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1、血型鉴定与交叉合血,王炼红 解读,血型的定义及分类,血型是指各种血液成分的遗传多态性标记。血型抗原不仅存在于红细胞上,也存在于白细胞和血小板上，还存在于各种组织细胞、多数体液中，甚至不同个体的血清蛋白间也存在型别的差异。 血型系统主要分类： 1.红细胞血型系统，其中又分为ABO血型系统、Rh血型系统、MNS血型系统、P血型系统、Kell血型系统、Kidd血型系统、Duffy血型系统 2.人类主要组织相容性抗原系统（HLA) 3.血小板血型系统（PHA） 4.血清型。血清型按蛋白质可分为免疫球蛋白、血清酶、血清蛋白、补体等几大类。,血型鉴定,血型鉴定主要用已知特异性的抗体鉴定未知的红细胞抗原，或
2、辅助用已知抗原的一组红细胞（谱红细胞）鉴定未知血清的抗体，结合相关理论基础综合判断血型。血型鉴定以抗原、抗体免疫检测技术为基础，常用的方法有盐水介质法、微柱凝胶卡片法、聚凝胺法，疑难血型还可用聚合酶链反应（PCR）技术直接分析相关血型的基因。,1.1 ABO血型鉴定 实验原理： 根据红细胞上有或无A抗原或B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗-A和抗-B分型血清来测定红细胞上有无相应A抗原或/和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。,试剂和材料： 1) 抗-A(B
3、型血)、抗-B(A型血)及抗-A+B(O型血）分型血清，购置商品试剂。 2) 5A、B及O型试剂红细胞盐水悬液。 3) 受检者血清。 4) 受检者5红细胞盐水悬液。,ABO血型鉴定的检测方法,1.试管法 （1）取洁净小试管（内径10mm60mm)3支，分别标明抗-A、抗-B 、抗-A+B,用滴管分别加抗-A、抗-B 、抗-A+B分型血清各1滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5红细胞盐水悬液1滴，混和。 （ 2）另取洁净小试管（内径10mm60mm)3支，分别标明A、B、O细胞,用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再以滴管分别加入5 A、B、O试剂红细胞盐水悬液1滴，混和。 （3)立即以1
4、000rmin离心lmin. （4）将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有无凝集(或溶血)现象。如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。 （5)观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。,4 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。 3 红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。 2 红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。 1 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞 土 镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞 MF 混合凝集外观(mixedfield)是指镜下可见少 数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。 一 表示
5、阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。,5)凝集强度判断标准,2.玻片法 （1)取清洁玻片1张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B、抗A+B,分别用滴管滴加抗-A、抗-B、抗-A+B分型血清1滴于标明的方格内，再各加受检者2红细胞悬液1滴，混和。 （ 2)另取洁净玻片一张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明A细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。 （ 3)将玻片(或白瓷板)不断轻轻转动，使血清与红细胞充分混匀，连续约15min，以肉眼观察有无凝集(或溶血)反应。玻片作试验时，也应用低倍镜观察结果。,4）结果判定 ABO血
6、型正反定型结果 注释：十为凝集；一为不凝集。 分型血清+受检者RBC 受检者血型 受检者血清+试剂RBC 抗-A 抗-B 抗-A十B A细胞 B细胞 O细胞 十 十 A 十 十 十 B 十 一 O 十 十 十 十 十 AB ,5）注意事项 （1）分型血清质量性能要符合要求，用毕后应放置冰箱保存，以免细菌污染。 （2） 试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细胞混和，用生理盐水洗涤3次，以去除存在于红细胞表面的血清中成分及可溶性抗原。 （3）试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。 （4） 操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。,（5) 按理IgM抗-A和抗-
7、B与相应红细胞的反应温度以4为最强，但为了防止冷凝集现象的干扰，一般仍在室温(20-24)内进行试验，37可使反应减弱。 （6) 离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。 （7) 观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。 （8) 判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。,正反定型结果不一致的原因 主要有以下三个方面： 一、技术性方面问题 二、红细胞方面的问题 三、血清方面的问题,常见情况如下： 1)分型血清效价太低、亲和力不强。若抗-A血清效价不高，可将A亚型误定为O型，AB型误定为B型。 2)红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不
8、明显，误判为阴性反应。 3)受检者红细胞上抗原位点过少(如亚型、新生儿)或抗原性减弱(见于白血病或恶性肿瘤）以及类B或cisAB等。 4)受检者血清中蛋白紊乱(高球蛋白血症、高浓度的纤维蛋白原)，或实验时温度过高，常引起红细胞呈缗钱状排列。,5)受检者血清中缺乏应有的抗-A或抗-B抗体，如丙种球蛋白缺乏症。6)各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集。部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体.7)由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集，往往是正反定型不符的原因。 8)血清中有意外抗体，如自身抗-I，常引起干扰。 9)老年人血清中抗体水平大幅度下降。,正反定型结果不一致的解决办法 如发现ABO正
9、反定型结果不一致，先要重复做试验1次。严格执行操作规程，使用质量合格的试剂以及细心观察和解释试验结果，就可解决明显的问题，对一些疑难问题必须进一步按以下步骤进行研究。,检查步骤 ： 1)另从受检者采取l份新鲜血液标本，这样可以纠正因污染或搞错样本造成的不符合。 2)将红细胞洗涤数次，配成5盐水细胞悬液，用抗-A、抗-B、抗-AB、抗-A1及抗H做试验可以得到其它有用的信息。 3)对受检红细胞作直接抗球蛋白试验,如结果呈阳性,表示红细胞已被抗体致敏。 4)用A1、A2、B、O红细胞及自身红细胞检查受检血清。如果怀疑是抗-I，用O型(或ABO相合的)脐血红细胞检查。,5)如果试验结果未见凝集，应将
10、试验至少在室温和4放置30min，用显微镜检查核实。 6)若疑为A抗原或B抗原减弱，将受检红细胞与抗-A或抗-B血清作吸收及放散试验以及受检者唾液作A、B、H血型物质测定。后者只对80%HAB分泌型的人有用。 7)若试验结果红细胞呈缗钱状排列，加等渗盐水l滴，混和，往往可使缗钱现象消失。应注意，不要先加盐水l滴于受检者血清中而后和红细胞作试验，以免使血清中抗体被稀释。,8）若受检者为A型血而疑为有类B抗原时，可用下列方法进行鉴别： （1）观察细胞与抗-A及抗-B的凝集强度，与抗-A的反应要比与抗-B的反应强。这种区别用玻片法作试验更为明显。 （2）用受检者红细胞与自身血清作试验，血清中的抗-B
11、不凝集自身红细胞上的类B抗原。 （3）检查唾液中是否有A、B物质，如果是分泌型，可检出A物质而无B物质。 （4）核对患者的诊断，类B抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴性杆菌感染有关。,9)如发现多凝集现象，应考虑由遗传产生的Cad抗原活性；被细菌酶激活的T或TK受体；或产生机制不太明了的Tn受体所引起。多凝集红细胞具有以下特点： 能被人和许多家兔的血清凝集，不管有无相应的同种抗体。 不被脐带血清凝集。 通常不与自身的血清凝集。,原理： 用5种抗Rh分型血清抗-C、抗-c、抗-D、抗-E、抗-e 来检测红细胞抗原.在Rh血型系统中D抗原的抗原性最强，出现的频率最高,临床上影响最大，故临床上一般只
12、鉴定D抗原。常用抗-D 血清来测定红细胞,凡带有D抗原者，称为Rh阳性，不带有D抗原者，称为Rh阴性。试剂：抗D血清(购买商品试剂)。操作： 试管法：取RhD(IgM)试剂50uL和5%受检者红细胞盐水悬液50uL，加入小试管内，摇匀，900g离心15秒，判定结果。同时做阴阳性对照。凝集(或溶血)反应为Rh阳性,无凝集(或溶血)反应，仅表明实验的红细胞缺少正常强度的D抗原，再用不同批号抗D血清做重复试验，如无凝集(或溶血)反应，不能轻率地报告Rh阴性，应做Du鉴定。,1.2 Rh血型鉴定,注意事项： （1）Du 型人经输注D阳性红细胞后可产生抗D抗体，所以患者为Du 型应作Rh阴性论，应输注R
13、h阴性血液;供血者为Du 型，应作Rh阳性论，不应当输给Rh阴性患者。 （2）Du 型妇女与Rh阳性丈夫生育的婴儿可以产生新生儿溶血病。 （3）本实验不适合于自身凝集的样本的检查，因自身凝集的样本容易引起假阳性。 （4）对于检测为弱阳性和阴性的样本，应采用抗人球蛋白实验检测弱D抗原或不完全D抗原是否存在，同时做进一步的确认实验。,交叉配血试验 交叉配血试验又称不配合性试验，是确保患者安全输血必不可少的试验，完整操作规程应包括： 1.查阅受血者以前的血型检查记录（包括Rh血型)； 2.对收到的受血者样本做ABO正反定型和Rh定型； 3.选择合格的血液作交叉配血试验。,交叉配血的方法： （1）盐水介质配血法 （2）酶介质配血法 （3）抗人球蛋白配血法 （4）凝聚胺介质配血法 （5）微柱凝胶卡配血法,
