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1、人细胞外膜蛋白复合物 ELISA 检测试剂盒试验原理：OMPC 试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知 OMPC 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将 OMPC 和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的 HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物 A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中 OMPC 的浓度呈比例关系。安全性避免直接接触终止液和底物 A、B 。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。操作注意事项试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温
2、。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物 A、B 液时，避免使用带金属部分的加样器。使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。底物 A 应挥发，避免长时间打开盖子。底物 B 对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取 OD 值。加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。按照说明书中标明的时间、加液的量
3、及顺序进行温育操作。样品收集、处理及保存方法血清-操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000g 离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。血浆-EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000g 离心 30分钟去除颗粒。细胞上清液-1000g 离心10分钟去除颗粒和聚合物。组织匀浆-将组织加入适量生理盐水捣碎。1000g 离心10分钟，取上清液保存- 如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。操作
4、步骤使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul 于反应孔内。加入稀释好后的标准品50ul 于反应孔、加入待测样品50ul 于反应孔内。立即加入50ul 的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37温育1小时。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。每孔加入80ul 的亲和链酶素-HRP，
5、轻轻振荡混匀，37温育30 分钟。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。每孔加入底物 A、B 各50ul，轻轻振荡混匀，37温育10分钟。避免光照。取出酶标板，迅速加入50ul 终止液，加入终止液后应立即测定结果。在450nm 波长处测定各孔的 OD 值。试剂盒性能1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数 R值为0.990。2. 特异性：不与其它细胞因子反应。3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。结 果 判 断 与 分 析1、仪器值：于波长450nm 的酶标仪上读取各孔的 OD 值2、以吸光度 OD 值为纵坐标（Y） ，相应的 OMPC 标准品浓度为横坐标（X） ，做得相应的曲线，样品的 OMPC 含量可根据其 OD 值由标准曲线换算出相应的浓度。3、检测值范围：0-400nmol/L4、敏感度： 1.0 nmol/L
