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1、1Survivin 和 nm23H1 及 PTEN 蛋白在胆囊癌组织中的表达及其相关性研究【摘要 】 目的：探讨 Survivin(SVV)和 nm23H1及 PTEN蛋白在原发性胆囊癌组织中的表达与癌组织类型、病理分级和转移状况的关系,以及 SVV与 nm23H1和 PTEN表达之间的相关性。方法：应用免疫组化方法检测 52例胆囊腺癌、20 例胆囊腺瘤和 20例慢性胆囊炎组织中 SVV、nm23H1 和 PTEN表达水平。结果：在胆囊癌中 SVV、nm23H1 和 PTEN表达阳性率分别为 67.3%, 51.9%和42.3%。SVV 高表达和 nm23H1及 PTEN低表达与胆囊癌的分化程
2、度、浆膜浸润和转移密切相关(P0.05)。SVV 表达与 nm23H1和 PTEN蛋白表达呈负相关(P0.05)。结论：检测 SVV和nm23H1及 PTEN基因蛋白表达可作为评价胆囊癌生物学行为的参考指标。 【关键词】 胆囊肿瘤基因表达调控肿瘤转移免疫组织化学Expression and correlation of survivin and nm23H1 and PTEN in gallbladder carcinoma【ABSTRACT】 Objective: To study the relationship of the 2expression of survivin (SVV),
3、nm23H1 and PTEN protein with the pathology, differentiation and metastasis of gallbladder cancer. Methods: Immunohistochemical method was used to investigate the expression of SVV, nm23H1 and PTEN gene in 52 cases of gallbladder carcinoma, 20 cases of gallbladder adenoma and 20 cases of chromic chol
4、ecystitis. Results: The positive rate of SVV, nm23H1 and PTEN was 67.3%, 51.9% and 42.3% respectively. The expressions of SVV were positively correlated with the pathological grading, serosa infiltration and metastasis in gallbladder carcinoma (P0.05). The expression of SVV had a reverse correlation
5、 with nm23H1 and PTEN expression in gallbladder carcinoma (P0.05). Conclusion: Expression of SVV, nm23H1 and PTEN could be helpful in predicting the biological behavior and prognosis of gallbladder carcinoma.【KEY WORDS】 Gallbladder NeoplasmsGene Expression RegulationNeoplasm MetastasisImmunohistoche
6、mistrySurvivin（SVV）基因是凋亡抑制蛋白家族的重要成员，具有强烈的凋亡抑制功能和促细胞增殖活性；nm23H1 基因是一种具有肿瘤转移抑制作用的基因；PTEN 是一种新型抑癌基因 ,3种基因的表3达均与肿瘤侵袭和转移有关1-8 。本研究应用免疫组化方法联合检测胆囊癌组织中 SVV、 nm23H1和 PTEN基因蛋白，探讨这 3种基因蛋白表达与胆囊癌临床预后性指标的关系及 3种基因蛋白表达之间的相关性，为判断患者预后提供客观的参考指标。1材料和方法1.1材料来源标本取自我院 1994年 6月2004 年 12月手术切除胆囊腺癌的患者共 52例，其中男 23例，女 29例，平均发病年
7、龄 59.9岁（2472 岁) 。病理组织学分级：高分化腺癌 32例，低分化腺癌 20例；伴有淋巴结和脏器（淋巴结、肝脏、胰腺、腹膜及大网膜）转移者 29例，未转移者 23例。取同期手术的胆囊腺瘤 20例和慢性胆囊炎 20例作为对照。标本经 4%甲醛固定，石蜡包埋，4 m厚连续切片。1.2试剂鼠抗人 SVV、nm23H1 和 PTEN单克隆抗体和LSAB试剂盒购自迈新生物技术公司（均为即用型） 。1.3免疫组织化学染色采用微波-LSAB 法。切片常规脱蜡水化后，放入 PBS（10 mmol/L, pH6.0）内，用 YWY781A型医用微波仪 170 W辐射抗原修复处理 5 min，冷却后水洗
8、。其他操作流程同常规 LSAB法，不同者为三步抗原孵育和正常羊血清封闭均用4微波仪 130W各辐射处理 5 min，保温 2 min。DAB 显色。实验用已知 SVV阳性大肠癌、 nm23H1和 PTEN阳性乳腺癌组织作阳性对照，用 PBS代替一抗作为阴性对照。1.4结果判断SVV、nm23H1 和 PTEN在细胞质有棕黄色染色者为阳性,凡未着色者为阴性。1.5统计处理采用 2检验，P0.05 为差异有统计学意义。2结果2.1SVV、nm23H1 和 PTEN在胆囊良恶性病变组织中的表达免疫组织化学染色显示，SVV、nm23H1 和 PTEN阳性产物呈棕黄色或棕褐色,均定位于细胞质（图 1）
9、。SVV 蛋白表达阳性率在胆囊癌组织中显著高于胆囊腺瘤和慢性胆囊炎组织（P0.05） 。nm23H1和 PTEN蛋白表达阳性率在胆囊癌组织中的显著低于胆囊腺瘤和慢性胆囊炎组织（P0.05 ） 。见表 1。2.2SVV、nm23H1 和 PTEN表达与胆囊腺癌临床病理特征的关系SVV、nm23H1 和 PTEN表达均与胆囊癌患者的发病年龄、性别和肿瘤大小无关,而随着胆囊癌的分化程度减低、浆膜浸润和转移程度的加深，SVV 蛋白阳性表达率增高，而 nm23H1和 PTEN5蛋白阳性表达率降低，差异均有统计学意义（P0.05） 。见表2。2.3 SVV表达与 nm23H1和 PTEN表达的关系 在 S
10、VV阳性表达的 35例胆囊癌患者中，nm23H1 阳性者为 15例(42.9%)，PTEN阳性者为 11例(31.4%)，在 SVV阴性的 17例胆囊癌患者中，nm23H1阳性表达者为 12例(70.6%)，PTEN 阳性者为 11例(64.7%)。胆囊癌组织中，SVV 表达与 nm23H1和 PTEN表达呈负相关（2值分别为 5.71和 5.19, P值均0.05） 。3讨论SVV 是一种凋亡抑制基因，属于 IAP（inhibitor of apoptosis）家族新成员，具有显著的抗凋亡作用和肿瘤特异性表达的特点，其表达与细胞周期密切相关。生理状态下，SVV 主要表达于胚胎和胎儿组织，在正
11、常成人组织中不表达(胸腺和生殖腺除外)。在癌组织中，存在不同程度的 SVV表达，并与肿瘤的发生发展、不良的组织学分化、侵袭转移及预后密切相关 ， 。nm23 是一种肿瘤抑制相关基因,分为 nm23H1和 nm23H2两个亚型，其编码产物二磷酸核苷激酶(NDPK)与微管聚合、G 蛋白介导的信号传递、细胞与周围组织附着力、完整的基底膜形成及转录调节有关。nm23表达降低与肿瘤的淋巴结转移、高复发率及低生存率等显著相关 。PTEN 基因是 1997年在染色体 10q23上克隆得到的一6种新型抑癌基因。当 PTEN抑癌基因突变或缺失可能构成一个新的信号转导途径，在调节细胞的增殖和死亡、细胞的转移和粘连
12、等方面均起重要作用，与人类恶性肿瘤的发生、发展关系密切4， 。PTEN突变或缺失可以促进血管内皮因子形成，使血管内皮细胞增殖和肿瘤微血管的形成，从而使肿瘤的侵袭转移能力增高 。本研究应用免疫组化方法，检测了胆囊良、恶性病变组织中SVV、nm23H1 和 PTEN蛋白表达，结果显示，在胆囊癌组织中SVV蛋白阳性表达率显著高于胆囊腺瘤和慢性胆囊炎组织(P0.05)，nm23H1 和 PTEN蛋白阳性表达率均显著低于于胆囊腺瘤和慢性胆囊炎组织(P0.05)；随着癌细胞分化程度减低、浆膜浸润和转移，SVV 蛋白阳性表达率显著性增高(P0.05)，与李亮等人报道不完全一致,nm23H1 和 PTEN蛋白
13、阳性表达率显著性减低(P0.05)，与文献报告一致，表明在胆囊癌的发生、细胞恶性转化、侵袭和转移过程中，SVV 基因起到一定促进作用，可能是胆囊癌的发生和临床进展过程中的早期事件；而 nm23H1和PTEN基因在此过程中起着重要的抑制作用，可能是胆囊癌的发生和临床进展过程中的晚期事件。在临床病理活检中，检测胆囊癌组织中三种不同基因蛋白表达，从不同方面观察和综合分析，更有助于深入研究肿瘤的发生发展，并可作为诊断、预后判断和评价肿瘤生物学行为的客观指标，尤其对指导临床采用基因治疗提供依据具有更重要的意义。7恶性肿瘤的发生、侵袭与转移是一个复杂的生物学过程，受多种基因的调控。本研究发现，在胆囊癌组织
14、中 SVV表达与nm23H1和 PTEN表达呈负相关,提示在胆囊癌的发生发展、临床进展和转移的病理过程中，这三种基因可能发挥着协同效应，共同参与了胆囊癌的演化过程。【参考文献】1 Shariat SF, Lotan Y, Saboorian H, et al. Survivin expression is associated with feartures of biologically aggressive prpstate carcinomaJ. Cancer, 2004,10(4):751-757.2 谷化平,尚培中, 冯骥良.原发性胆囊癌组织 survivin和nm23H1表达及其与临
15、床病理的相关性研究J.临床肝胆病杂志,2006,22(4):252-254.3 Ohta Y, Nozaki Z. The predictive value of vascular endothelial growth factor and nm23 for the diagnosis of occult metastasis in non-small cell lung cancerJ. Jpn J Cancer Res, 2001,92(3):361-366.4 郭双平，王丽，王文亮，等. 抑癌基因 PTEN在肝癌组织中的突变 及其对肝癌细胞增殖和凋亡的调控作用J.中华病理学杂志，8200
16、6，35(8):467-472.5 朱宝和，詹文华，刘弋，等. PTEN与基质金属蛋白酶在胃癌组织中的表达及意义J. 中国现代普通外科进展， 2006，9（1）：33-36.6 刘源，赵海鹰，田忠，等. Survivin和热休克蛋白 27在胰腺癌组织中的表达及关系J.中国现代普通外科进展，2006，9 （6）：343-345.7 谷化平，尚培中，张正猛，等. 抑癌基因蛋白与前列腺癌转移的关系J. 山西医科大学学报， 2005,36(1):120-121.8 李金，廖贵清.抑癌基因 PTEN在口腔肿瘤的研究进展J. 国外医学 口腔医学分册，2006，33(2):122-124.9 李亮，智绪亭，张宗利，等. 凋亡抑制因子 survivin在胆囊癌肿的表达及其意义J. 中国现代普通外科进展，2005，8(5)：292-293
