维生素B1B2的定性实验

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1、实验 维生素 B1、B 2的定性实验一、目的要求进一步了解维生素 B1、B 2的性质，掌握其定性检验方法。二、实验原理1维生素 B1 属水溶性维生素，因含有硫及氨基，又名硫胺素，在植物性食物中分布极广，谷类种子表皮中含量更为丰富，麦麸、米糠和酵母均是维生素 B1的良好来源。维生素 B1的定性鉴定反应主要有 2 个：重氮苯磺酸反应 在碳酸氢钠存在的碱性条件下，硫胺素可与重氮苯磺酸作用产生红色，加入少量的甲醛，可使红色稳定。本反应不灵敏，特异性低，但操作简单迅速。反应可表示如下：荧光反应 硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中被氧化生成有蓝色荧光的物质硫色素，溶于异丁醇中的硫色素显示深蓝色的荧光，在紫外光下更

2、为显著。此反应灵敏，特异性高，也可用于定量测定。反应如下： 2维生素 B2也属水溶性维生素，又名核黄素，其乙醇中性溶液和水溶液呈黄色，在中性或酸性溶液中经光照射自身可产生黄绿色荧光，在稀溶液中荧光的强度与核黄素的浓度成正比。核黄素能被亚硫酸盐还原成无色的二氢化物，失去荧光。但此氢化物在空气中易被重新氧化，恢复荧光。反应如下：三、实验器材试管和试管架、吸量管（1mL、2 mL） 、漏斗、滤纸。米糠四、实验试剂10.2%硫胺素溶液230 g / mL 核黄素溶液31% 铁氰化钾溶液430%氢氧化钠溶液52.5%亚硫酸氢钠溶液（用 2%碳酸钠作溶剂）6异丁醇70.2 mol/L 硫酸溶液8碳酸氢钠碱

3、性溶液：取氢氧化钠 20 g 溶于 600 mL 蒸馏水中，加碳酸氢钠 28.8 g，混匀后，用水稀释至 1 000 mL。9重氮试剂：溶液 A：将对氨基苯磺酸 1 g 溶解于 15 mL 浓盐酸中，然后加水稀释至100 mL。溶液 B：将亚硝酸钠 0.5 g 溶解于水中，稀释到 100 mL。现用现配。需用时，将 3 mL 溶液 B 加到 100 mL 溶液 A 中，混匀即得重氮试剂，在冰浴中保存，至少 15 min 后方可使用。此溶液配好后，存放时间不能超过 24 h。 五、操作步骤(一)维生素 B1的定性1重氮化反应 取米糠 1 g 置试管中，加 0.2 mol/L 硫酸溶液 5 mL，

4、用力振荡，提取硫胺素。放置 10 min 后，用滤纸过滤。取滤液 1 mL，加入碳酸氢钠碱性溶液 1.5 mL，摇匀后，在 10 min 内观察深红色的出现。2荧光反应 取 1 支试管加入硫胺素溶液 2 mL、铁氰化钾溶液 2 mL、30%氢氧化钠溶液 1 mL 充分混匀后，再加入 2 mL 异丁醇，充分振荡，待两相分开后，仔细观察上层异丁醇溶液中的蓝色荧光。(二)维生素 B2的定性取 2 支试管，各加入核黄素溶液 1 mL，观察其黄绿色荧光。在一管中加入510 滴亚硫酸氢钠溶液，比较两管的荧光。充分摇动后，再观察两管的荧光变化。紫外灯下观察，现象更加明显。六、问题与思考1硫胺素的荧光反应为什么要在碱性条件下进行？2在实验中将核黄素还原成无色的二氢化物，还可以使用什么试剂？