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1、1Survivin 基因在增殖性玻璃体视网膜病变增殖膜中的表达作者：王俊艳， 颜华， 王世忠， 李金茹， 刘皓【关键词】 Survivin 基因；,增殖性玻璃体视网膜病变；,增殖膜摘要：目的：观察 Survivin 基因在增殖性玻璃体视网膜病变增殖膜中的表达。方法：取已确诊为 PVR 并行玻璃体切除术患者的PVR 增殖膜，标本于术后立即由贮液瓶取至无菌器皿冰温运回，取出增殖膜放入多聚甲醛固定，并常规乙醇脱水，二甲苯透明、浸蜡、包埋、制备 5m 连续切片，将切片行常规 H-E 染色，采用Survivin 多克隆抗体（抗人及抗兔）行免疫组织化学实验，检测Survivin 基因在玻璃体和增殖膜中的表
2、达。结果：Survivin 基因在PVR 增殖膜中呈阳性表达，且随着 PVR 临床分级的增高，免疫组织化学染色阳性细胞百分率逐渐升高。结论：认为 PVR 的形成是由于Survivin 基因的异常表达促进了细胞增殖，阐明 PVR 的形成机制。关键词： Survivin 基因； 增殖性玻璃体视网膜病变； 增殖膜Expression of Survivin Gene in Periretinal Membranes 2of Proliferative VitreoretinopathyAbstract： Objective: To study the expression of survivin g
3、ene in periretinal membrane of prliferative vitreoretinopathy(PVR). Method: 14 periretinal membranes obtained from 14 cases of PVR with retinal detachment undergoing vitretomy were used to examine the expression of surviving gene by SABC method. Result: Survivin gene was expressed in 8 of the 14 cas
4、es. The reactions of surviving were observed in the cytoplasm and extracellular matrix. Conclusion: The abnormal expression of surviving gene inhibits apoptosis and it may participate in the progression of proliferative vitreoretinopathy.Key words： Survivin； Proliferative； Vitreoretinopathy增殖性玻璃体视网膜
5、病变（proliferative vitreoretinopathy, PVR）是指在裂孔源性视网膜脱离或视网膜复位手术后，由于视网膜色素上皮细胞及神经胶质细胞的增生和收缩，又造成牵拉性视网膜脱离的病变。如不及时治疗，终将导致全视网膜脱离而失明。经过大量的实验和临床研究，已认为 PVR 属于眼内发生的过度损伤修3复反应，这是一个以时相为特征的程序化过程，即经过了炎症期、增生期和瘢痕期，其形成的确切机制尚未完全明了。PVR 的病理特征是细胞过度增生1 。细胞增生与死亡失衡可能是 PVR 形成的原因。Survivin 是一个新发现的凋亡蛋白抑制剂家族成员，广泛表达于人的胚胎组织和各种肿瘤组织，但仅
6、在少数正常成人组织中表达2,3 。Survivin 具有抑制细胞凋亡和调节细胞有丝分裂的双重功能，是联系细胞周期和细胞凋亡界面的重要因子4 。1 资料和方法1.1 一般资料：2004 年 7 月至 2005 年 6 月确诊为孔源性视网膜脱离合并 PVR 并行玻璃体手术的病人 14 例。排除外伤性、糖尿病等引起的继发性视网膜脱离和系统性疾病。从玻璃体手术中取视网膜表面增殖膜，标本于术后立即由贮液瓶取至无菌器皿冰温运回，取出增殖膜放入多聚甲醛固定，并常规乙醇脱水，二甲苯透明、浸蜡、包埋、制备 5m 连续切片，将切片行常规 H-E 染色，采用Survivin 多克隆抗体，行免疫组织化学实验，检测 S
7、urvivin 基因在玻璃体和增殖膜中的表达。 1.2 方法：石蜡切片常规脱蜡至水， 3%H2O237 ，30min，以阻断内源性过氧化物酶活性，正常兔血清湿盒内 37封闭 20min；滴加羊抗人 survivin 多克隆抗体，湿盒内 4过夜，漂4洗；滴加生物素化兔抗山羊 IgG，湿盒内 37，20min，漂洗；滴加 SABC 复合物，湿盒内 37，20min ，漂洗；DAB 显色，显微镜下观察，水洗中止反应；脱水，透明，封片。将已知的乳腺癌切片作为阳性对照，用磷酸缓冲液代替一抗作为隐性对照，以组织切片背景清晰、胞质或胞核染为淡黄至黄棕色者为阳性细胞标志。将阳性细胞按显色强度分为 3 级：表达
8、弱阳性，即显色强度为淡黄色或仅个别细胞呈黄至棕黄色染色；表达强阳性，即多数细胞呈黄至棕黄色染色；表达中度阳性，即显色强度介于弱阳性与强阳性之间。凡显色强度与背景无明显差别者为阴性。2 结果14 例 PVR 增殖膜标本中， 8 例阳性，其中 2 例强阳性，4例中等阳性，2 例弱阳性。在 PVR 增殖膜的细胞中，视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelium, RPE）占较大部分，胞体变得长园，形态不规则。另外在增生膜中还见一些上皮细胞样和成纤维细胞样细胞。阳性染色位于膜上大部分细胞的胞质内，为棕黄色。阴性对照组中未见阳性染色。3 讨论PVR 是一种细胞增生过度而凋亡过低
9、的疾病。细胞凋亡是多细胞有机体为控制机体发育，维护内环境稳定，由基因控制的细胞5主动死亡。Survivin 是一个近年来发现的凋亡蛋白抑制剂（inhibitor of apoptotic protein，IAP ）家族成员，广泛表达于人的胚胎组织和各种肿瘤组织，具有抑制细胞凋亡和调节细胞有丝分裂的双重功能，是联系细胞周期和细胞凋亡界面的重要因子，几乎在所有被研究的肿瘤中均呈阳性表达。我们认为 PVR 虽然不同于肿瘤，但它在眼内局部发病情况与肿瘤的发病机理十分相似，均表现为细胞的过度增生。细胞的过度增生意味着细胞凋亡的减少，基于此，本实验从抑制细胞凋亡的 Survivin 基因着手，采用免疫组化
10、技术，检测 Survivin 基因在 PVR 患者增殖膜中的表达，探讨其在PVR 发病机制中的作用。为进一步通过反义核酸技术封闭 Survivin基因，抑制玻璃体和视网膜细胞增生，在基因水平治疗 PVR 提供理论依据。参考文献：1 Esser P, Heimann K, Abts H, et al. CD95(Fas/Apo-1) antibody-mediated apoptosis of human retinal pigment epithelial cells . Biochem Biophys Res Commun, 1995,213:1026-1034.2 Ambrosini G,
11、 Adida C, Altieri DC. A novel anti-apoptosis gene, surviving, expressed in cancer and 6lymphoma. Nat Med, 1997,3(8): 917-921.3 Altieri DC, Marchisio PC, Machisio C. Survivin apoptosis: an interloper between cell death and cell proliferation in cancer. Lab Invest, 1999,79(11): 1327-1333.4 赵文韬，王延庆Survivin 的研究现状 国外医学临床生物化学与检验学分册，2004，25（1）：11-13
