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1、1结直肠癌中 Pgp、GST 、Topo的表达及意义【摘要 】 探讨结直肠癌中 P糖蛋白（Pgp ） 、谷胱甘肽S 转移酶（GST ）和 DNA 拓扑酶（Topo）的表达及临床意义。方法：应用 SupervisionTM 法检测 67 例结直肠癌组织中Pgp、GST 和 Topo 的表达。结果：Pgp 、GST 和Topo的表达阳性率分别为 642%（43/67）,597% （40/67）和 612%（41/67） 。Pgp 、GST 和 Topo的表达与年龄、性别、肿瘤大?课弧橹 旨丁俅卜制诩坝形蘖馨徒嶙 莆薰兀005 ） 。结论：应用免疫组化法检测结直肠癌组织中Pgp、GST 和 Topo
2、 的表达，对结直肠癌的化疗药物的选择和判断预后具有显著的临床意义。 【关键词】 结直肠肿瘤 Pgp GST Topo 免疫组织化学AbstractObjective:To evaluate the clinical significance of expression of Pglycoprotein(Pgp), glutathione Stransferase(GST),and Topoisomerase(Topo) in colorectal carcinoma. Methods:SupervisionTM immunohistochemical technique was used to
3、 examine the 2expression of Pgp, GST, Topo in 67 cases of colorectal carcinoma tissues. Results:The positive rates of expression of Pgp, GST, Topo were 64.2%(43/67),59.7%(40/67) and 61.2%(41/67),respectively. The expression rates were not relation to sex, age, tumor site, histological gradee, clinic
4、al stage and metastasis of lymph nodes(P0.05). Conclusion:The detection of Pgp, GST and Topo by immunohistochemstry is of important clinical significance to select chemotherapy and to judge prognosis in colorectal carcinoma.Key wordsColorectal neoplasms; Pgp;GST;Topo; Immunohistochemstry多药耐药（multidr
5、ug resistance,MDR）是多种肿瘤化疗失败的主要原因。结直肠癌是目前死亡率较高的恶性肿瘤1，对化疗不敏感，MDR 可能是其主要原因之一。研究表明 P糖蛋白（Pgp ） 、谷胱甘肽S 转移酶（GST ）和 DNA 拓扑酶（Topo ）等多种细胞内物质是恶性肿瘤产生 MDR 的物质基础2。本文用 SupervisionTM 法检测 67 例结直肠癌中Pgp、GST 和 Topo 表达，探讨其临床意义。31 材料与方法1.1 一般资料:选取我院 2003 年 1 月至 2005 年 3 月间 67 例结直肠癌患者外科手术切除标本。其中男 34 例，女 33 例。年龄3277 岁。直肠癌
6、38 例，结肠癌 29 例（包括乙状结肠 12 例、降结肠 4 例、横结肠 4 例、升结肠 9 例） 。病程 2 d 至 3 年。肿瘤直径 1580 cm。Dukes 分期：A 期 5 例，B 期 35 例，C 期 27例。无淋巴结转移者 40 例，有淋巴结转移者 27 例。所有病例术前均未接受过化疗。12方法：67 例结直肠癌标本均经 10%中性甲醛溶液固定，常规石蜡包埋切片，行 SupervisionTM 免疫组织化学方法染色，具体步骤均参照试剂盒说明进行。抗人 Pgp、GST 和 Topo单克隆抗体及试剂盒均购自上海长嘉生物科技有限公司。用已知阳性切片做阳性对照，用 PBS 做阴性对照。
7、13统计学处理：2 检验。2 结果Pgp和 GST阳性产物呈棕色细颗粒，主要定位于肿瘤细胞膜和（或）胞浆；Topo阳性产物主要定位于胞核。阳性瘤细4胞表达数5%为阴性， 6%25%为阳性，26%50%为中度阳性，50%为强阳性。67 例结直肠癌中 Pgp、GST 和 Topo的阳性表达分别为 43 例（642% ） 、40 例（597% ） 、41 例（612% ） 。它们的表达与临床病理参数的关系见表 1。其中 Pgp与 GST同时表达阳性者 23 例（343% ） ；Pgp 、GST 和Topo同时表达阳性者 15 例（224% ） ；Pgp 与 GST同时表达阳性而 Topo 阴性表达者
8、 12 例（179% ） ；Pgp 与 GST同时表达阴性而 Topo表达阳性者 23 例（343% ） 。由表 1 可见Pgp、GST 和 Topo 的表达与年龄、性别、肿瘤大?课弧橹 旨丁ukes 分期及有无淋巴结转移之间的差异无统计学意义（P005 ） 。表 1 结直肠癌耐药基因蛋白的阳性表达与临床病理参数的关系3 讨论人类基因组中有两个 MDR 基因：MDR1 和 MDR2。现已表明，只有 MDR1 基因的表达水平与人体肿瘤细胞 MDR 有关。在MDR 细胞膜上有一种分子量为 170 Ku 的膜蛋白，称之 P 糖蛋白（Pglycoprotein,Pgp ） 。该蛋白的表达水平与细胞膜的
9、通透性、细胞内药物浓度以及细胞耐药程度有关，Pgp 跨膜结构具有能量依赖性“药泵”功能，Pgp 有与抗癌药物结合的位点，也有与ATP 结合的位点，ATP 主要是提供能量，能使细胞内药物转出细胞外，造成细胞内药物浓度下降，细胞毒作用降低或完全丧失，从而5细胞产生耐药。Pgp 是细胞产生 MDR 表型的分子基础，具有MDR 的肿瘤细胞， MDR 基因表达水平与耐药程度成正比。刘占兵3等报道对 48 例结直肠癌 Pgp表达阳性率为 73%。本文 67 例结直肠癌中 Pgp表达者 43 例（642% ） ，与文献报道相似，提示Pgp表达是结直肠癌 MDR 产生的因素之一，可部分解释结直肠癌的内在抗药性
10、的原因。GST 是机体中催化谷胱甘肽（glutathione，GSH）与亲电性性物质发生结合的一类酶系，具有多种生物理学功能，包括转运亲脂性混合物，清除细胞毒性产物、细胞间粘连等。GST 可通过催化 GSH 与亲电物质（包括烷化剂、蒽环类抗肿瘤药物等）结合，最终将毒性物质从尿液中排出或代谢为无毒性的醇类物质4。GST 结构多样，可分为 、 、 及膜结合微粒体 5 种类型，其中 GST与恶性肿瘤关系密切。本文 67例结直肠癌中 GST表达 40 例（597% ） ，这说明 GST在结直肠癌 MDR 中与 Pgp同样起重要作用。DNA 拓扑酶是催化DNA 拓扑结构改变的酶系，分为型、型，主要存在周
11、期的 S至 M 期。在结直肠癌中 Topo高表达，并且在结直肠组织中可根据其表达程度不同区分非肿瘤性病变、腺瘤及癌5。更重要的是，Topo是多种抗肿瘤药物的靶分子，其表达降低将严重影响肿瘤化疗的敏感性。本文 67 例结直肠癌中 41 例（61 ）表达Topo，提示其余 26 例（398% ）结直肠癌的产生可能与Topo不表达有关。佟喜勤6等认为 Pgp、GST 在结直肠癌表达中高分化腺癌表达高于低分化腺癌，表达随浸润深度加深而降6低，与淋巴结转移无关。Sinicrope7等认为 Pgp表达与肿瘤复发有关，而与肿瘤细胞的 DNA 的含量、肿瘤局部浸润性及病理分型无关。本文研究发现 Pgp、GST
12、 和 Topo的表达与年龄、性别、肿瘤大?课弧橹 旨丁ukes 分型及有无淋巴结转移无关（P005 ） 。这些差异有待于积累更多的病例进一步研究。本文 67 例结直肠癌中 Pgp、GST 和 Topo同时表达阳性者15 例（224% ） ；Pgp 与 GST同时表达阳性而 Topo阴性表达者 12 例（179% ） 。该结果表明 Pgp、GST 在结直肠癌中的广泛表达是结直肠癌对化疗不敏感的重要原因，并且多因素联合作用可能是 MDR 的主要作用机制。提示对肿瘤患者联合检测Pgp、GST 和 Topo 的耐药性，可以指导临床用药，减少盲目性。【参考文献】1 高梅鷟,薛东波, 赵明 ,等.83 例
13、大肠癌多药耐药基因的检测.中国现代医学杂志,2001;11(12):1011.2Gottesman MM, Pastan I. Biochemistry of Multidrug resistance medinted by the Multdrug transporter. Annu Rev Biochem,1993,63:385427.73 刘占兵, 徐文怀,赵建勋,等. 大肠癌中多药耐药基因表达的临床意义及对预后的影响.中国现代医学杂志,2003;13(3):6263.4 施作霖. 多药耐药基因免疫组化研究研究近况. 诊断病理学杂志, 1997,4(2):122126.5Iion K,
14、Sasano H, et al. DNA topoisomerase alpha and Ki67 in human adrenosortical neoplasm:apossible marker of differentiation between aderomas and carcinomas.Mod pathol,1997,10:9901.6 佟喜勤, 聂明豪,陈立蒙.Pgp 和 GST蛋白在结直肠癌的表达及意义.实用肿瘤学杂志.2001,15(2):107108.7Sinicrope FA,Hart J,Brasitus TA,et al.Relationship of Pglycoprotein and carcinoembrynonic antigen expression in human colon carcinoma to local invasion,DNA ploidy,and disease relapse.Cancer,1994,74:2908.
