《TGF-β3基因转染成纤维细胞促进大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合的实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《TGF-β3基因转染成纤维细胞促进大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合的实验研究（4页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、2010年第5 andWoundttealing(Hcmnic Edition)Fehuaw2010V0l 5N01 TGF一133基因转染成纤维细胞促进 大鼠深度烫伤创面愈合的实验研究 唐世杰 朱镇森胡素銮谢思田姚建 作者简介：唐世杰，男，主任医师，硕士研究生导师，现任汕头大学医学院第二附属医院烧伤 整形外科主任。擅长大面积严重烧伤的救治，唇腭裂修复、软组织缺损的修复及各类美容整形 和再造整形手术，曾获市、厅、省级科研课题8项，发表论文20余篇。 【摘要】 目的观察TGFt33基因转染的成纤维细胞对深度大鼠烫伤模型创面愈合的影响。 方法将90只Wistar成年大鼠随机分为模型对照组(C组)、
2、表皮转化生长因子组(EGF组)和TGF 3转基因成纤维细胞组(TGF一133组)，制作10TBSA烫伤模型，各组给予对应治疗，检测各组大鼠 的创面愈合率，HE染色观察烫伤创面组织变化，sP法观察烫伤皮肤组织中TGF一133蛋白表达情况。 结果烫伤后14 d、21 d，创面愈合率TGF一133组最高，与EGF组及C组之间的差异有统计学意义(分 别为P005)。烫伤后14 d，TGF133组与 EGF组之间的差异有统计学意义(P005)。烫伤 后21 d，TGF-B3组与EGF组之间的差异有统计学 意义(P005)；烫伤后7 d，14 d， c组、EGF组与TGFB3组之间的差异有统计学意义 (P
3、005)。烫伤后21 d，C组、EGF组与TGF一133 组之问的差异有高度统计学意义(P005)。 TGFB3在皮肤组织表达结果(图4)：烫伤后1 d、3 d、7 d、14 d及21 d，TGF-83组与C组及EGF组 之问的差异均有高度统计学意义(P005)， 见 表3 讨 论 基因转移技术是近年来分子生物学迅速发展的 重要标志，也是临床基因治疗的主要手段，国内外有 用EGF、PDGF及IGF等基因转移促进创面修复、血 管再生、组织及器官移植的实验研究 j，国内有用 EGF转染成纤维细胞促进创面愈合的研究。，国外 有TGFB1体细胞基因转移治疗糖尿病等自身免疫 性疾病，利用离体、在体成骨细
4、胞腺病毒介导的基因 转移治疗等研究 。但选择TGFB3基因作为目的 基因，转染成纤维细胞后移植创面，以期达到促进创 面愈合的目的的实验尚未见报道 。 创面愈合是一个复杂的生物学过程，需要许多 不同细胞之间的相互作用以及大量完善的细胞信号 转导机制，任何一步环节出错都将导致延迟愈合或 不愈合。如炎性反应控制好了愈合过程才能继续， 又如过量的基质沉积和塑形的减少导致纤维化的产 生等等。目前有许多研究在探索应用外源性生长因 子来促进创面愈合，包括PDGF、FGF、EGF及TGF B 12-14。本实验采用转染的含TGFp3一cDNA质粒的 成纤维细胞移植创面，以期能在创面持续表达TGF B3蛋白，并
5、采用rhEGF蛋白作为治疗药物，比较两 者之间对创面愈合的疗效，以期进一步指导临床烧 伤创面的治疗。 转化生长因子(transforming growth factorp， TGFB)是一个多功能的多肽家族，它调节细胞的生 长发育及组织受伤后的修复重塑。在TGFB三个 异构体中，TGFB1功能最强，但在创面愈合里有正 面及负面的报道，Wang等 观察到在组织损伤后 的很短时问内，内源性的TGFB1即有升高，而过量 表达TGFB1的转基因小鼠在全层皮肤缺损愈合上 明显比非转基因小鼠慢。Brunner等 表明，在创 面过量延长表达的TGFBl并不会促进创面愈合， 部分归因于它的促炎性反应能力。本实
6、验结果表 明，烫伤后7d，TGFB1表达达到高峰，在无TGF-133 拮抗的情况下，EGF组的创面愈合率比TGF一133组 表2烫伤后不同时间里TGFBl在大鼠烫伤皮肤组织中表达的MOD值( s) 注：与C组比较， P005，与C组比较， P0O1 表3烫伤后不同时间里TGF一133在大鼠皮肤组织中表达的MOD值(面s) 注：与C组、EGF组比较， P005，与C组、EGF组比较， P0O1 2010年第5卷第1期Olin J LvR印Bir andWoundf切lil (ect日 cEdition 要高；但在烫伤后21 d，TGF一133组的TGF一131表达明 显少于EGF组及c组，而在创
7、面愈合率上，TGFt33 组与EGF组相比差异具有统计学意义，说明了TGF B1在创伤早期可促进创面愈合，但是在后期反而会 导致创面延迟愈合。此结果的产生可能与TGF-133 通过抑制TGF131及TGF132的表达，使三个异构体 之间达到一种平衡状态，从而促进创面愈合有关。 分子杂交和染色体图谱检查发现，TGF一132与TGF Bl之间有72的同源序列，这种高度同源性可以解 释两者所具有的相似作用 。从本实验中TGFp2 在大鼠皮肤组织中表达的MOD值可以看出，在不同 烫伤时间里TGF一132与TGF-B1的表达十分相似，而 且在TGF一133组中，两者的MOD值均低于C组及 EGF组，这与
8、大部分关于TGF13的研究所得出的结 论相符合-TGF一133可以通过降低TGFB1及TGFB2 的水平 。TGF-133作为抗瘢痕因子，与TGFpl和 TGF132的功能截然不同，TGF一133除能够刺激成纤 维细胞合成胶原、整合素等细胞外基质及加快血管 化进程促进创伤的愈合外，却并不增加瘢痕的形成。 有研究进一步证实rhTGF133能有效地提高成纤维 细胞的胶原合成，这样可能对加速创面愈合具有重 要的作用 。本实验采用TGF一133转基因转染的成 纤维细胞移植创面来治疗烫伤大鼠模型，在不同烫 伤时间的TGF-133 MOD值可以看出，TGF一133表达远 比相同时期的C组及EGF组要高，而
9、TGFB1、TGF B2在TGF-133组的表达明显比在c组及EGF组要 低，TGF-133的创面愈合率明显比C组及EGF组要 高，以上的实验结果都说明TGF133对加速创面愈合 具有重要的作用。 本实验表明，TGF一133转基因转染成纤维细胞可 能通过在创面上持续分泌TGF133蛋白，降低TGF p1及TGF-p2的水平，从而促进创面的愈合。但其 具体的细胞及分子机制有待进一步研究。创面愈合 及病理性瘢痕的防治是现代外科研究的热点和临床 难点，因此下一步实验不仅要在细胞及分子机制观 察TGF一133转基因转染的成纤维细胞在创面的存活， 分泌TGF一133的情况以及如何给予调控，而且要在防 治
10、创面愈合后病理性瘢痕形成方面提供有价值的理 论和实验依据，为其进一步临床应用打下理论基础。 (本文图14见光盘) 参考文献 1 Martin PWound healingaiming for perfect skin regenerationJ Science，1997，276(5309)：7581 2 Wu LC，Siddiqui A，Morris DE，et a1Transforming growth factor B3(TGF一133)accelerates wound heMing without alteration of scar prominenceJArch Surg，1997
11、，132(7)：753-760 3唐世杰，谢思田，胡素銮，等真核表达载体pcDNA31(-)转化生长 因子B3的构建J中华实验外科杂志，2O05，22(12)：14381441 4 RomanaSouza B，Nascimento AP，Monte-Alto-CostaLowdose pro- pranolol improves cutaneous wound healing of buminjured ratsJ Plast Reconstr Surg，2008，122(6)：16901699 5王莉，严忠馥，冯世杰，等不同致伤时问所致大鼠深II度烫伤 创面自然愈合的病理学观察J上海实验动物
12、科学，2000，20 (2)：79-81 6贾赤字，陈璧EGF、TGF-131、抗TGF-131中和抗体对大鼠深II 度烫伤创面愈合的影响J第四军医大学学报，1999，20(5)： 427-430 7刘小平，卢金利，陈谦，等芦荟凝胶外涂对大鼠浅度烫伤刨面愈 合及其相关因子表达的影响J陕西医学杂志，2006，35(6)： 646-648 8王伟，韩玉，惠汝太血小板衍生生长因子D(PDGFD)转基因鼠 模型的鉴定J中国分子心脏病学杂志，2004，4(2)：84-88 9曹蕾，Felieia，焦向阳，等转基因成纤维细胞向创面持续投递新 型表皮细胞生长因子J中国修复重建外科杂志，1999，13 (5)
13、：263269 10 Jesehke MG，Barrow RE，Hawkings HK，et a1IGF一1 gene transfer in thermally injured ratsJGene Ther，1999，6(6)：10151020 1 1 RobeF。Melissa CWound healing：an overview of acutefibrotie and delayed healingJFront Biosci，2004，1(9)：283-289 12 Cheng B，Liu HW，Fu XB，et a1Recombinant human plateletde rived
14、 growth factor enhanced dermal wound healing by a pathway in volving ERK and cfbs in diabetic ratsJJ Dermatol Sci，2007，45 (3)：193-201 1 3 Ishihara M，Fujita M，Obara K，et a1Controlled relaeases of FGF-2 and paclitaxel from chitosan hydrogels and their subsequent effects on wound repair，angiogenesis，an
15、d tumor growthJCurt Drug Deliv， 2006，3(4)：351358 14 Tabrizi MN，Chams-Davatchi C，Esmaeeli N，et a1Accelerating effects of epidermal growth factor on skin lesions of pemphigus vul- garis：a doubleblind，randomized，controlled trialJEur Acad Dermatol Venereol，2007，21(1)：79-84 15 Wang)(J，Han G，Owens P，et a1
16、Role of TGF betamediated in flammation in cutaneous wound healingJInvestig Dermatol Symp Proc，2006，11(1)：112117 16 Brunner G，Blakytny RExtracellular regulation of TGF-beta activity in wound repair：growth factor latency as a sensor mechanism for in juryJThromb Haemost，2004，92(2)：253-261 】7赵自然，刘鹤松，路来金转化生长因子一B与瘢痕形成和创伤 愈合
