗 A 外还有抗 A1，所以可以从 B 型人血清中获取抗 A1试剂。 2.A 1、A 2亚型的鉴定方法 以抗 A1试剂可区别 Al、A 2血清，方法是：可从 B 型人血清获取抗 A1试剂，B 型血清有抗 A、抗 A1，其中抗 A 抗体能与 A 型红细胞的 Al、A 2抗原凝集，如吸收抗 A，就只剩下抗 A1。鉴定 A1、A 2亚型，凡与抗 A1试剂发生凝集反应者为 A1，如果同时还与抗 B 凝集，则为
8、A1B 型；不与抗 A1试剂凝集者，为 A2或A2B 型。 3.A 1、A 2亚型鉴定的意义目的是防止误定血型。尽管我国 A2、A 2B 型在 A 与 AB 型中所占比例少于 1%，但定型时易将弱 A 亚型误定为 O 型，如果给其输入 0 型血，不会有太大问题，但是如果把弱 A 亚型误定为 O 型，并输给 O 型人，则受血者的抗 A 抗体就可能与输入的弱 A 亚型的红细胞起反应，引起血管内溶血性输血反应。因此，应避免将弱的 A 亚型定为 0 型，如：Ax 型红细胞与 B 型血清（抗 A 抗体）不发生凝集，但与 0 型血清可发生程度不一的凝集，这可能是因为 0 型血中抗 A 效价比 B 型血抗
9、A 效价高，故现做 AB0 血型鉴定时，应加 0 型血清（内含抗 A、抗 B 及抗 AB），以防将 Ax 型误定为 0 型。（三）AB0 血型鉴定1.原理常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判定血型。常规的方法有：正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。反向定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中未知的抗体。结果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散在游离状态为阴性。ABO 血型定型原则见表 1-5-2。 2.鉴定方法 （1）生理盐水凝集法：玻片法：操作简单，适于大量标本检查，但反应时间长；被检查者如血清抗体效价低，则不易引起红细
10、胞凝集，因此，不适于反向定型。试管法：由于离心作用可加速凝集反应，故反应时间短，而且，借助于离心力可以使红细胞接触紧密，促进凝集作用，适于急诊检查。 红细胞亚型抗原性弱，如抗 A 抗 B 标准血清效价低时，易造成漏检或误定。如加用 0 型（抗 A、B）血清和反向定型，可避免此类错误。 玻片法凝集结果判断：红细胞呈均匀分布，无凝集颗粒，镜下红细胞分散。在低倍镜下凝集程度强弱判断标准：呈一片或几片凝块，仅有少数单个游离红细胞为（+）。呈数个大颗粒状凝块，有少数单个游离红细胞为（+）。数个小凝集颗粒和一部分微细凝集颗粒，游离红细胞约占 12 为（+）。肉眼可见无数细沙状小凝集颗粒。于镜下观察，每凝集
11、团中有 58 个以上红细胞凝集为（+）。可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多的游离红细胞（）。可见极少数红细胞凝集，而大多数红细胞仍呈分散分布为混合凝集外观。镜下未见细胞凝集，红细胞均匀分布为（-）。 （2）凝胶微柱法：是红细胞抗原与相应抗体在凝胶微柱介质中发生凝集反应的免疫学方法。血型抗体为单克隆抗体，加入试剂、标本，用专用离心机离心后可直接用肉眼观察结果或用血型仪分析。此法操作标准化，定量加样，确保结果准确性。3.抗 A、抗 B 和抗 AB 标准血清标准 准血清均采自健康人，并应符合下述条件：特异性：只能与相应的红细胞抗原发生凝集，无非特异性凝集。效价：我国标准抗 A 和抗 B 血清效价均
12、在 1：128 以上。亲和力：我国标准要求抗 A 对A1、A 2及 A2B 发生反应开始出现凝集的时间分别是 15s、30s 和 45s；抗 B 对 B 型红细胞开始出现凝集的时间为 15s。凝集强度为 3min 时，凝块不小于 1mm2。冷凝集素效价：在 1：4 以下。无菌。灭活补体。4.血型鉴定操作时注意事项 一般注意事项：所用器材必须干燥清洁、防止溶血，凝集和溶血的意义一样。为避免交叉污染，建议使用一次性器材。标准血清从冰箱取出后，应待其平衡至室温后再用，用毕后应尽快放回冰箱保存。加试剂顺序：一般先加血清，然后再加红细胞悬液，以便核实是否漏加血清。虽然 IgM 抗 A 和抗 B 与相应红
13、细胞的反应温度以 4最强，但为了防止冷凝集现象干扰，一般在室温 2024内进行试验，而37条件，可使反应减弱。幼儿红细胞抗原未发育完全、老年体弱者抗原性较弱，最好采用试管法鉴定血型。玻片法反应时间不能少于 10min，否则较弱凝集不能出现，造成假阴性。正、反定型结果一致才可发报告。反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，长期大量应用免疫抑制，血型抗体可减弱或消失；血清中存在自身免疫性抗体、冷凝集素效价增高、多发性骨髓瘤、免疫球蛋白异常均可造成反定型困难；新生儿体内可存在母亲输送的血型抗体，且自身血型抗体效价又低，因而出生 6 个月以内的婴儿不宜做反定型。老年人血清中抗体水平大幅度下降或被检者血清中缺乏
14、抗 A 及（或）抗 B 抗体，可引起假阴性或血型鉴定错误。（四）交叉配血法最重要的是 AB0 血型配合。必须在 AB0 血型相同，且交叉配血无凝集时才能输血。 1.目的：检查受血者与供血者是否存在血型抗原与抗体不合的情况。 2.原则：主侧加受血者血清与供血者红细胞；次侧加受血者红细胞与供血者血清，观察两者是否出现凝集。3.方法（1）盐水配血法：简便快速。主要缺点是只能检出不相配合的完全抗体，而不能检出不完全抗体。 （2）抗球蛋白法配血法：又称 Coombs 试验。是最可靠的确定不完全抗体的方法，但操作繁琐。抗球蛋白法配血法是最早用于检查不完全抗体的方法。 直接抗球蛋白法可检查受检者红细胞是否已
15、被不完全抗体致敏；间接抗球蛋白法可用于鉴定 Rh 血型及血清中是否存在不完全抗体。本法虽较灵敏，但也有一定限度，且操作复杂，不利于急诊检查和血库的大批量工作。试剂：抗球蛋白试剂盒：包括抗广谱、抗 C3、抗 IgG 3 种试剂。阳性对照：IgG 型抗 D 致敏 5%RhD 阳性红细胞生理盐水悬液。阴性对照：正常人 5%红细胞生理盐水悬液。注意事项：标本采集后应立即进行试验，延迟试验或中途停止可使抗体从细胞上丢失。抗人球蛋白血清应按说明书最适稀释度使用，否则可产生前带或后带现象而误为阴性结果。阴性对照凝集：可能是抗人球蛋白血清处理不当，仍有残存的种属抗体，或被细菌污染，应更换血清重做试验。核实阴性
16、结果方法：在该试管中加 1 滴 IgG 致敏红细胞，如结果为阳性，则表示试管内的抗球蛋白血清未被消耗，阴性结果可靠。阳性对照不凝集：可能是抗人球蛋白血清或用于致敏红细胞的不完全抗 D 血清失效，或红细胞未洗净带人球蛋白所致，应更换血清或洗净红细胞后重做。如需了解体内致敏红细胞的免疫球蛋白的类型，则可分别以抗 IgG、抗 IgM 或抗 C3 单价抗球蛋白血清进行试验。（3）聚凝胺法配血法：可以检出 IgM 与 IgG 两种性质的抗体，能发现可引起溶血性输血反应的几乎所有规则与不规则抗体，故本法已逐渐推广使用。配血原理：聚凝胶分子是带有高价阳离子多聚季镀盐，溶解后带有很多正电荷可以中和红细胞表面负电荷，有利于红细胞凝集，低离子强度溶液也能减低红细胞的 Zeta 电位，可进一步增加抗原抗体间的吸引力。当血清中存在 IgM 或 IgG 类血型抗体时，与红细胞发生紧密结合，此时加入枸橼酸盐解聚液以消除聚凝胶的正电荷，使 IgM 或 IgG 类血型抗体与红细胞
