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1、本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断大鼠（ 大鼠（ 大鼠（ 大鼠（ Rat） ） ） ） 细胞色素 细胞色素 细胞色素 细胞色素 C（ （ （ （ Cyt-C） ） ） ） ELISA检测试剂盒 检测试剂盒 检测试剂盒 检测试剂盒使用说明书检测原理 检测原理 检测原理 检测原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验 （ ELISA） 。 往预先包被 细胞色素 C（ yt-C） 抗体的包被微孔中 ， 依次加入标本 、 标准品、 HRP标记的检测抗体，经过温育并
2、彻底洗涤。用底物 TMB显色 ，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色 ， 并在酸的作用下转化成最终的黄色 。 颜色的深浅和样品中的 细胞色素 C（ yt-C） 呈正相关 。 用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（ OD值 ） ，计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法 样品收集、处理及保存方法 样品收集、处理及保存方法 样品收集、处理及保存方法 1.血清 ： 使用不含热原和内毒素的试管 ， 操作过程中避免任何细胞刺激 ， 收集血液后 ， 3000转离心 10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2.血浆 ： EDTA、 柠檬酸盐或肝素抗凝 。 3000转离心 30分钟取上清 。3.细胞上清液：
3、3000转离心 10分钟去除颗粒和聚合物。4.组织匀浆 ： 将组织加入适量生理盐水捣碎 。 3000转离心 10分钟取上清。5.保存 ： 如果样本收集后不及时检测 ， 请按一次用量分装 ， 冻存于-20 ，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻 。自备物品 自备物品 自备物品 自备物品1.酶标仪（ 450nm）2.高精度加样器及枪头 ： 0.5-10uL、 2-20uL、 20-200uL、 200-1000uL3.37 恒温箱操作注意事项 操作注意事项 操作注意事项 操作注意事项 1.试 剂 盒 保 存 在 2-8 ， 使 用 前 室 温 平 衡 20分 钟 。 从 冰 箱 取
4、出 的浓 缩 洗 涤 液 会 有 结 晶 ， 这 属 于 正 常 现 象 ， 水 浴 加 热 使 结 晶 完 全 溶 解后再使用。 2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中 ， 密封 （ 低温干燥 ） 保存 。3.浓 度为 0的 S0号 标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释 5倍，最终结果乘以 5才是样本实际浓度 。4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5.所有液体组分使用前充分摇匀。试剂盒组成 试剂盒组成 试剂盒组成 试剂盒组成 名称 名称 名称 名称 96孔配置 孔配置 孔配置 孔配置 48孔配置 孔配置 孔配置 孔配置 备注 备注 备注 备注微
5、孔酶 标板 12孔 8条 12孔 4条 无标 准品 0.3mL*6管 0.3mL*6管 无样 本稀 释液 6L 3L 无检 测抗 体 -HRP 10mL 5mL 无20洗 涤缓 冲液 25L 15L按 说明 书进 行稀 释底 物 A 6mL 3mL 无底 物 B 6L 3L 无终 止液 6mL 3mL 无封 板膜 2张 2张 无说 明书 1份 1份 无自 封袋 1个 1个 无注 ：标 准品 （ S0-S5） 浓度 依 次 为 ： 0、 12.5、 25、 50、 10、 20nmol/L试剂的准备 试剂的准备 试剂的准备 试剂的准备20洗涤缓冲液的稀释 ： 蒸馏水按 1： 20稀释 ， 即 1
6、份的 20洗涤缓冲液加 19份的蒸馏水。洗板方法 洗板方法 洗板方法 洗板方法1.手 工 洗 板 ： 甩 尽 孔 内 液 体 ， 每 孔 加 满 洗 涤 液 ， 静 置 1min后 甩 尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5次。2.自动洗板机：每孔注入洗液 350 L，浸泡 1min，洗板 5次。操作步骤 操作步骤 操作步骤 操作步骤 1.从室温平衡 20min后的铝箔袋中取出所需板条 ， 剩余板条用自封袋密封放回 4 。2.设置标准品孔和样本孔 ， 标准品孔各加不同浓度的标准 品 50 L；3.样 本孔先加 待 测样本 10 L， 再 加 样本稀释液 40 L； 空 白孔不加。4.除 空
7、白 孔 外 ， 标 准 品 孔 和 样 本 孔 中 每 孔 加 入 辣 根 过 氧 化 物 酶（ HRP） 标 记 的 检 测 抗 体 100 L， 用 封 板 膜 封 住 反 应 孔 ， 37 水 浴锅或恒温箱温育 60min。5.弃 去 液 体 ， 吸 水 纸 上 拍 干 ， 每 孔 加 满 洗 涤 液 ， 静 置 1min， 甩 去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 5次（也可用洗板机洗板 ） 。6.每孔加入底物 A、 B各 50 L， 37 避光孵育 15min。7.每孔加入终止液 50 L， 15min内 ， 在 450nm波长处测定各孔 的OD值。结果判断 结果判断 结果判断 结果
8、判断绘 制 标 准 曲 线 ： 在 Excel工 作 表 中 ， 以 标 准 品 浓 度 作 横 坐 标 ， 对 应OD值作纵坐标 ， 绘制出标准品线性回归曲线 ， 按曲线方程计算各样本浓度值。试剂盒性能 试剂盒性能 试剂盒性能 试剂盒性能 1.准 确 性 ： 标 准 品 线 性 回 归 与 预 期 浓 度 相 关 系 数 R值 ， 大 于 等 于0.9900。2.灵敏度：最低检测浓度小于 1.0nmol/L。3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4.重复性：板内、板间变异系数均小于 15%。5.贮藏： 2-8 ，避光防潮保存。6.有效期： 6个月免责声明 免责声明 免责声明 免责声明
9、1.试 剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或 人 体 实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。 2.严 格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。FO RO O O ESARCH H H H USEO NLY.O O ONO TO O O FO RO O O USEINDIAG O STICG OG OG O PRO CEDURESO O O .RatCytochrome-C(yt-C)ELISAK itK K K instructionIntedeuseThisCyt-ELISAkitisintedeLaboratoryforResarchuseonlyan
10、disnotforuseindiagnosticortherapeuticprocedures.TheStopSolutionchangesthecolrfrom bluetoyelowandtheintesityofthecolrism easuredat450nm usingaspectrophotm etr.Inordertom easuretheconcentrationfCyt-inthesam ple,thisCyt-ELISAKitincludesasetofcalibrationstandars.Thecalibrationstandarsareasyedathesam eti
11、m easthesam plesandalowtheoperatortoproduceastandarcurveofOpticalDensityversuCyt-concentration.TheconcentrationfCyt-inthesam plesisthendetrm inedbycom paringtheO.D.ofthesam plestothestandarcurve.SaplecolectionadstoragesSerum-Useaserum separtortubeandalowsam plestoclotfor30m inutesbeforecntrifugation
12、for10m inutesatproxim ately30g.Rem oveserum andasyim m ediatelyoraliquotandstoresam plesat-20or-80.Avoidrepatedfreze-thawcylesPlasma-Colectplasm usingEDTAorheparinasnaticoagulant.Centrifugesam plesfor30m inutesat30gat2-8within30m inutesofcolection.Storesam plesat-20or-80.Avoidrepatedfreze-thawcyles.
13、Celcultresupernatesandotherbiologicalfluids-Rem oveparticulatesbycentrifugationadasyim m ediatelyoraliquotandstoresam plesat-20or-80.Avoidrepatedfreze-thawcyles.Note:Thesam plesshoulebcentrifugatedequatelyandohem olysiorgranulewaslowed.Materialsrequiredbutnotsuplied1.Standarm icroplatereader(450nm )
14、2.PrecisonpietsandDisposablepiettips.3.37incubatorPrecautions1.Donotsubstiuteragentsfrom onekitoanother.Standar,conjugateandm icroplatesarem atchedforptim alperform ance.Useonlytheragentsupliedbym anufacture.2.Donotrem ovem icroplatefrom thestoragebaguntilnede.Unusedstripsshouldbestoredat2-8Cintheir
15、pouchwithtedsicantprovide.3.Mixalreagentsbeforeusing.Rem ovealkitreagentsfrom refrigeratorandalowthem toreachrom tem perature(20-5C)MaterialsupliedNam e 96detrm inations48detrm inationsMicroelisastriplate 12*8strips 12*4stripsStandar 0.3m l*6tubes 0.3m l*6tubesam pleDiluent 6.0m l 3.0m lHRP-Conjugat
16、eragent 10.m l 5.0m l20XWashsolution 25m l 15m lChrom genSolutionA6.0m l 3.0m lhrom genSolutionB6.0m l 3.0m lStopSolution 6.0m l 3.0m lClosureplatem m brane 2 2Userm anual 1 1Sealdbags 1 1Note:Standar(S0S5)concentrationwasfolwedby:0,12.5,2,50,10,20nm ol/LReagentpreartion20washsolution:DilutewithDistiledordeionizedwater1:20.Asayprocedure1.Preparealreagentsbeforestartingasyprocedure.Itisrecom m endethatalStandarsandSam plesbeadedinduplicatetothe
