第十三章 生物碱类药物的分析,第一节 概述,,一、生物碱（Alkaloids） 生物碱是生物体内含氮有机化合物的总称,分类：（1）苯烃胺类（2）托烷类（3）喹啉类（4）异喹啉类（5）吲哚类（6）黄嘌呤类,典型药物的结构,,,,,,,,,,,,二、生物碱类药物的通性,1. 碱性 季铵碱＞脂肪胺、脂环胺＞芳胺、N-芳杂环＞酰胺 小檗碱＞麻黄碱、阿托品＞罂粟碱＞咖啡因 吗啡具酸碱两性,2. 溶解性 游离生物碱不溶或难溶于水，能溶或易溶于有机溶剂，在稀酸中成盐而溶解 生物碱盐类易溶于水，不溶于有机溶剂,3. 旋光性 一般多为左旋体有效4. 紫外吸收：多含不饱和双键5.与生物碱沉淀试剂和显色试剂反应,一、一般鉴别反应,（一）熔点测定法（二）沉淀反应,第二节 鉴别试验,常用的生物碱沉淀试剂为： 1. 重金属盐类，如K2HgI4、KBiI4、I2—KI、二氯化汞等； 2. 大分子酸类，如磷钼酸、硅钨酸等三）显色反应 常用的显色试剂：浓硫酸、浓硝酸、钼硫酸、钒硫酸、硒硫酸、甲醛硫酸等,（四）UV（五）IR,（六）色谱法 1. HPLC 2. TLC,二、特征鉴别反应（一）双缩脲反应 侧链具有氨基醇结构,（二）Vitali反应 托烷生物碱,（三）绿奎宁反应 硫酸奎宁、硫酸奎尼丁 微酸性水溶液，滴加Br2或Cl2水，加过量氨水，呈翠绿色,（四）Marquis反应 吗啡生物碱,（五） 官能团反应 吲哚生物碱,1. 利血平 + 新制香草醛→玫瑰红色,2.,（六）紫脲酸胺反应 黄嘌啉类生物碱,（七）还原反应 吗啡与磷酸可待因的区分反应,第三节 特殊杂质检查,一、利用物理性质差异,1、溶解行为硫酸奎宁：氯仿-乙醇溶解法检查无机盐杂质含量。
限量2mg/2g吗啡：强碱溶液溶解法检查“其他生物碱”2、旋光性差异 检查硫酸阿托品（消旋体）中的莨菪碱（有旋光性）3、吸光性差异 利血平氧化产物具有荧光，可用紫外吸光法检查4、吸附性质差异 硅胶G-TLC法检查硫酸奎宁中的“其他金鸡纳碱”二、利用化学性质差异1、沉淀反应 如硫酸阿托品中“其他生物碱”的检查2、显色反应,一、非水溶液滴定法（非水碱量法）（一）原理 本类药物含有氮原子显碱性，在冰醋酸-醋酐溶液中可用高氯酸直接滴定第四节 含量测定,BH+·A- + HClO4 = BH+·ClO4- + HA,1.溶剂 酸性溶剂：冰醋酸、冰醋酸+醋酐、醋酐 惰性溶剂：苯、氯仿、四氯化碳 能强烈影响溶质的解离情况和酸碱强度的溶剂：硝基甲烷、丙酮、二氧六环,2.滴定剂：高氯酸的冰醋酸溶液,3.指示终点的方法 电位法：玻璃-甘汞电极系统 指示剂法：结晶紫、喹哪啶红等,有机碱及其盐类及有机酸碱金属盐类,8＜pKb＜10 冰醋酸作溶剂10＜pKb＜12 冰醋酸+醋酐pKb＞12 醋酐,（二）适用范围,（三）生物碱盐类的滴定,无机酸在冰醋酸中的酸性次序为：,高氯酸＞氢溴酸＞硫酸＞盐酸＞＞硝酸＞其它弱酸 （磷酸、有机酸）,1.游离生物碱 需用醋酐-冰醋酸（5：1）为溶剂。
一般均预先在溶液中加入Hg(Ac)2 的冰醋酸溶液，以消除氢卤酸对滴定的干扰理论量1～3倍,2. 氢卤酸盐的测定,生物碱的硫酸盐，在冰醋酸介质中只能被滴定至生物碱的硫酸氢盐3. 硫酸盐的测定,A. 硫酸阿托品 HClO4直接滴定时，反应摩尔比为1∶1,（1）直接滴定,B. 硫酸奎宁 HClO4直接滴定时，反应摩尔比为1∶3,（2）加入高氯酸钡消除硫酸的干扰后滴定 硫酸奎宁 反应摩尔比为1∶2 硫酸阿托品 一元碱不能滴定,因HNO3具有氧化性，可使指示剂变色，一般电位法指示终点如硝酸士的宁、硝酸毛果芸香碱,4. 硝酸盐的测定,弱酸，对滴定无干扰，能准确滴定，按常法测定，如磷酸氯喹、磷酸可待因,5. 磷酸盐和有机酸盐的测定,简便、快速、准确、取样量小，测定的是生理活性部分，尤其适合原料；专一性差，实际上是置换滴定，滴定阴离子五）特点,（一）基本原理 在适当的pH介质中,二、酸性染料比色法 （适用于小剂量药品及制剂）,1. 水相的最适pH值 如果水相pH值过小，酸性染料几乎仍以分子状态存在；如果水相pH值过大，则生物碱几乎全部以游离碱的形式存在,2. 有机溶剂的选择 CHCl3、CH2Cl2、苯、甲苯等,（二）影响定量分析的因素,3. 酸性染料的选择 常用溴甲酚绿、溴麝香草酚蓝（BTB）、溴甲酚绿等,5. 有色杂质的排除 可先用有机溶剂提取酸性染料中有色杂质。
4. 水分的影响 严防水分的混入 有机层可加入无水硫酸钠等脱水剂或经干燥滤纸滤过,6. 共存物的影响,3. 准确度差，不能用于原料药的测定，只能用于制剂分析,（三）特点,1. 选择性高（选用适当pH缓冲液可消除干扰）,2. 灵敏度高、供试品用量少,三、提取酸碱滴定法,（一）原理与方法,,生物碱盐类可溶解于水，不溶于有机溶剂,游离生物碱不溶于水，易溶于有机溶剂,,,依据性质,1. 基本原理,,2. 操作,3. 测定方法,（1）直接滴定法 用于碱性较强的生物碱,（2）剩余滴定法 用于碱性较弱的生物碱,（3）酸滴定液返提后剩余滴定法 用于对热不稳定的生物碱,1. 碱化试剂：最常用氨水2. 提取溶剂 （1）提取溶剂选择的原则（2）常用的提取溶剂： 最常用氯仿,（二）测定条件的选择,含酯结构的药物，在强碱条件下易水解； 含酚结构的药物，与强碱成盐易溶解于水，难以用有机溶剂提取； 含脂肪性共存物的药物，碱化后易乳化，提取不完全3）提取溶剂的用量及提取次数 通常应提取4次，第一次用量至少应为水液体积的一半，以后几次应各为第一次的一半,3. 提取终点的确定 用合适的沉淀反应确定,4. 指示剂的选择,（三）方法评价,1. 专一性：经分离后测定生物碱，有一定专一性。
2. 缺点：费时，繁琐；对挥发性或热不稳定性生物碱类药物不适用例1. 盐酸吗啡中应检查的特殊杂质为A. 吗啡B. 阿朴吗啡C. 罂粟碱D. 莨菪碱E. 其它生物碱,,,,例2．用非水溶液滴定法测定盐酸吗啡含量时，应使用的试剂是A. 5％醋酸汞冰醋酸液B. 盐酸C. 冰醋酸D. 二甲基甲酰胺E. 高氯酸,,,,例3．非水溶液滴定法测定硫酸奎宁含量的反应条件为 A．冰醋酸-醋酐为溶剂 B. 高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定 C．1mol的高氯酸与⅓mol的硫酸奎宁反应 D. 仅用电位法指示终点 E．溴酚蓝为指示剂,,,,例4. 酸件染料比色法中，水相的pH值过小，则A. 能形成离子对B. 有机溶剂提取能完全C. 酸性染料以阴离子状态存在D. 生物碱几乎全部以分子状态存在E. 酸性染料以分子状态存在,,例5. 生物碱类药物的一般鉴别试验包括A. 熔点测定B. 显色反应C. 沉淀反应D. 光谱法（紫外、红外）E. 薄层色谱法,,,,,,例6. 能够发生Vitali反应的药物是A. 盐酸吗啡B. 硫酸奎宁C. 磷酸可待因D. 盐酸麻黄碱E. 硫酸阿托品,,例7. 酸性染料比色法测定生物碱类药物，有机溶剂萃取测定的有色物是A. 离子对和指示剂的混合物B. 生物碱盐C. 指示剂D. 离子对E. 游离生物碱,,。