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1、实验一 普通光学显微镜的结构及使用,一、目的要求,熟悉普通光学显微镜的构造和性能掌握显微镜的使用方法了解光学显微镜的维护方法,二、实验原理,显微镜可将微小物体放大物镜和目镜的作用相当于一个凸透镜 标本放在物镜下方12倍焦距之间，在 明视距离为25cm，见到放大的清晰物象,光学显微镜的成像原理,显微镜的重要光学技术参数,分辨率、放大率、镜口率、焦点深度和视场宽度等反映了显微镜的性能和质量,数值孔径（镜口率）numerical aperture,N.A,N.A是物镜前透镜与被检物体之间介质的折射率（n）和镜口角（）半数的正玄之乘积，即N.An sin /2镜口角是物镜光轴上的物体点与物镜前透镜的有
2、效直径所形成的角度。镜口角越大，进入物镜的光通亮就越大，它与物镜的有效直径成正比，与焦点的距离成反比,1/2,objective,sample,间质折射率（n）,空气为 1水为 1.33油为 1.5,物镜N.A值,空气为0.050.95水为0.11.20油为0.831.40,分辨率（R）,显微镜或人眼在25cm的明视距离处，能清楚地分辨被检物体细微结构最小间隔的能力人眼分辨率约为100um，光镜为0.2um计算公式,0.61,N.A,R =,=,0.61,N sin/2,=,0.610.5,1.501.0,=,0.2um,（光镜最大分辨率）,注：光波波长（白光为0.5）N介质折射率镜口角,放大
3、率（放大倍数）,放大倍数目镜放大倍数物镜放大倍数最小倍数5 420最大倍数15 1001500放大倍数的表示用，如10 ,100 ，,焦点深度（焦深）,在使用显微镜时，当焦点对准某一物体时，不仅位于该点平面上的各点都可以看清楚，而且在此平面的上下一定厚度内，也能看得清楚，这个清楚部分的厚度就是焦深。焦深大, 可以看到被检物体的全层，而焦深小，则只能看到被检物体的一薄层在数值孔径0.95时约为非常浅的0.2,视场宽度,在显微镜下看到的圆形视场内所能容纳被检物体的实际范围。视场宽度愈大，愈便于观察。视场的大小，是由目镜里的视场光阑决定的。视场宽度与物镜的放大倍数成反比 因此，低倍镜看整体，高倍镜看
4、局部,三、内容与方法,（一）显微镜的构造及功能1.机械部分镜筒（tube）物镜转换器（revolving nose-piece ）镜臂（arm）调焦器（focusing adjustment） coarse focus and fine focus载物台（stage）镜柱（post）镜座（base）,倒置显微镜,2.光学系统部分,目镜（ocular） 5，10 ，15 物镜（objective）4,10,40,100聚光器（condenser）光源及光阑,标准物镜的性质,放大倍数 数值孔径 工作距离*（mm） 10 0.20 6.5 20 0.50 2.0 40 0.65 0.6 100 1.
5、25 0.2,*工作距离：物镜最下端与盖玻片上表面之间的距离。,（二）显微镜的使用方法,1.低倍镜的使用调光 先检查光强度开关的位置，放到最小，再通电，亮度适中，物镜对准通光孔，光阑，光栅，聚光器等 放片 标本朝上，勿放反了调焦 先粗调，后细调；调过头了，反方向调回来；记住方向，慢调！,2.高倍镜的使用,先在低倍镜下找到标本，并将要观察的部位移至视野中央转换高倍镜头慢慢调节细调，同时观察，调到最清晰为止油镜使用是在高倍镜的基础上进行的，转开高倍镜，滴上香柏油后，转换油镜头使用油镜后要用清洁剂清洗镜头和标本,3.油镜的使用,油镜使用是在高倍镜的基础上进行的，转动目镜转换器，至高倍镜与油镜头之间滴上香柏油后，转换油镜头慢慢调节细调，调到所观察的标本为最清晰为止注意事项：增强光线；在高倍镜下把要观察的部分移到视野中央；镜头用油浸泡；用完用清洁剂清洗干净镜头和标本。,（三）标本观察,头发丝交叉文字蛙血涂片,四、作业,记录实验一结果，完成作业一记录高倍镜下视野中央的头发交叉点转换成低倍镜后所在的位置,绘图要求和方法,绘图前仔细观察，正确理解，做到真实准确的描绘用尖锐的铅笔绘图，以点和线表示，明暗之处用点的疏密表示，勿涂阴影版面整洁，图形大小适宜，各部分比例适当于图上右侧横写注字，水平引出注字引线，不交叉，图下方写图的标题，注明放大倍数,
