《环氧合酶2、p53在骨肉瘤中的表达及临床意义》由会员分享，可在线阅读，更多相关《环氧合酶2、p53在骨肉瘤中的表达及临床意义（11页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1环氧合酶 2、p53 在骨肉瘤中的表达及临床意义【摘要 】 探讨环氧合酶2 （cyclooxygenase2 ，cox2 ）蛋白、p53 蛋白在骨肉瘤、骨软骨瘤组织中表达的差异性、相关性及临床意义。 方法回顾本科 19982004 年间骨肉瘤患者档案，筛选术后石蜡切片 40 例作为试验组。男 24 例，女 16 例；年龄838（18.686.47）岁。筛选同期骨软骨瘤患者术后石蜡切片 20例作为对照组。男 13 例，女 7 例；年龄 927（17.954.77）岁。应用免疫组化（SP ）进行染色。光镜下观察染色切片， cox2蛋白染色：以组织胞浆内出现棕黄色颗粒者为阳性细胞；p53 蛋白染色
2、：以胞核内出现棕黄色颗粒者为阳性细胞。随机观察 5 个高倍视野，依照阳性细胞所占比例分为：“-”阳性细胞所占比例5%；“+” 阳性细胞所占比例 525；“+”阳性细胞所占比例 2650；“+”阳性细胞所占比例50。分别统计两者的阳性表达情况，所得数据应用 SAS v6.12 统计软件处理。采用 chisquare test 进行 x2 检验，=0.05 为水准，分别统计两者在骨肉瘤、骨软骨瘤组织细胞中阳性表达的差异性。采用Spearman 等级相关分析法检验两者在骨肉瘤中阳性表达之间的相关性，=0.05 为水准。 结果骨肉瘤组织中 cox2、p53 蛋白的阳性率分别为 67.5和 55.0，显
3、著高于对照组骨软骨瘤组织（P 0.05） 。cox2 、 p53 蛋白在骨肉瘤中的表达密切相关2（rs=0.58，P0.05） 。 结论在骨肉瘤中，cox2 、p53 参与了骨肉瘤的发生、发展，两者密切相关，相互协同。临床上联合检测两者对骨肉瘤的早期诊断和预后有重要意义。 【关键词】 骨肉瘤 骨软骨瘤 环氧合酶2 p53 疫组化Abstract：ObjectiveTo observe the expressional variability and correlation of cox2 and p53 protein between osteosarcoma and osteochondro
4、ma and explore their clinical significance.MethodSixty Specimens divided into 2 groups were taken from the department of pathology,Third Hospital of Hebei Medical University during 19982004.Among them,40（24 male and 16 female）aged 838（18.686.47）at time of therapy were from cases of osteosarcoma exci
5、sion;20（13 male and 7 female）aged 927（17.954.77）from benign lesion of bone（osteochondroma）operation.Immunohistochemistry staining（StreptavidinPeroxidasc,SP method）was performed to detect the expressions of cox2 protein and p53 protein in 40 cases of osteosarcoma.The criteria of positive expression w
6、as that brown granule was found in cytoplasm（cox2 ）or in nucleus（p53）.The percentage of 3cox2 or p53 positive expression in five high power fields was cunted randomly in each case.Positive（-）:positive oncocytes account 5%;Positive（+）:positive oncocytes account 5%25%;Positive（+）:positive oncocytes ac
7、count 26%50%;Positive（+）:positive oncocytes account50%.Software SAS v6.12 was used in data analysis.The difference of cox2 and p53 expressions between osteosarcoma and osteochondroma was analyzed with Chisquare Test.Spearman method was used,with the standard =0.05,to analyze the relationship between
8、 cox2 and p53 expression among osteosarcoma.ResultThe positive rate of cox2 and p53 expressions were 67.5% and 55.0% in osteosarcoma,there was noticeable distinction between osteosarcoma and osteochondroma,most of them was high.There was a positive correlation between them,rs=0.58,P0.05.Conclusion C
9、ox2 and p53 participate and closely correlate in the carcinogenesis and development of osteosarcoma.The detection of them might be a guide for the pristine diagnosis and prognosis of osteosarcoma in clinic.Key words:osteosarcoma; osteochondroma; 4eyelooxygenase2; p53; immunohistochemistry骨肉瘤是一种高恶性肿瘤
10、，早期即可发生肺部转移。故骨肉瘤的早期诊断至为重要。近数年来国内外多中心研究证实，cox2，p53 蛋白在多系统肿瘤中呈现过高表达，但在骨肉瘤中表达之间的关系少见报道，本实验应用免疫组化方法对此进行了初步研究。1 材料与方法1.1 临床资料收集河北医大三院骨病科 19982004 年间骨肉瘤标本 40 例作为试验组，男 24 例，女 16 例；年龄 838（18.686.47）岁。另筛选同期骨软骨瘤标本 20 例作为对照组，男 13 例，女 7 例；年龄927（17.954.77）岁。1.2 免疫组织化学方法（SP 法）1.2.1 主要试剂cox2羊多克隆抗体（美国 Santa Cruz 公司
11、） 、p53 兔多克隆5抗体（美国 Zyme 公司） 、SP9003 工作试剂盒，SP9001 工作试剂盒、DAB 显色试剂盒（北京中山生物技术有限公司） 。1.2.2 试验步骤严格按照 SP试剂盒说明进行操作。1.3 结果判定由两位病理医生盲法判定，光镜下观察染色切片，以组织胞浆内（cox2 ）或胞核内（p53）出现棕黄色颗粒者为阳性细胞，随机观察 5 个高倍视野，依据阳性细胞所占比例分为：“-”阳性细胞所占比例5；“+”阳性细胞所占比例 5 25；“+”阳性细胞所占比例 2650；“+”阳性细胞所占比例50%。1.4 统计中处理采用 x2 检验阳性表达的差异性。采用 Spearman 等级
12、相关分析法检验阳性表达之间的相关性，=0.05 为水准。2 结 果62.1 40 例骨肉瘤中 27 例 cox2蛋白染色显示为阳性（染色位于胞浆中） ，阳性率为 67.5。20 例骨软骨瘤中仅 3 例显示低阳性结果，阳性率为 15.0（表 1） 。两者存在显著性差异，x2=14.7， P0.05 有统计学意义。2.2 p53 蛋白于 22 例染色显示为阳性结果（位于胞核中） ，且多为高表达，阳性率为 55.0。20 例骨软骨瘤中均未显示阳性结果（表 2） 。两者存在显著性差异， x2=17.368，P0.05，有统计学意义。表 1 cox2在骨肉瘤、骨软骨瘤中的差异性表达情况表 2 p53 在
13、骨肉瘤、骨软骨瘤中的差异性表达情况2.3 40 例骨肉瘤标本中有 18 例 cox2、mtp53 蛋白染色均为阳性（图 1、2） ，有 9 例染色均为阴性（表 3） 。通过 Spearman等级相关分析法证实两者存在显著正相关，rs=0.58，P0.05，有统计学意义。 表 3 cox2、p53 在骨肉瘤中的相关性表达情况注：rs=0.58,P 0.053 讨 论近年来国内外多中心研究显示：cox2 、p53 在多系统肿瘤均存在高表达，参与了肿瘤的发生、发展和转移，但在骨肉瘤中的相关研究少见报道。7本研究主要探讨 cox2、p53 在骨肉瘤的关系，为骨肉瘤的早期诊断、预后提供一种新的方法和标志
14、。cox 具有两种分型：环氧合酶型（cox1 ）和环氧合酶型（cox2 ）两种同工酶，cox1 是一种结构型酶，微量恒定表面在人体正常组织细胞中，参与机体正常生理过程，cox2 是一种诱导型酶，在生理细胞中基本不表达，在细胞受到各种刺激下迅速合成，参与多种生理及病理过程。Dickens 等1对 58 例骨肉瘤和横纹肌肉瘤的组织进行了免疫组化研究，发现 cox2在 82.8的组织中表达阳性，且随着骨肉瘤和横纹肌肉瘤恶性程度和侵袭力的增高其表达率有增高的趋势。Maciag A 等2对肺癌组织研究认为，突变型 Krasv 12 导致 cox2水平明显上调，致使 ROS 增多出现DNA 损伤，诱导细胞
15、恶性变，同肺癌的发生、发展密切相关。Xu Z 等3研究认为，cox2 在骨肉瘤中组织细胞中的过高表达，可通过增高 ROS 水平，降低细胞的生长能力而达到阻滞肿瘤细胞增殖，并且这种作用与肿瘤组织、细胞的种类有关。但本研究并未发现这种情况，在骨肉瘤中 cox2蛋白均呈过高表达，与肿瘤的组织类型无关。姜宇等4研究表明，骨肉瘤组织中存在 cox2的高表达，cox2与骨肉瘤的新生血管生成密切相关，其高表达可能促进了肿瘤新生血管生成。本研究表明，骨肉瘤的发生、发展与 cox2的表达存在密切相关，与国内、外的相关肿瘤文献报道结果一致5 。8人类肿瘤中约有 50以上与 p53 基因的变化有关。 p53 基因分
16、为野生型（wtp53 ）和突变型（mtp53 ）2 种，其产物亦分为野生型 p53 蛋白和突变型 p53 蛋白 2 种。野生型 p53 蛋白极不稳定，半衰期仅为数分钟，对控制细胞周期、维持细胞遗传稳定性具有重要作用，并具有反式激活功能和广谱的肿瘤抑制作用。p53 基因突变和等位基因缺失是导致 mtp53蛋白异常表达的主要原因。由于mtp53蛋白的半衰期可延长至 612 h，所以用抗 mtp53蛋白的抗体通过免疫组化的方法检测肿瘤组织，过高表达常提示 p53 基因存在错义突变。突变型 p53 基因则具有癌基因作用，促进细胞恶性转化。Singh 等6研究发现 p53 基因参与了 PI3KPIP3PKB诱导的凋亡途
