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1、1TH1/TH2 在慢性丙型肝炎发病机制中的作用作者：段国荣周永兴聂青和贾战生冯志华谢玉梅 【关键词】 肝炎 关键词: 肝炎，乙型;肝炎，丙型; 细胞活素类 ;Th1/Th2 摘 要:目的 研究 Th1/Th2 变化在慢性丙型肝炎发病机制中的作用. 方法 采用双抗体酶联分析法检测了 20 例正常人，35 例慢性丙型肝炎，30 例慢性乙型肝炎患者血清中的 IFN-，IL-2 ，IL-4和 IL-6 的水平. 结果 慢性丙型肝炎组 Th2 类细胞因子（IL-4 ，IL-6）水平明显高于正常对照组（P0.05 ） ，Th1 类细胞因子水平IL-2 也增高（P0.05）.Th2 类细胞因子水平比 Th
2、1类细胞因子水平高. 结论 Th2 类细胞因子水平增高以及由此引起的Th1/Th2 比值下降可能与慢性丙型肝炎的病程持续有关 . Keywords:hepatitis B;hepatitis C;cytokines;Th1/Th2 Abstract:AIM To study the roles of Th1and Th2cy-tokines in chronics HCV infection.METHODS Serum levels of Th1cytoines，interferon gamma（IFN-gammn）and inter-leukin（IL）-2，and Th2cytokines
3、，IL-4and IL-6，were mea-2sured by using enzyme-linked immunosorbent assay.Thirty-five individuals with chronic HCV infection，20healthy sub-jects as normal controls and30chronic HBV infected patients as disease controls were observed.RESULTS Th2cytokines（IL-4and IL-6）significantly increased in chronic
4、 HCV infect-ed patients compared with normal controls（P0.05）.Simi-larly，the levels of Th1cytokine（IL-2）also rose in individu-als with chronic HCV infection as compared with normal con-trols（P0.05）.CONCLUSION Levels of Th2cytokines are higher than Th1cytokine in HCV infection.This suggests that there
5、 might exist a low ratio of Th1/Th2in chronic HCV infected patients and an enhanced Th2responses during HCV infec-tion，which may partly be responsible for the persistence of HCV infection. 0 引言 研究表明，感染性疾病、自身免疫性疾病、过敏性疾病及移植排斥反应等与 Th1/Th2 失衡有关1 .近年来有关细胞因子在3肝炎病毒免疫中的作用研究较多，但仍存在一些问题.Woitas 等2 研究了 10 例健康者和
6、 10 例 HCV 患者，用 C 区抗原和 C 区的 5 个多肽刺激外周血单个核细胞（ PBMC） ，前者主要产生 Th1类细胞因子，后者主要产生 Th2 类细胞因子，表明 HCV 感染慢性化的原因与缺乏 Th1 类细胞因子有关. 然而，Ferrari 等3 的研究结果则发现，慢性丙肝患者外周血很容易得到 HCV 特异性 CD4 ，CD8 反应，并且 Th1 类细胞因子占优势 .由此可见，HCV 感染中细胞因子的作用还有待证实.我们通过检测血清中的 IFN-，IL-2，IL-4 和 IL-6 的表达水平，观察 Th1/Th2 变化，探讨其在慢性丙型肝炎发病中的作用，为今后寻找调节和平衡 Th1
7、/Th2 的措施，指导临床治疗提供实验的证据.现将结果报告如下. 1 对象和方法 1.1 对象 健康献血员 20（男 15，女 5）例，为正常对照（对照血清标本来自本校唐都医院献血科，肝功正常，肝炎病毒标志物阴性） ，平均年龄 30（2535）岁. 慢性乙型肝炎（中度）30（男 15，女 15）例作为疾病对照，平均年龄 32.5（24 41）岁.慢性丙型肝炎（中度）35（男 20，女 15）例，平均年龄31（2339）岁.65 例肝炎血清标本来自本校唐都医院感染病科门诊及住院患者，诊断符合 1995 年（北京）第五次全国传染病与寄生虫病学术会议修定的诊断标准. 41.2 方法 试剂:IFN-
8、检测试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司，批号 991225;IL-2，IL-4 和 IL-6 检测试剂盒购自上海森雄实业有限公司，批号 0009089.方法:IFN- ，IL-2，IL-4 和 IL-6 检测采用双抗体夹心酶联分析法.从已平衡至室温的密封袋中取出所需板条，分别将标本及不同浓度标准品（100L/孔）加入相应孔中，然后再加入生物素化抗体工作液（50L/孔）和酶结合物（20 25）共同孵育 120min.洗板 3 次.先后加入底物 A，B 各 100L/孔，避光置室温 1030min.加入终止液 50L/孔，混匀后即刻在 ELISA 读数仪上测量 A450 值，绘制标准曲线，并测定各
9、血清标本中 IFN-，IL-2，IL-4 和 IL-6 的浓度（ngL-1 ）.以 IFN-浓度代表 Th1，IL-4 浓度代表 Th2，从而计算 Th1 与 Th2 的比值.统计学处理: 采用基于秩次的非参数检验等. 2 结果 2.1 正常对照组、乙肝组、丙肝组患者血清四种细胞因子的水平 见 Tab1. 表 1 正常对照组、乙肝组、丙肝组患者血清四种细胞因子的水平略 52.2 对照组、乙肝组、丙肝组的 Th1/Th2 比值 见 Fig1. 图 1 略 3 讨论 HCV 是一种 RNA 病毒，是导致输血后肝炎和非甲非乙型肝炎的主要病原，呈世界性流行.大约 50%90%的患者病程转为慢性，其中，
10、分别有 8%46% 和 11%19%发展为肝硬化和肝细胞肝癌4 .相比之下，约 10%HBV 感染者病程转为慢性.可见，慢性化率高是 HCV 感染的主要临床特征之一 .有关丙型肝炎慢性化机制目前尚不明了.一般认为，HCV 在体内的持续感染是由病毒和机体免疫状态两方面的因素决定的.就病毒因素而言，典型的 HCV 感染为低滴度病毒血症，对机体的刺激性小，不足以引起机体的免疫应答5 ;由 HCV 高度变异性所产生的大量准种可逃避宿主的免疫攻击6 ;HCV 不同基因型引起的免疫应答的强度不尽相同7 .HCV1b 型虽有较强的复制能力，但其抗原表达能力差，所诱导产生的免疫反应较为低下，因而有利于 HCV
11、 的持续感染.至于宿主的免疫应答，尽管 HCV 诱导产生了中和抗体，但是由于 HCV的高度变异性，此抗体对 HCV 的清除作用不大6，8 .细胞免疫应答，尤其是 Th1，Th2 细胞免疫应答则影响着感染的结局 . 辅助性 T 淋巴细胞根据其分泌细胞因子的不同，可将其分为6Th1 和 Th2 两个亚群 9 .Th1 亚群分泌 IFN-，IL-2，LT- 等，主要参与细胞介导的免疫反应，有利于病毒清除.Th2 亚群分泌 IL-4，IL-5，IL-6 等，主要促进体液免疫反应. Kobayashi 等10 通过对慢性丙型肝炎（CHC）患者和健康对照组血循环中的 CD4+ T 淋巴细胞（产生 IFN-
12、或 IL4）计数发现: 在体外将 CD4+ T 淋巴细胞用抗 CD3 抗体刺激后，CHC 患者的 Th1 细胞数量明显低于对照组，而 Th2 细胞数量则明显高于对照组. 提示 CHC 患者的 Th2 细胞占优势.Fan 等11 通过检测 CHC患者血清 Th1 类、Th2 类细胞因子水平，也提示 CHC 患者 Th2 细胞占优势.Eckels 等 12 应用合成的非结构蛋白 NS3 研究 CHC患者的 Th 反应，结果 Th2 类细胞占优势，Th1 类细胞低下.Tsai 等13 分析了重组 HCV 抗原刺激对急性丙型肝炎患者外周血 CD4 +T 淋巴细胞增殖及分泌细胞因子的影响. 提示 Th2
13、 细胞介导的免疫反应在 HCV 感染慢性化中起着重要作用 . 我们研究显示（Tab1 ） ，慢性丙型肝炎组 Th1 类细胞因子水平IFN-无明显变化，IL-2 水平比正常高，而 Th2 类细胞因子水平 IL-4，IL-6 明显高于正常对照组.由此，Th2 类细胞因子水平较 Th1 类细胞因子水平高.Fig1 显示，Th1/Th2 比值明显低于正常对照组.与文献报道基本一致.慢性丙型肝炎存在 Th1/Th2 失衡，Th2 细胞应答可能与丙型肝炎慢性化有关. 7上述研究结果表明，Th1 类和 Th2 类细胞因子失衡与 CHC发病机制有关.因此，外源性调节 Th1，Th2 的比例可能有利于 CHC感
14、染者病情的恢复.问题是，根据 Inchanspe 等14 的研究结果，既然所有 HCV DNA 免疫原诱发强的 Th1 反应，那麽，在 CHC 病程中，为何会出现 Th2 类细胞因子水平的增高 ?结合 Shapiro 等15 的研究，是否与 HCV 感染 PBMC 时，对 Th1，Th2 细胞产生破坏作用，前者受破坏多，影响了细胞的免疫功能，使得 HCV不能被清除，导致感染持续. 总之，深入探讨 Th1/Th2 在慢性丙型肝炎发病中的作用，为今后 HCV 感染免疫治疗提供一条新思路 . 参考文献: 1Prete G，Maggi E，Romagnani S.Human Th1and Th2cel
15、ls:Functional properties，mechanisms of regulation and role in dis-ease J.Lab Invest，1994;70（3）:299-306. 2Woitas RP，Rockstroh JK，Beier I，Jung G，Kochan B，Matz B，Brackmann HH，Sauerbruch T，Spengler U.Antigen-specif-ic cytokine response to hepatitis C virus core in HIV/hepatitis C virus-coinfected patients J .AIDS，1999;13（11）:1313-1322. 3Ferrari C，Penna A，Bertoletti A，Cavalli A，Missale 8G，Lam-onaca V，Boni C，Valli A，Bertoni R，Urban S，Scognamiglio P，Fiaccadori F.Antiviral cell-mediated immune responses
