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1、小标本和细胞学标本的基因检测,上海市胸科医院 病理科,内容介绍,小标本和细胞学标本的获取标本的病理学评估检测方法的选择EGFR突变检测应用,小标本和细胞学标本的获取,内科多手段获取肺癌标本,病理诊断+基因检测,支气管镜活检,标本较小通常是福尔马林固定、石蜡包埋处理建议采用灵敏度高的检测方法,细针穿刺活检,标本较小通常是福尔马林固定、石蜡包埋处理建议采用灵敏度高的检测方法,细胞学标本,细胞学标本中通常肿瘤细胞数目较少，需要采用灵敏度高的检测方法利用染色后的细胞涂片直接刮片，提取DNA，用于基因检测制备细胞蜡块：处理流程：细胞学标本经离心处理后，常规福尔马林固定、处理及石蜡包埋制备细胞蜡块的好处：
2、 （1）便于长期保存；（2）方便用于EGFR基因突变的检测及其他分子生物学标记物的检测,胸水或支气管刷片,涂片、染色,病理诊断,液基细胞学,病理诊断,细胞蜡块，切片染色,病理诊断,病理组织学诊断：确保肿瘤组织是非小细胞性肺癌肿瘤量：确保有足够的肿瘤组织用于突变检测尽量保证200-400个肿瘤细胞可以尝试进行20%，否则，需要标识肿瘤丰富的区域，提高肿瘤细胞比例尽量去除非肿瘤组织及细胞，提高检测的敏感性不同敏感性的检测方法对肿瘤比例要求不一样,标本的病理评估,小标本和细胞学标本的EGFR突变检测,肿瘤组织的异质性,遗传异质性,检测方法的比较,ME-PCR/ Sequencing,O,= Tran
3、sfer product /add reagent/ open tube,PCR: Real-timeDetection,PCR,Clean-up,Sequencing Rxn,Capillary Sequencing,PCR,PCR,Clean-up,Sequencing Rxn,CapillarySequencing,PCR,Hetero-duplex,CapillaryElectro-phoresis,ARMS & PNA-LNA clamp,PCR/ Sequencing,Nested PCR/ Sequencing,PCR/HRMA/dHPLC,PCR/RFLP,PCR,RFLP,E
4、lectro-phoresisSizing,PCR,PCR,Clean-up,Sequencing Rxn,CapillarySequencing,RFLP,O,O,O,O,O,O,O,O,O,O,O,O,TaqMan,Clean-up,O,Clean-up,O,Clean-up,O,O,O,O,PCR,SURVEYORcleavage,dHPLCSizing,O,Confirmation by sequencing,PCR/SURVEYOR,PCR,Clean-up,Pyro-sequencing Rxn,Pyro Sequencing,O,O,1,2,3,4,5,6,Steps,7,Confirmation by sequencing,O,Confirmation by sequencing,O,O,O,1%,10%,3-10%,10%,3-12%,2030%,2030%,PCR: Real-timeDetection,10%,200个肿瘤细胞相对集中免疫组化及RT-PCR法检测ALK正在验证中,
