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1、null2010M海 洋 湖 沼 通 报Transactions of Oceanology and Limnologynullnull 1PCR-DGGE/s1_O!)*1k,N=* ,null,null,q,null,+,null,k(a8ZS,a8ZS9_,a8Zs03Li,av,116023)K1:采用16S rDNA的 PCR- DGGE基因指纹技术,于 6 9月间,对辽宁普兰店湾 2个相邻的刺参养殖池塘进行了养殖水环境中菌群多样性的分析,首先用2216E固体培养基对仿刺参养殖水环境中的细菌总数进行统计,再采用 PCR- DGGE指纹技术分析菌群多样性b结果表明,池塘水环境中较高水平
2、的细菌数,且9月为6月的3倍;高温季节刺参养殖水环境中细菌种群较为丰富,其中大多数属于变形菌门;6 9月份样品具有一致的优势菌群,分别为P seudomonas sp. ,U ncul-tured delta bacterium, Ostreococcus sp.以及Uncultured alp ha p roteobacteriumb同时发现,同一时间采集的样品,有一定的菌群相似性,并在聚类分析图中分别成簇,检测样品的细菌多样性指数在1.7至2.5之间b1oM:仿刺参,细菌,16S rDNA, DGGE指纹ms|:Q93-3DSM:Anull null nullcI|:1003-6482(2
3、010)01-082-07_O(Apostichopus japonicus)( Echinodermata)aZ( Ho-lothuroidea)am(Aspidochirotida)aOS(Stichopodidae) ,!0Nb1990MSZu3_O!,a81_O!1b_O!_O3#h?3M1,M6 96Hh?,yNI1!%)as,33M_Oh?314BG,1S5b-,%)v.d3!ZEb1v%)dV!%),P3d)b2bT14|s03/,DGGE(M0)X.d3!ZEK,-3)1/m,13#SjZW3bVO!84|%)DNA,PCR9,cMuDNA,YVsDGGEmHQ!%)#,U1_
4、O!)+4b1nullZE1. 1null,g_z*:SE?ZZm(200705007),a8S/9(200803002)BTe:1k(1983-),o,1VYZ3, E-mail: guanxiaoyan201 163. com*YT: Corresponding author, E-mail: zunchunz hotmail. coml: 2009-07-021PCR-DGGE/s1_O!)83nullZ7,7?v_O!,T5-6b2008M6 9,BQu_O!,|ZHq_O!M2#,!g)b1Z25 28null ,pH7. 6 8. 5,26 30bQ)j1 L,aLib1.2nul
5、l%)9vnullZS?Snull( GB17378-2007)ZE,|s0d,2216E%8!s!%)9b1.3null%)9DNA4|8%)9DNA4|,vnullZ?Snull(GB/T 12763-2007)%)DNA4|ZEaiTb0.8nullmr8QZVr,frVr500mLZ;0. 22nullmr=QVr,rgg,5 mL5;5F2 mL DNA4|buffer( 15 mmol/L pH8. 0Tris-HCl, 8 mmol/LED-TA,0. 2%CTAB);Fi1%null-Y?,;Fi1 2 mg/mL), 37 null3 h;Fi1% 1.5%SDS,s, 65
6、null1 h;Fi0. 2 mg/mLK,s,50null1 h;F5 mol/LNaClAi0. 7 0. 8mol/ L,F8s10%CTAB/NaClA,65null20 min;8o_:s?4, 8000 r/min,bM5;8p:o_:s?4, 8000 r/min,bM5;8o_:s?4,8000 r/ min,bM5;F0.6 1Vsd?4i30 min,10000 r/min,15 min,b;70%Y?!, 10000 r/min,5min,2Q,8;50nullL TE,- 20nullib1.4null16S rDNA-V3uPCR94|%)9DNA,16SrDNAyV
7、3VMu+s:341f + GC ( 5null- CGCCCG CCG CGCCCC GCG CCC GGC CCG CCG CCC CCGCCC CCT ACG GGA GGC AGC AG-3null )518 r (5null- A TT ACC GCG GCT GCT GG-3null )/7 ,9200 bp,DGGEsbPCRQHq8 :TPCR,94 nullM5 min;-1094 null 1min,65 60null l min, 72 null 30 s/0. 5null ;1894 null 1 min, 60 null 1 min, 72null 30 s;K72
8、null%5 minb4 nulli!b1%j_,EB4b1. 5nullM0(DGGE)Bio-radDGGEsdkb8%d( 37. 5 null1) ,M4U0JL045% 60%b60nulla200 V/5h,Gen-findervsbBio-RadsqQuantity onems,DGGEmsmb1. 6nullHlaXH2La6 98Q,sY:S6aS7aS8aS9D6aD7aD8D9b|DGGEmbHS:la,FTE( pH= 8. 0 )a|bTPCR9b341f518rb|Z33/Bb1. 7nullms#9DGGEmBio-RadqQuantity OneqMs,HMVSP V3. 13qs,9Pj(Shanno-Wiener Index)b(H )1%)bPiBHH91q, sH9,
