《Survivin在涎腺良性、交界性、恶性多形性腺瘤中的表达及意义》由会员分享，可在线阅读，更多相关《Survivin在涎腺良性、交界性、恶性多形性腺瘤中的表达及意义（14页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1Survivin 在涎腺良性、交界性、恶性多形性腺瘤中的表达及意义【关键词】 Survivin；多形性腺瘤；免疫组织化学；原位杂交摘要：目的 探讨 Survivin 在涎腺良性多形性腺瘤 (PA)、交界性多形性腺瘤(RPA)、恶性多形性腺瘤(MPA)中的表达及其与肿瘤增殖活性的相关性。方法 应用免疫组织化学方法及原位杂交技术检测 14 例涎腺 PA、9 例 RPA、11 例 MPA 以及 9 例癌旁腺组织中Survivin 的表达。结果 Survivin mRNA 在涎腺 PA、RPA、MPA中的表达与其蛋白表达相比均无显著性差异，而在癌旁腺体中的表达存在显著性差异(P0.05)；在涎腺 P
2、A 中 Survivin mRNA 及其蛋白的表达均明显低于 RPA、MPA 及癌旁组织(P0.01)，而RPA 与 MPA 中的表达无显著性差异；在 MPA 中高分化者与中低分化者的表达均有显著性差异(P0.05)。结论 Survivin 基因的转录和扩增可能参与多形性腺瘤的发生、发展及恶变进程,并且在肿瘤发生的不同阶段有不同表达，有望成为涎腺肿瘤诊断和治疗的新靶点。关键词：Survivin；多形性腺瘤；免疫组织化学；原位杂交The expression of survivin gene in malignant 2pleomorphic adenoma, relay pleomorphic
3、 adenoma and pleomorphic adenomaMedical School of Xian Jiaotong University, Xian 710004, China)ABSTRACT: Objective To study the expression of survivin in malignant pleomorphic adenoma, relay pleomorphic adenoma and pleomorphic adenoma. Methods The transcription and interpretation of urvivin mRNA in
4、the salivary gland tumor were analyzed via immunohistochemistry and in situ hybridization methods. Results Survivin mRNA expression and protein expression were almost the same in malignant pleomorphic adenoma, relay pleomorphic adenoma and pleomorphic adenoma. But they were different in the gland ar
5、ound the malignant pleomorphic adenoma. There was a significant difference of Survivin mRNA and protein expression in pleomorphic adenoma and malignant pleomorphic adenoma, and relay pleomorphic adenoma. The expressions were almost the same in relay and malignant pleomorphic adenoma. Conclusion The
6、expression of survivin mRNA and protein is increased in pleomorphic adenoma and may be involved in the onset and progression of pleomorphic adenoma. It 3indicates that mRNA is relatively stable in the mRNA transcription and protein interpretation in malignant pleomorphic adenoma, and it is also show
7、ed earlier in gene amplification than in protein expression of the malignant tumor in the initial stage of malignant pleomorphic adenoma. Survivin can be a new diagnostic/therapeutic target in pleomorphic adenoma.KEY WORDS: survivin; pleomorphic adenoma; immunohistochemistry; in situ hybridization肿瘤
8、的发生尽管存在基因改变的复杂性和多因素性，但细胞增殖和细胞凋亡调控失常是普遍存在的因素。多形性腺瘤(pleomorphic adenoma, PA)是涎腺最常见的肿瘤，被认为属交界性肿瘤，其与恶性多形性腺瘤(malignant PA, MPA)都被发现存在有许多与凋亡和增殖有关的基因，如 cmyc，p53，bcl2 等的异常表达或基因突变。Survivin 是凋亡抑制蛋白(IAP)家族的新成员，能直接抑制 Caspase3 和 Caspase7 活性，阻止细胞凋亡1 。随着研究不断深入，发现其也能影响细胞周期循环，被认为是维持细胞增殖与凋亡平衡的界面分子。在本研究中我们探讨了 Suvivin
9、在涎腺PA、RPA、MPA 中的表达情况，以期为良恶性多形性腺瘤的诊断及治疗提供依据。41 材料与方法1.1 标本来源 选取我院近年手术切除的涎腺良性 PA、交界性多形性腺瘤(relay PA, RPA)、恶性多形性腺瘤(malignant PA, MPA)标本及 MPA 所带瘤旁组织。其中 MPA 11 例，男 9 例，女2 例，平均年龄 56.5 岁。PA 与 RPA 共 23 例，男 13 例，女 10 例，平均年龄 46.45 岁。阳性对照胚胎腺组织为 6-7 周流产胎儿颌下腺组织。标本均经 40g/L 甲醛溶液固定，石蜡包埋，连续 4m 切片。1.2 主要试剂 鼠抗人 Survivi
10、n 单克隆抗体为美国 Santa Crus 公司产品；免疫组织化学 PV6000 试剂盒及 DAB 显色试剂盒为 Zymed 公司产品，均购自北京中山公司；Survivin 原位杂交试剂盒购自武汉博士德公司。1.3 方法1.3.1 免疫组化染色 Survivin 工作浓度 180，染色前行微波抗原修复， DAB 显色，苏木素轻度复染。磷酸盐缓冲液 (PBS)代替一抗作阴性对照。51.3.2 原位杂交 杂交前各步严防 RNA 酶污染，所有实验用品均用 DEPC 处理。以预杂交液代替杂交液作为空白对照，同时进行芯片的管家基因GAPDH 基因检测，作为内参照，以剔除基因损失而造成的假阴性。1.3.3
11、 结果判断 Survivin 染色以胞浆中染成棕黄色为阳性，少数出现胞核阳性。凡染色强度明显高于背景者为阳性表达。将阳性细胞按其数量及染色强度分为 3 级:弱阳性 (+)，即阳性细胞数小于 10%，染色强度为弱阳性或仅个别细胞呈中至强阳性；强阳性()，即阳性细胞数为 60%以上，染色强度为中至强阳性，少数细胞可为弱阳性表达；中度阳性 ()，即阳性细胞数介于表达弱阳性与表达强阳性两级之间；染色强度与背景无明显差别者为阴性。1.4 统计学处理 构成比资料采用 2 检验，单向有序列联表资料采用秩和检验，以 P0.05 为有统计学意义。2 结果2.1 涎腺 PA、RPA、MPA 及癌旁腺体中 Surv
12、ivin mRNA的表达 胚胎腺组织中腺泡、导管均见表达(图 1a)；正常腺组织腺泡中均无 Survivin 表达，而闰管及纹管均弱阳性表达(图 1b)；PA 主要表达于鳞状化生区；RPA 主要表达于肿瘤性上皮细胞，包括导管6结构内层的腺管上皮细胞和外层的肌上皮细胞、肌上皮团块及鳞状化生区域的细胞浆中，而在黏液软骨样区几乎不表达(图 1e)；MPA主要表达于其恶性组分中(图 1d)；MPA 瘤旁腺体中腺泡、导管均见表达(图 1c)。在涎腺 PA 中 Survivin mRNA 表达明显低于 RPA 、MPA及癌旁组织中的表达(P0.05)；在高分化与中低分化 MPA 中的表达具有显著性差异(P
13、0.05，表 1)。表 1 涎腺 PA、RPA、MPA 及癌旁组织中 Survivin mRNA表达（略）Table 1 Expression of Survivin mRNA in PA, RPA, MPA, and the gland around MPAPA: pleomorphic adenoma; MPA: malignant pleomorphic adenoma; RPA: relay pleomorphic adenoma*P0.01 vs. RPA, MPA, and the gland around MPA; P0.05 vs. RPA; P0.05 vs. highgra
14、de MPA72.2 涎腺 PA、RPA、MPA 及癌旁腺体中 Survivin 蛋白表达 其表达情况与 mRNA 表达相一致(图 1f1k)。在涎腺 PA 中 Survivin蛋白阳性表达率均明显低于 RPA、MPA 及癌旁组织中的表达(P0.05);癌旁腺体与 MPA 表达有显著差异(P0.01 ，表 2)。表 2 涎腺 PA、RPA、MPA 及癌旁腺体中 Survivin 蛋白的表达（略）Table 2 Expression of Survivin protein in PA, RPA, MPA, and the gland around MPA*P0.01 vs. RPA, MPA,
15、the gland around MPA; P0.05), 而在癌旁腺体中表达有显著性差异(P0.05 ，表 3)；配对设计资料进行检测，二者符合率为 91.17%。两种方法检测结果有相关性(P0.05，表 4)。8图 1 Survivin mRNA 及其蛋白在涎腺 PA、RPA、MPA 及癌旁组织中的表达（略）Fig.1 The expression of Survivin mRNA and protein in the salivary gland, and RPA, and MPA, and the gland around MPAa: Embryonic parotid gland; b: Normal salivary gland; c: The gland around the malignant tumor; d: Malignant pleomorphic adenoma; e: Relay pleomorphic adenoma(in situ hybridization); f: Embryonic parotid gland; g: Normal salivary gland; h: The gland around the malignant tumor; i: Ma
