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1、山西医药杂志2010年4月第39卷第4期上半月 Shanxi Med J，April 2010Vo139，No4 the First 间隙连接蛋白45在成人心肌的表达 山西医科大学(030001) 夏仲年 杨桂姣 宋慧芳 高雨仁赵云鹤 目前对成人心肌连接蛋白(Cx)4O、Cx43表达的研究已 有报道，但对Cx45在成人心肌的分布情况研究较少。因 此，本实验拟观察成人心肌Cx45的表达，明确其表达分布 情况，为深入了解Cx45的功能提供形态学基础。 1材料和方法 11实验材料：1O例成人心脏(捐献)，其中男性8例，女 性2例，年龄254O岁。解剖证明均无先天性心脏病。分 别取左、右心房及左、右心
2、室心肌组织。 12标本制备：所有组织经4 多聚甲醛固定2O24 h， 常规石蜡包埋，连续系列切片，每隔1O片连续取4片，片厚 6 m，多聚赖氨酸载片贴片。 13免疫组织化学染色：所有标本按常规方法脱蜡至水， 3 过氧化氢孵育10 min，阻断内源性过氧化物酶，磷酸盐 缓冲液(PBS)冲洗1次，枸橼酸钠高压修复抗原3 rain，反 复2次，自然冷却20 min，PBS冲洗1次后，按链霉素一亲和 素一生物素复合物(SABc)试剂盒(武汉博士德生物技术公 司)指定方法进行。抗体为1：100稀释度的Cx45多克隆 抗体(武汉博士德生物技术公司)，二氨基联苯胺(DAB)一 H 0 显色。以1：200稀释
3、度的健康家兔血清代替一抗， 作为阴性对照。Harris苏木素复染。 14结果判断：心肌细胞表面、闺盘处有深棕黄色颗粒为 Cx45表达阳性，细胞核为淡蓝色。 15 图像分析：每组取1O张Cx45阳性颗粒表达均匀的切 片，每张切片随机选5个视野。采用Imagepro plus 50 高清晰度彩色图像分析系统对心肌细胞着色的深棕黄色颗 粒的各参数进行图像分析，以参数平均灰度值代表蛋白颗 粒密度，以面积百分比代表分布密度 l_6统计学处理：全部数据采用SPSS 115统计软件分 析，用均 S描述，各组间的比较采用t检验方法，以P心室；左、右心房间差异无统计学意义；左、右 心室问差异无统计学意义。见表1
4、。 表1成人心脏Cx45表达的图像分析( 土5) 1)与心房比较PO05。 3讨 论 心脏发育过程中，连接蛋白表达受基因调控，其类型和 含量均有变化，心肌连接蛋白在不同动物及不同年龄存在分 布和含量的差异。Vozzi等】 认为，人类心脏以Cx40、Cx43 和Cx45为主。本实验显示，Cx45在成人心肌有2种分布形 式：即位于心肌细胞表面和细胞两端的闰盘处。Cx45在4 个心腔的心壁肌均有表达，且心房的分布多于心室。心房肌 细胞Cx45呈斑点状或带状非均质分布于细胞侧面连接，心 室肌细胞Cx45则典型地分布于闰盘处。这种分布上的差异 可能提示成人心肌细胞的电位传导具有双向性。即在心房 肌以横向
5、传导为主，在心室肌以纵向传导为主。而心房肌的 表达多于心室肌，可能是由于在心脏收缩的过程中，首先是 心房的收缩，其次才是心室的收缩，这种分布形式有利于心 脏的规律搏动。就心脏各腔Cx45的分布比较，心室各壁之 间、心房各壁之间均未见差异，说明心室各部和心房各部本 身在物质和信息传递方面可能差别不大。本实验通过研究 Cx45在健康成人心肌的表达，明确了其在心肌各部的分布 形式及数量差异，可为深入了解Cx45的生理功能及阐明疾 病的发生机制给予形态学的支持。 参考文献 1 Vozzi C，Dupont E，Coppen SR，et a1Chamber-related differ enees in connexin expression in the human heartJ Mol Cell Cardiol，1999，31(5)：991-l003 (收稿日期：2009-i0-I9) 作者简介：夏仲年，男，1981年1月生，助教，山西医科大 学，030001
