人工授精实验室管理规范

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1、人工授精实验室管理规范猪人工授精站实验室是精液检查、处理、贮存的场所，为了生产出优质的、符合输精要求的精液，一定把好质量关，保证出站的每一瓶精液的活力不低于 0.7, 72 小时之内保存活率不受影响,特对实验室日常运作做如下规定。1、 实验室要求整洁、干净、卫生，每周彻底清洁一次；2、 非实验室工作人员在正常情况下不准进入实验室，采精员也不准随意进入实验室；3、 所有仪器设备应在仔细阅读说明书后，由专人按操作规程使用和维护保养；特别是高压蒸气灭菌器，双蒸水机使用时更应注意人身安全；4、 各种电器设备应按其要求选择适应插座，除冰箱、精液保存箱、等外，一般电器要求人走断电，干燥箱无人时设定温度不应

2、高于 100；5、 物品、器皿的清洗、消毒方法：所有器皿应以洗洁精或洗衣粉清洗干净，再以蒸馏水漂洗，60干燥（玻璃用品干燥温度可高于 100）后，以锡纸包扎器皿开口，玻璃器皿 180 1 小时进行干热灭菌，非耐热器皿、用具以高压灭菌器120、20 分钟湿热灭菌；6、 稀释液的配制、精液检查、稀释、分装一定按照人工授精操作规程进行；7、 实验室仪器设备保持清洁卫生：实验室内使用的仪器设备，如显微镜、干燥箱、水浴锅、17恒温精液保存箱、37恒温板、电子天平等，必然保持清洁卫生，每次使用完必后用擦镜纸将显微镜镜头（目镜和物镜）擦试干净，有条件的话可每 2 周用二甲苯浸泡一次，保持清洁；8、 采精室与

3、实验室之间的传递口的两侧窗只有在传递物品时才能按先后顺序开启使用；9、 实验室地板、实验台保持干净清洁；10、下班离开实验室前一定检查电源、水龙头、门、窗是否关闭好，做到万无一失方可离开实验室，确保安全；11、防火防盗，注意安全。12、平时门窗要关闭，有破损的地方及时修补，防止老鼠及飞鸟的侵入，以免实验室内受污染；采精的操作规程1、 采精员一手带双层手套，另一手持 37保温杯(内装 1 次性采精袋)用于收集精液；2、 饲养员将待采精的公猪赶至采精栏，用 0.1%高锰酸钾溶液清洗其腹部和包皮，再用温水（夏天用自来水）清洗干净，避免药物残留对精子的伤害；3、 采精员挤出公猪包皮积尿，按摩公猪包皮部

4、，刺激其爬跨假台畜；4、 公猪爬跨假台畜并逐步伸出阴茎，脱去外层手套，将公猪阴茎龟头导入空拳；5、 用手（大拇指与龟头相反方向）紧握伸出的公猪阴茎螺旋状龟头，顺其向前冲力将阴茎的“S 状弯曲拉直，握紧阴茎龟头防止其旋转，公猪即可射精；6、 用 24 张过滤纸过滤收集浓份精液于保温杯内的一次性采精袋内，最初射出的少量精液含精子很少，可以不必接取（有些公猪分 2-3 个阶段将浓份精液射出）直到公猪射精完毕，射精过程历时 5-15 分钟；7、 采精员应注意安全，一旦公猪出现攻击行为，采精员应立刻逃至安全角；8、 采精完必后，由采精员或饲养员彻底冲洗采精栏；9、 采精期间不准欧打公猪，防止出现性抑制；

5、10、采精频率：成年公猪每周 2-4 次，青年公猪（1 岁左右）每周 1 次，采精公猪的使用年限一般为 23 年。最好固定每头公猪的采精频率；11、公猪采精调教：后备公猪 7 月龄开始进行采精调教；每次调教时间不超过15 分钟；一旦采精获得成功，分别在第 2、3 天再采精 1 次，进行巩固掌握该技术；采精调教可采用发情母猪诱导、观摩有经验公猪采精、以发情母猪分泌物刺激等方法；调教公猪要有耐心，不准打骂公猪；注意安全。稀释液配制操作规程1、 将稀释粉倒入烧杯内，按比例加入双蒸馏水；2、 搅拌均匀并使其充分溶解（可用磁力搅拌器助其溶解） ；3、 将盛有稀释液的烧杯放入 37恒温水浴锅内，待用；4、

6、 稀释液最好现配现用，一次不宜配制太多，若有剩余可密封保存，超过有效贮存期的变质稀释液应废弃。精液品质的检查操作规程1、 精液量：以电子天平称量精液，按每克 1 毫升计，避免以量筒等转移精液盛放容器的方法测量精液体积；2、 颜色：正常的精液是乳白色或浅灰白，精子密度越高，色泽愈浓，其透明度愈低。如带有绿色或黄色是混有脓液或尿液，若带有淡红色或红褐色是含有血液。这样的精液应舍弃不用，会同兽医寻找原因；3、 气味：猪精液略带腥味，如有异常气味，应废弃；4、 pH 值（酸碱度）：以 PH 计测量（PH 计使用见说明书） ；5、 精子活率检查：活率是指呈直线运动的精子百分率，在显微镜下观察精子活率，一

7、般按 0.1-1.0 的十级评分法进行，鲜精活率要求不低于 0.7;6、 精子密度：指每毫升精液中所含的精子数，是确定稀释倍数的重要指标。可以用血细胞计数板进行计数或精液密度仪测定。血细胞计数板计数方法：以微量加样器取具有代表性原精液 100l，3%NaCl 900l,混匀，使之稀释 10 倍；在血细胞计数室上放一盖玻片，取 1 滴上述精液放入计数板的槽中，靠虹吸将精液吸入计数室内；在高倍镜下计数 5 个中方格内的精子总数，将该数乘以 50 万，即得原精液每毫升的精子数（即精液密度） 。精液密度测定仪使用见其说明书；7、 精子畸形率：畸形率是指异常精子的百分率，一般要求畸形率不超过 18，其测

8、定可用普通显微镜,但需伊红或姬姆萨染色,相差显微镜可直接观察活精子的畸形率,公猪使用过频或高温环境会出现精子尾部带有原生质滴的畸形精子;畸形精子种类很多,如:巨型精子、短小精子、双头或双尾精子，顶体膨胀或脱落、精子头部残缺或与尾部分离、尾部变曲。要求每头公猪至少每两周检查一次精子畸形率；8、 按要求做好精液品质检查登记表(公猪采精记录表)，以便查看公猪性能；精液的稀释操作规程1、 精液采集后应尽快稀释，原精贮存不超过 30 分钟；2、 未经品质检查或检查不合格（活力 0.7 以下）的精液不能稀释；3、 稀释液与精液要求等温稀释,两者温差不超过 0.5,以精液温度为标准,来调节稀释液的温度,绝不

9、能反过来操作；4、稀释时,将稀释液沿盛精液的杯(瓶)壁缓慢加入到精液中,然后轻轻摇动或用消毒玻璃棒搅拌,使之混合均匀，用力要轻微，防止精液受到冲击过大而死亡；5、 如作高倍稀释时,应先进行低倍稀释（1：1-2）,稍待片刻后再将余下的稀释液沿杯（瓶）壁缓慢加入,以防造成“稀释打击” ；6、 稀释倍数的确定：活率0.7 的精液,一般按每个输精剂量含 40 亿个总精子,输精量为 80-100ml 确定稀释倍数,例如: 某头公猪一次采精量是 200ml ,活力为0.8,密度为 2 亿/ml,要求每个输精剂量是含 40 亿精子,输精量为 80ml,则总精子数为 200ml2 亿/ml=400 亿,输精头

10、份为 400 亿40 亿=10 份，加入稀释液的量为 1080ml-200ml=600ml；7、 稀释后作精子活力检查,如果稀释前后活力一样,即可进行分装与保存,如果活力下降,说明稀释液的配制或稀释操作有问题,不宜使用,并应查明原因加以改进；精液的常温保存的操作规程1、 精液稀释后，检查精液活率，若无明显下降，按每头份 80-100ml 分装；2、 瓶上加盖密封，并在输精瓶上贴上标签，标签上写清楚公猪的品种、耳号，采精日期；3、 置 22-25的室温 1 小时后(或用几层毛巾包被好后)直接放置 17恒温冰箱中；4、 如需保存时间长，要求每 12 小时将精液混匀一次,防止精子沉淀而引起死亡；5、

11、 每天检查精液保存箱温度并进行记录，若出现停电应全面检查贮存的精液品质；6、 尽量减少保存精液保存箱关开次数,以免造成温度的变化对精子的打击而致死。发情鉴定技术的操作规程1、 母猪发情周期平均 21 天（19-23 天） ，大多数经产母猪一般在仔猪断奶后的一周内（3-7 天） ，可再次发情排卵，配种受胎；2、 母猪发情周期可分为发情前期、发情期、发情后期和间情期，母猪只有在发情期才允许公猪爬跨或称之为站立反应，此性行为表现可作为母猪适时输精的指标；3、 各期特征略述如下：发情前期：母猪举动不安，外阴肿胀，并由淡黄色变为红色这种变化在后备母猪较为明显；阴道有粘液分泌，其粘度渐渐增加。在此期母猪不

12、允许公猪爬跨，平均可有 2.7 天，不宜输精配种。发情期：平均约 2.5天，特征为母猪阴部肿胀及红色开始减退，分泌物也变浓厚，粘度增加。此时母猪允许压背而不动，压背时，母猪双耳竖起向后，后肢紧绷,尾巴上翘。发情后期：1-2 天,发情母猪的阴部完全回复正常，不允许公猪爬跨；间情期:13-14 天,完全恢复正常状态;4、 发情鉴定：每日最少要做两次试情（每天上午 6：30-8：30 和下午 16：00-17：30 进行发情检查） ，即在安静的环境下，有公猪在旁时，压背，以观察其站立反应。试情公猪一般选用善于交谈、唾液分泌旺盛、行动缓慢的老公猪；5、 作好发情检查的完整记录：包母猪括发情耳号、胎次、

13、发情时间、外阴部变化、压背反应等，尤其是后备母猪的记录。 输精操作规程1、 输精次数：第 1 次自然交配、第 2、3 次人工授精；2 次人工授精；3 次人工授精,可根据自场实际情况自行选择；2、 输精时间：断奶后 3-6 天发情的经产母猪，发情出现站立反应后 6-12 小时进行第 1 次输精配种；后备母猪和断奶后 7 天以上发情的经产母猪，发情出现站立反应，就进行配种（输精） ；3、 配制好的精液直接输精，若有以前剩余的精液要进行品质检查：从 17恒温保存箱取出的精液轻轻摇匀,用已灭菌的滴管取 1 滴放于预热的载玻片上,置于37的恒温板上片刻,用显微镜检查活力，精液活力0.7，才可进行输精；4

14、、 将试情公猪赶至待配母猪栏之前，尽量使母猪在输精时与公猪口鼻部可以接触；5、 输精人员消毒清洁双手；6、 用 0.1高锰酸钾水溶液清洁母猪外阴、尾根及臀部周围,再用温水浸湿毛巾，擦干外阴部；7、 从密封袋中取出没受任何污染的一次性输精管（手不应接触输精管前 2/3 部分） ，在其前端海锦头上涂上润滑液（也可用精液代替润滑剂） ；8、 将输精管沿 45 度角向上插入 3-4cm 之后，再水平并顺时针旋转插入母猪生殖道内，当感觉有阻力时，继续缓慢旋转同时前后移动，直到感觉输精管前端被锁定（轻轻回拉不动） ，并且确认真正被子宫颈锁定；9、 从精液贮存箱取出品质合格的精液，确认公猪品种、耳号；10、

15、缓慢颠倒摇均精液，用剪刀剪去瓶嘴，接到输精管上，开始进行输精；11、输精时可抚摸母猪的乳房或外阴、压背刺激母猪，使其子宫收缩产生负压，将精液吸纳；输精时勿将精液挤入母猪生殖道内，防止精液倒流；12、控制输精瓶的高低来调节输精时间，输精时间要求 3-7 分钟，输完一头母猪后，应在防止空气进入母猪生殖道的情况下，把输精管后端一小段折起，放在输精瓶中，使其滞留在生殖道内 5-10 分钟，再将输精管慢慢拔出；13、输精前检查海绵头是否松动，为防止子宫炎发生，每头母猪每次输精都应使用一条新的输精管；14、 每头母猪在一个发情期内要求至少输精两次，最好三次，两次输精时间间隔 8小时左右；15、认真登记母猪生产卡、配种记录