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1、美国瓦里安公司,制备色谱系统概述,瓦里安液相色谱系统,具有30年生产从分析、少量制备到生产规模制备液相经验的专业公司，在全球范围内已安装400多套大型制备色谱系统,半制备液相色谱,中试规模制备色谱,工业规模制备色谱,分析液相色谱,制备色谱技术,制备色谱的目的是收集更多的 被纯化的产品，而不是用于分 析化合物的组分含量，产量从 几毫克到几公斤 制备色谱技术是得到高纯物的 最好的分离方法之一,分析液相 制备液相,强调: 回收样品 过程控制文件证据的提供负荷最大化 -体积过载 -浓度过载自动收集,强调: 定性和定量分析 数据处理 谱图处理 分辨率的最大化少量多次进样 (自动进样器),制备液相与分析液
2、相的区别,制备色谱规模划分,生产规模制备色谱柱直径100-600mm,中试规模制备色谱柱直径41-150mm,小量制备，色谱柱直径10-50mm,mg-g级,g-100g级,100g-kg级,制备样品的用途,微克毫克级 波谱测试，毫克级进一步的结构鉴定（NMR，MS） 化学反应 某些生物活性测试克级数量 进一步的生物活性测试，作为合成、半合成工作的原料以及标准品,制备液相色谱技术应用领域,有机合成实验室 ( Prep LC/HPLC)恒容系统/硅胶 (正相色谱)肽类纯化梯度系统（HPG or LPG） TFA/ACN/C18制药工业梯度系统（HPG or LPG） C18/IEX天然产物纯化梯
3、度系统（HPG or LPG） BUFFER/ACN/C18,制备色谱中的重要问题,产品的纯度 处理量 (每单位时间所纯化的样品量) 回收率 生产时间 方法开发与放大,纯化成本,制备色谱分离参数之间的关系,速度,上样量,分离度,上样量色谱柱规格填料性质样品性质,制备色谱方法开发,分析HPLC 传统制备色谱,颗粒 10 40 - 150 长度 25 cm 65 cm柱直径 4.6 mm 25 mm流速 1 ml / min20 ml / min操作时间 20 min 210 min消耗溶剂 20 ml 4200 ml,需要方法开发,传统的开发方法,高通量放大样品相对简单，对产量要求高,x,41.
4、4 mmoverloaded,4.6 mmoverloaded,4.6 mm,x,x,线性放大模式,范例：poly-L-lysine 分析和制备分离结果1. 分析液相分离 (4 x250 mm 色谱柱)2. 制备液相分离 (50 x250 mm 色谱柱),4.6,41.4 mm,mm,线性放大样品复杂，对产量要求不高,线性放大因子（linear scale-up factor）即为分析色谱柱和制备色谱柱截面积之比,线性放大因子： (41.4 mm/2)2 / (4.6 mm/2)2 = 81r2prep / r2analytical = r2prep / r2analytical,可变参数 不
5、可变参数流速 填料种类样品进样体积 样品浓度样品管尺寸 梯度方式样品收集体积 温度检测器流动池尺寸 柱长度管路内径 柱背压 死体积 操作时间溶剂消耗 回收率样品处理量 收集样品的纯度,线形放大过程中的可变与不可变参数,为什么要进行线性放大？,只需开发一次方法（分析柱上的分离方法）该方法可直接线性放大到任何尺寸直径的制备柱上 大大减少方法开发过程的时间和成本减少样品的损失（有时制备时的样品是非常珍贵的） 获得最多的被纯化样品,线性放大是制备色谱最快速高效的方法开发过程,合理簡單的放大方法,线性放大的3个步骤,从分析到制备放大应用实例,仪器设备VARIAN SD-1溶剂传输系统（二元梯度）200
6、ML/MIN 泵头ProStar 320 UV/VIS 检测器一、经验型放大二、完全线性放大,从分析到制备放大应用实例经验型放大,分析柱 5um 4.6mm*100mm流速：1.0 ml/min,制备柱 12um 50mm*200mm流速：80ml/min,结论：根据经验进行制备放大, 制备结果无法预测, 耗费时间、溶剂，增加成本，使制备过程复杂化,从分析到制备放大应用实例 线性放大,制备柱 Varian Dynamax Microsorb 100-5 C18 5um 250*21.4mm(柱长*内径) R0080220C5 甲醇/水=70/30,分析柱 产品名 Varian Dynamax填
7、料 Microsorb 100-5 C18 5um 柱尺寸 250*4.6mm(柱长*内径) Part No. R0080200C5 流动相: 甲醇/水=70/30,线性放大结果.,分析柱: 5 um 250*4.6mm流速: 1 ml/min,制备柱: 5 um 250*21.4mm流速: 21.6 ml/min,线性放大系数: 21.6,结论：制备分离结果与分析完全一致，极大简化了制备放大的过程，制备结果更准确,线性放大结果.,4.6 mm x 25 cm0.65 ml/min20 l injected,147 mm x 25 cm675 ml/min20 ml injected,结论：即
8、使放大1000倍，制备分离效果与分析柱分离效果完全一致，既保证了高效分离制备同时又简化制备过程方法开发，极大地降低成本。,线性放大系数: 1000,Varian 制备色谱放大方式,线性放大 高通量放大,主要特征: 主要特征: 大规模的 “分析型”分离, “ 样品过载型” 分离, * 较小的价格敏感性 设备和产品成本 * 较大的价格敏感性 产品成本 * 对分辨率要求高, * 较少强调分离效率，更强调选择性* 以数据分析和处理为出发点 * 主要以过程控制和文件证据的提供* 快速、直接的放大，基本不需要在制备 为 出发点 水平进行方法开发, * 需要方法开发和放大实验 * 简单的数学放大，有预见性
9、* 重点在于填料的大小和色谱柱的 过载量应用范围: 应用范围:R&D 中试规模制备小量制备 生产规模制备,制备液相色谱系统,输液泵系统检测器系统进样系统组分收集系统,同时满足分析与制备的系统（普及型）,PrepStar 210/218 泵可更换泵头 泵头规格：5, 10, 25, 50, 100, 200 ml/min 精确流量控制与优异的再现性泵头材质：SST、Ti 、PEEK 满足不同的需要泵耐压范围（Prostar 218) 最高达8700 psi 200 mL/min 泵头 3500 psi 100 mL/min 泵头 4000 psi,ProStar 210/218制备系统配置,分析
10、 制备,Prostar 210/218泵系统（泵头5-200ml/min可选）Prostar 325 紫外可见检测器多功能阀箱（分析/制备切换阀）7725i和3725手动进样器701组分收集器Star 工作站预装柱或小型装柱机,Prepstar SD-1 泵（全功能型）,PrepStar SD-1 泵 泵头可更换泵头规格：50, 200, 500, 800, 3200 ml/min 泵头冲洗功能 Max flow Min flow psi 50 1 L 10,000 100 10L 6,000 200 10L 6,000/4,000 500 20L 2,500/1,675 800 20L 1,500/1,020 3200 100L 375,PrepStar SD-1 制备系统配置,PrepStar SD-1 溶剂传输系统 ProStar 325检测器,泵头：500/800ml/min 最大耐压：100bar530 系统LC&Responder 工作站 ProStar218进样泵,泵头：200 ml/min多功能阀箱 分析型手动进样器 Prep手动进样器 分析/制备切换阀 701组分收集仪 Star 工作站,
